本发明专利技术公开了一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，旨在提供一种操作简单，方法可行的通经活络胶囊中微生物限度检查方法，其技术要点依次包括下述步骤：1)菌液制备；2)供试液制备；3)确定采用稀释法进行需氧菌总数的测定、采用常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定；4)控制菌检验方法的建立及验证，属于化学检测技术领域。
A method for microbial limit test of Tongjing Huoluo capsule
The invention discloses a method for microbial limit test of Tongjing Huoluo capsule, designed to provide a simple, feasible method for dredging collaterals method for microbial limit test of the capsule, the technical points sequentially comprises the following steps: 1) 2) bacteria liquid preparation; sample preparation; 3) were measured by conventional determination method total aerobes were determined the total number of molds and yeasts by dilution method; 4) establishment and validation of the control bacteria test method, which belongs to the technical field of chemical detection.
【技术实现步骤摘要】
一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法
本专利技术涉及一种微生物限度检查方法，尤其是一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，属于化学检测
技术介绍
孕坤通胶囊为治疗血瘀证不孕女性，具有活血化瘀、通经活络的功效，药品含有赤芍、没药、败酱草、路路通、枳实、泽泻等成分。根据其用药途径和制法，应进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定，及控制菌——大肠埃希菌检查。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种操作简单，方法可行的通经活络胶囊中微生物限度检查方法。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是这样的：一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，所述胶囊为孕坤通胶囊，该方法依次包括下述步骤：1)菌液制备取经33℃培养24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养液及25℃培养24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为1000～10000cfu/ml的菌悬液，备用；取经25℃培养7天的黑曲霉沙氏葡萄糖琼脂斜面，加入5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，用带有棉花的球形吸管吸出孢子悬液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成含孢子数为1000～10000cfu/ml的孢子悬液，备用；2)供试液制备取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液；3)方法建立及回收率试验确定采用稀释法进行需氧菌总数的测定、采用常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定；4)控制菌检验方法的建立及验证采用常规法进行控制菌的检查。进一步的，上述的一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，所述的常规法依次包括下述步骤：试验组：吸取1:10供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；供试品组：吸取1:10供试液1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；稀释剂组：吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；各平皿倾注规定的琼脂培养基，待凝固后，分别置培养3－5d，测定需氧菌总数、霉菌和酵母菌数，计算其回收率。进一步的，上述的一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，所述的稀释法依次包括下述步骤：供试液制备取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液；吸取1:10供试液20ml加入80ml胰酪大豆胨液体培养基中，摇匀制成1:50供试液；试验组：吸取1:50供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿；菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；供试品组：吸取1:50供试液1ml至平皿，平行制备2个平皿，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；各平皿倾注规定的琼脂培养基，待凝固后，分别置培养3d，测定需氧菌总数，计算其回收率。控制菌检验方法的建立及验证依次包括下述步骤：1)菌种取经33℃培养24h的大肠埃希菌胰酪大豆胨液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为10～100cfu/ml的菌悬液，备用；2)供试液制备取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液3)试验方法：取供试品组样品做控制菌检查法检查；阳性对照试验取供试品组，并加入相应的阳性菌菌液1ml进行培养，作相应控制菌检查法检查；取稀释液10ml代替做控制菌检查法检查，作为阴性对照。进一步的，上述的一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，所述的大肠埃希菌检测方法依次包括下述步骤：取1：10供试液10ml接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，33℃培养24h；取培养物1.0ml，接种至100ml麦康凯液体培养基中，44℃培养24h，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板，33℃培养24h，观察其菌落形态。本专利技术与现有技术相比，具有以下优势：本专利技术提供的方法，采用稀释法(1:50)进行需氧菌总数的测定、采用常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定，采用常规法进行控制菌的检查。经对所采用的方法进行适用性试验，符合2015年版《中国药典》四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、1107非无菌药品微生物限度标准的有关规定，方法可行。