体外扩增基因编辑活化T细胞的培养方法、试剂盒及应用技术

本发明专利技术提供了一种体外扩增基因编辑活化T细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包含T细胞基础培养基，还包含：白细胞介素7(IL‑7)200‑1000IU/ml、白细胞介素21(IL‑21)300‑1000IU/ml、抗CD40单克隆抗体80‑120ng/ml、丝氨酸0.2‑1.0mmol/ml和S‑2‑羟戊二酸0.3‑1.0mmol/ml。本发明专利技术还提供了含上述培养基的试剂盒以及利用上述培养基进行体外扩增基因编辑活化T细胞的方法以及在培养T细胞方面的应用。利用本发明专利技术的培养基，在无需加入异体血清及其他活化T细胞因子的条件下可以大量扩增基因编辑活化T细胞。本发明专利技术方法能够激活扩增T细胞500‑1000倍，明显高于现有技术。

Culture method, kit and application of in vitro amplification gene editing activation T cell

The invention provides a method for in vitro gene editing culture medium for the activation of T cells, which is characterized in that the culture medium contains T cell culture medium, also includes: interleukin 7 (IL 7) 200 1000IU/ml, interleukin 21 (IL 21) 300, anti 1000IU/ml CD40 120ng/ml, 80 monoclonal antibody 1.0mmol/ml and S serine 0.2 2 hydroxyglutarate 0.3 1.0mmol/ml. The present invention also provides a kit containing the culture medium, and a method for activating and amplifying T cells in vitro by using the culture medium, and the application in culturing T cells. By using the culture medium of the invention, a large number of gene editing activation T cells can be amplified without the addition of allogeneic serum and other activated T cytokines. The method of the invention can activate the amplification of T cells in 500 1000 times, significantly higher than the existing technology.

【技术实现步骤摘要】
体外扩增基因编辑活化T细胞的培养方法、试剂盒及应用
本专利技术属于生物技术及细胞培养
，具体涉及一种体外扩增基因编辑活化T细胞的培养方法、试剂盒及其应用。包括但不限于采用ZFN、TALEN、CRISPR-CAS9等基因组编辑技术所构建的功能活化的T细胞培养方法、试剂盒及其应用。
技术介绍
随着免疫学研究的不断深入，肿瘤免疫治疗取得巨大进展。肿瘤免疫治疗通过激发或调动患者自身的免疫系统，增强肿瘤微环境抗肿瘤免疫力，从而控制和杀伤肿瘤细胞，肿瘤免疫治疗也被认为是继手术、放疗、化疗后第四大肿瘤治疗技术。近十年来，以过继细胞免疫疗法(adoptivecelltherapy，ACT)和免疫检查点疗法(immunecheckpointtherapy)为代表的肿瘤免疫治疗方法取得了突破性进展，显示出良好的应用前景，标志着肿瘤治疗新时代的开启。在肿瘤免疫治疗方案中，T淋巴细胞处于中心地位。体内肿瘤特异性的细胞免疫功能的低下是肿瘤逃避免疫系统的监视无限制生长的重要原因之一。细胞生物治疗技术将自体免疫细胞经过体外诱导、分化、扩增再回输至体内，绕过体内肿瘤免疫屏障机制，通过激发机体的免疫反应来对抗、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外扩增基因编辑活化T细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包含T细胞基础培养基，还包含：白细胞介素7(IL‑7)200‑1000IU/ml、白细胞介素21(IL‑21)300‑1000IU/ml、抗CD40单克隆抗体80‑120ng/ml、丝氨酸0.2‑1.0mmol/ml和S‑2‑羟戊二酸0.3‑1.0mmol/ml。

【技术特征摘要】
1.一种体外扩增基因编辑活化T细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包含T细胞基础培养基，还包含：白细胞介素7(IL-7)200-1000IU/ml、白细胞介素21(IL-21)300-1000IU/ml、抗CD40单克隆抗体80-120ng/ml、丝氨酸0.2-1.0mmol/ml和S-2-羟戊二酸0.3-1.0mmol/ml。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基包含T细胞基础培养基，还包含：白细胞介素7(IL-7)500IU/ml、白细胞介素21(IL-21)550IU/ml、抗CD40单克隆抗体100ng/ml、丝氨酸0.45mmol/ml和S-2-羟戊二酸0.5mmol/ml。3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基为RPMI-1640培养基。4.包含权利要求1～3所述的培养基的试剂盒。5.一种体外扩增基因编辑活化T细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)对经基因修饰后的T细胞进行预培养，培养时，所用培养基包含基础培养基，还包含抗CD40单克隆抗体80-120ng/ml；(2)预培养后，向步...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓涛，喻堃，徐国锋，卢铀，
申请(专利权)人：成都美杰赛尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51