一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法技术方案

本发明专利技术提供了一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法使用该方法能够简单灵敏实时进行丙型肝炎病毒(HCV)病毒感染的检测，能清晰准确的显示被感染细胞，可应用于感染细胞筛选及抗HCV病毒药物的高通量筛选。

Cell modification method of a new visual reporting system for HCV virus infection

The invention provides a novel construction of HCV virus infection visualization report system cells modification method using this method enables simple and sensitive real-time for hepatitis C virus (HCV) detection of virus infection, can clearly display the infected cells, which can be applied to the infected cells and high-throughput screening of anti HCV drugs screening.

【技术实现步骤摘要】
一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法。
技术介绍
1989年人类首次发现并克隆了丙型肝炎病毒(HepatitisCVirus，HCV)(Chooetal,Science,1989)，经过20多年的研究，人们逐渐在其分子生物学特性、致病机理及与宿主的关系上取得较大进展。同时HCV带来的危害也逐渐被人们所认知，根据世界卫生组织统计，目前全球HCV感染率为3％，并且多数患者会转为持续感染，继而诱发肝硬化、肝纤维化和肝癌，已成为威胁人类健康的主要病原之一。HCV属于黄病毒科肝炎病毒属。HCV经血液传播，主要通过输血和血制品传播，也可以通过破损的皮肤与粘膜传播。目前HCV最常用的治疗手段为干扰素(PEG-IFN)和利巴韦林(Ribavirin)，但是该方法不仅治疗费用昂贵，而且副作用强，易导致肌痛、关节痛、头痛等，同时50％的患者无法根除病毒。虽然有高效的直接抗病毒药物上市，但是极高的价格无法惠及众多患者。而且HCV的基因组差异较大，已发现7种基因型及多个亚型，同时由于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白包括相互独立的第一融合蛋白和第二融合蛋白，所述第一融合蛋白的结构如下式I所示：NLS‑Pn‑In，   (I)；所述第二融合蛋白的结构如下式II所示：Ic‑Pc‑NLS‑IPS，   (II)；其中，NLS为核定位信号；IPS为线粒体定位信号；In为内含肽N端片段，Ic为内含肽C端片段；Pn为报告蛋白N端片段，Pc为报告蛋白C端片段；并且，当第一融合蛋白和第二融合蛋白空间接触时，所述In和Ic结合时形成具有活性的内含肽，所述内含肽剪接Pn和Pc，从而使Pn和Pc结合形成具有报告蛋白特性的多肽；优选地，所述第二融合蛋白中包括切割位点，所述切割位点位于IPS内...

【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白包括相互独立的第一融合蛋白和第二融合蛋白，所述第一融合蛋白的结构如下式I所示：NLS-Pn-In，(I)；所述第二融合蛋白的结构如下式II所示：Ic-Pc-NLS-IPS，(II)；其中，NLS为核定位信号；IPS为线粒体定位信号；In为内含肽N端片段，Ic为内含肽C端片段；Pn为报告蛋白N端片段，Pc为报告蛋白C端片段；并且，当第一融合蛋白和第二融合蛋白空间接触时，所述In和Ic结合时形成具有活性的内含肽，所述内含肽剪接Pn和Pc，从而使Pn和Pc结合形成具有报告蛋白特性的多肽；优选地，所述第二融合蛋白中包括切割位点，所述切割位点位于IPS内部和/或所述NLS和所述IPS之间。2.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包括编码所述第一融合蛋白的多核苷酸和/或编码所述第二融合蛋白的多核苷酸。3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求2所述的多核苷酸。4.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求3所述的表达载体，或者在基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(1)权利要求1所述的重组蛋白；(2)编码所述第一融合蛋白的第一多核苷酸和/或编码所述第二融合蛋白的第二多核苷酸；(3)包含编码所述第一融合蛋白的多核苷酸的第一载体和/或包含编码所述第二融合蛋白的多核苷酸的第二载体；和/或(4)权利要求4所述的宿主细胞。6.一种构建基因工程细胞的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)提供一宿主细胞，将外源的表达第一融合蛋白的多核苷酸导入所述宿主细胞，从而使所述宿主细胞表达所述第一融合蛋白；(2)将外源的表达第二融合蛋白的多核苷酸导入所述宿主细胞，从而使...

【专利技术属性】
技术研发人员：龙钢，赵凡凡，马鹏娟，杨再立，蒋望，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31