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的权利要求书做进一步说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何对本专利技术做有限次修改可得的技术方案仍然属于本专利技术所要保护的范围。实施例11、实验用品1.l仪器设备生物安全柜、生化培养箱、全自动压力灭菌器、电热恒温干燥箱、电冰箱、微波炉、恒温水浴箱、电子天平(感量0.1g)、ThermoScientificMaxiMixII涡旋振荡器、气浴恒温振荡器。1.2玻璃器皿锥形瓶、平皿、烧杯、分度吸管、试管及硅胶塞，均于180℃干热灭菌2h或高压蒸汽121℃灭菌15min。1.3用具无菌衣、帽、口罩、手套、皮乳头、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、灭菌不锈钢药匙、试管架、打火机、记号笔、实验记录纸等。1.4试液及培养基l.4.1消毒液0.1％苯扎溴铵溶液(供洗手、擦拭操作台面用)，5％苯酚溶液(配好后装入玻璃消毒缸内供消毒带菌吸管用)、75％乙醇溶液、碘伏溶液。1.4.2稀释剂0.9％无菌氯化钠溶液(稀释菌液用)、含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液、胰酪大豆胨液体培养基(稀释供试品用)。1.4.3培养基胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基、。1.5样品孕坤通胶囊，批号：20161212、20161213、20161214，生产厂家：南宁协和医院2、需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验的建立及验证2.1菌种铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[CMCC(B)10104]金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]枯草芽孢杆菌(BacillusSulticis)[CMCC(B)63501]白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]黑曲霉(Aspeigillusniger)[CMCC(F本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，其特征在于，所述胶囊为孕坤通胶囊，该方法依次包括下述步骤：1)菌液制备取经33℃培养24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养液及25℃培养24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为1000～10000cfu/ml的菌悬液，备用；取经25℃培养7天的黑曲霉沙氏葡萄糖琼脂斜面，加入5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，用带有棉花的球形吸管吸出孢子悬液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成含孢子数为1000～10000cfu/ml的孢子悬液，备用；2)供试液制备取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液；3)方法建立及回收率试验确定采用稀释法进行需氧菌总数的测定、采用常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定；4)控制菌检验方法的建立及验证采用常规法进行大肠埃希菌检查；步骤3)所述的常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定依次包括下述步骤：试验组：吸取1:10供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；供试品组：吸取1:10供试液1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；稀释剂组：吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；各平皿倾注琼脂培养基，待凝固后，分别置培养3－5d，测定需氧菌总数、霉菌和酵母菌数，计算其回收率。步骤3)所述的所述的稀释法依次包括下述步骤：供试液制备取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液；吸取1:10供试液20ml加入80ml胰酪大豆胨液体培养基中，摇匀制成1:50供试液；试验组：吸取1:50供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿；菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；供试品组：吸取1:50供试液1ml至平皿，平行制备2个平皿，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；各平皿倾注琼脂培养基，待凝固后，分别置培养3d，测定需氧菌总数，计算其回收率。...
【技术特征摘要】
1.一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，其特征在于，所述胶囊为孕坤通胶囊，该方法依次包括下述步骤：1)菌液制备取经33℃培养24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养液及25℃培养24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为1000～10000cfu/ml的菌悬液，备用；取经25℃培养7天的黑曲霉沙氏葡萄糖琼脂斜面，加入5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，用带有棉花的球形吸管吸出孢子悬液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成含孢子数为1000～10000cfu/ml的孢子悬液，备用；2)供试液制备取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液；3)方法建立及回收率试验确定采用稀释法进行需氧菌总数的测定、采用常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定；4)控制菌检验方法的建立及验证采用常规法进行大肠埃希菌检查；步骤3)所述的常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定依次包括下述步骤：试验组：吸取1:10供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；供试品组：吸取1:10供试液1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；稀释剂组：吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；各平皿倾注琼脂培养基，待凝固后，分别置培养3...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗达龙，黄林杰，李夷君，覃蓝，陈学松，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45
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