毛钩藤碱的应用制造技术

本发明专利技术公开一种毛钩藤碱的应用，将所述毛钩藤碱用于制备治疗肺癌的药物。本发明专利技术通过体外肺癌培养实验，结果证明毛钩藤碱对肺癌细胞具有浓度及时间依赖性的抑制其生长的作用，通过线粒体损伤途径诱导肺癌细胞的凋亡；裸鼠肺癌荷瘤模型实验表明，毛钩藤碱可抑制裸鼠肿瘤的生长；同时细胞与动物实验都表明毛钩藤碱毒性低。

Application of Uncaria

The present invention discloses the application of Uncaria base, and is used for preparing medicine for treating lung cancer. The invention of lung cancer by in vitro culture experiments results show that the inhibition of hirsutine with concentration and time dependent on lung cancer cell growth, apoptosis through mitochondrial damage pathway induced by lung cancer cell; experiment showed that tumor bearing nude mouse model of lung cancer, hirsutine can inhibit tumor growth and cell and animal experiments; show hirsutine low toxicity.

【技术实现步骤摘要】
毛钩藤碱的应用
本专利技术涉及医药领域，主要涉及毛钩藤碱的应用。
技术介绍
肺癌是目前全世界范围内发病率、病死率最高的恶性肿瘤之一。目前临床上药物的治疗主要是采用化疗及外科手术治疗，但对于该疾病控制和治疗还依赖于更多有效药物的发现。传统的化疗药物是细胞毒性药物，在杀伤肿瘤细胞的同时也作用于正常细胞，因此毒副作用大。线粒体是细胞产生能量的主要细胞器，机体内肿瘤细胞的异常增殖依赖于高能量的获取，因此通过选择性地诱导肿瘤细胞线粒体损伤导致细胞凋亡，抑制肿瘤的生长是治疗肿瘤最直接、最有效的途径。毛钩藤碱是一种钩藤属植物中的生物碱成分，现有研究表明其在心血管保护、抗高血压、抗心律失常方面具有很好的作用。至今，尚未见毛钩藤碱在通过线粒体损伤途径诱导肺癌细胞的凋亡，进而抑制肿瘤生长的报道。
技术实现思路
鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种毛钩藤碱的应用，具体在于毛钩藤碱通过线粒体损伤途径诱导肺癌细胞的凋亡，进而对肿瘤产生抑制作用，旨在提供毛钩藤碱在肿瘤治疗方面的新用途。本专利技术的技术方案如下：一种毛钩藤碱的应用，其中，将所述毛钩藤碱用于制备治疗肺癌的药物。所述的毛钩藤碱的应用，其中，所述药物的剂型为注射剂型。所述的毛钩藤碱的应用，其中，所述药物中还包括药物辅料，药物辅料为能溶解难溶性药物的药物辅料。所述的毛钩藤碱的应用，其中，所述药物辅料为包括丙二醇、β环糊精中的一种或几种。所述的毛钩藤碱的应用，其中，注射剂的剂量为1~3mg·kg-1/day。有益效果：本专利技术中提供了毛钩藤碱及其制剂在肺癌治疗方面的新用途，毛钩藤碱为一种副作用少，毒性低的天然抗肺癌药物。本专利技术通过体外肺癌培养实验，结果证明毛钩藤碱对肺癌细胞具有浓度及时间依赖性抑制其生长的作用，可通过诱导细胞线粒体损伤途径促进肺癌细胞凋亡；裸鼠肺癌荷瘤模型实验表明，毛钩藤碱可抑制裸鼠肿瘤的生长；同时细胞与动物实验都表明毛钩藤碱毒性低。所述的毛钩藤碱可作为治疗肺癌的新候选药物。附图说明图1为本专利技术实施例1中不同浓度的毛钩藤碱作用于癌细胞24h的细胞存活率的结果图。图2为本专利技术实施例1中80μM毛钩藤碱作用于癌细胞不同时间细胞存活率的结果图。图3为本专利技术实施例1中80μM毛钩藤碱作用于癌细胞不同时间的细胞形态的结果图。图4为本专利技术实施例2中不同浓度的毛钩藤碱作用于癌细胞24h细胞凋亡率的结果图。图5为本专利技术实施例2中80μM毛钩藤碱作用于癌细胞不同时间细胞凋亡率的结果图。图6为本专利技术实施例2中不同浓度的毛钩藤碱作用癌细胞24h凋亡蛋白C-PARP、C-Caspase-3的表达量结果图。图7为本专利技术实施例2中80μM毛钩藤碱作用于癌细胞不同时间凋亡蛋白C-PARP、C-Caspase-3的表达量结果图。图8为本专利技术实施例3中不同浓度毛钩藤碱作用于细胞24hATP相对含量的结果图。图9为本专利技术实施例3中不同浓度毛钩藤碱作用于细胞24h细胞浆内CytoC的表达结果图。图10为本专利技术实施例3中不同浓度毛钩藤碱作用24h细胞的膜电位水平的结果图。图11为本专利技术实施例4中80μM毛钩藤碱作用于不同细胞24h的凋亡率的结果图。图12为实施例5中对照组和实验组中裸鼠的体重测量结果图。图13为实施例5中对照组和实验组中肿瘤体积的测量结果图。图14为实施例5中对照组和实验组中肿瘤体积的实物图。具体实施方式本专利技术提供一种毛钩藤碱的应用，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。毛钩藤碱的结构式如下式所示：本专利技术中，研究发现毛钩藤碱可通过线粒体损伤途径诱导肺癌细胞的凋亡进而达到抑制肺癌的生长，并且毒副作用小，有望成为一种治疗肺癌的候选药物。本专利技术中通过体外肺癌细胞培养实验，结果证明毛钩藤碱对肺癌细胞具有浓度及时间依赖性抑制其生长的作用，可通过线粒体损伤途径诱导肺癌细胞的凋亡；裸鼠肺癌荷瘤模型实验表明，毛钩藤碱可抑制裸鼠肿瘤的生长；同时细胞与动物实验都表明毛钩藤碱毒性低。因此，在本专利技术中提供毛钩藤碱的应用，将所述毛钩藤碱用于制备治疗肺癌的药物。进一步地，所述药物的剂型为注射剂型。所述药物中还包括药物辅料，药物辅料为能溶解难溶性药物的辅料，具体可以包括由丙二醇、β环糊精等中的一种或几种组成。注射剂的浓度，换算到人体应为D=1~3mg·kg-1/day。以下通过实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1：毛钩藤碱可抑制肿瘤细胞的生长1．细胞培养人肺癌A549细胞培养在DMEM＋10％胎牛血清（FBS）完全培养基中进行。细胞培养在温度37℃、5％浓度的CO2及饱和湿度的细胞培养箱中。2．实验方法及结果将A549肿瘤细胞系状态稳定后，将细胞铺于96孔板中，每孔5000个细胞，每孔含完全培养基90μL。人肺癌A549细胞按以下方式分组并处理：（1）对照组：完全培养基溶液10μL处理；（2）毛钩藤碱组：用DMSO溶解配制成不同的浓度，每孔中加10μL，使培养基的终浓度为100、80、60、40、20、0μM（μmol/L）的毛钩藤碱溶液，处理不同时间（1、3、6、9、12、24h）后，每孔中加入20μL磷酸盐缓冲溶液（PBS溶液）配制的5mg/mL的噻唑蓝（MTT）溶液继续培养4小时。吸走上层培养基，每孔中加入150μL二甲亚砜（DMSO）进行溶解，振荡器上溶解10分钟后，用酶标仪在A570处检测吸光度值，细胞存活率根据以下公式计算：细胞存活百分率＝（处理组吸光度－空白孔吸光度）÷（对照组吸光度－空白孔吸光度）×100%。实验结果见图1、图2和图3。图1中，纵坐标表示细胞存活率，即处理组相对于对照组的细胞存活率；图1横坐标为不同浓度的毛钩藤碱处理24h后的细胞平均存活率。图2中，纵坐标表示细胞存活率，横坐标为毛钩藤碱80μM处理作用不同时间。图柱对应的值为各组的平均值。图3为毛钩藤碱80μM处理作用不同时间人肺癌A549细胞的形态图。从图1中可见，随着毛钩藤碱药物浓度的增加，肺癌细胞的生存率降低；图2中可见，随着作用时间的增加，肺癌细胞的生存率也降低。表明毛钩藤碱对肺癌A549细胞的作用成浓度和时间依赖性。同时在图3中，还能直观地观察到，随着毛钩藤碱对肺癌细胞作用时间增长，人肺癌A549细胞的形态发生了明显的变化，24h后成聚集抱团生长的细胞分散生长，细胞完整形态消失。实施例2：毛钩藤碱可诱导肿瘤细胞凋亡1.细胞培养：同实施例1。2．实验方法及结果将A549肿瘤细胞系状态稳定后，将细胞铺于6孔板中，每孔100000个细胞，每孔含完全培养基2mL。按以下方式分组并处理：（1）对照组：完全培养基溶液10μL处理；（2）毛钩藤碱组：用DMSO溶解配制成不同的浓度，每孔中加10μL，使培养基的终浓度为100、80、60、40、20、0μM（μmol/L）的毛钩藤碱溶液，处理不同时间（1、3、6、9、12、24h）后，根据需要进行不同操作。采用流式细胞技术检测不同浓度及不同作用时间后细胞的凋亡情况，收集细胞、PBS漂洗、加入AnnexinV-FITC及碘化丙啶避光孵育15min，流式细胞仪检测；同时采用蛋白免疫印迹技术检测不同浓度及不同作用时间后对细胞凋亡蛋白的影响，细胞刮收集细胞、裂解细胞、测蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种毛钩藤碱的应用，其特征在于，将所述毛钩藤碱用于制备治疗肺癌的药物。

【技术特征摘要】
1.一种毛钩藤碱的应用，其特征在于，将所述毛钩藤碱用于制备治疗肺癌的药物。2.根据权利要求1所述的毛钩藤碱的应用，其特征在于，所述药物的剂型为注射剂型。3.根据权利要求2所述的毛钩藤碱的应用，其特征在于，所述药物中还包括药物辅料，药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蓉，李国兵，唐勤，黄景彬，张倩，刘亚丽，胡长鹏，王庆，周丽，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：重庆,50