K-卡拉胶寡糖单体及其制备方法技术

一种Ｋ－卡拉胶寡糖单体，其特征是聚合度Ｄｐ＝７－２５的Ｋ－卡拉胶寡糖，它们的分子式分别为Ｃ↓［１８＋１２ｎ］Ｈ↓［２８＋１７ｎ］Ｏ↓［２１＋１２ｎ］Ｓ↓［２＋ｎ］Ｎａ↓［２＋ｎ］（其中ｎ＝２－１１）；它们的分子量依次为１５０６，１９１４，２３２２，２７３０，３１３８，３５４６，３９５４，４３６２，４７７０，５１７８。制备时将Ｋ－卡拉胶用酸降解，用碱中和，浓缩，醇沉，洗涤，再以碳酸氢铵溶液为流动相，用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　　３０柱进行分离。本发明专利技术一次分离即可得到聚合度为７－２５的所有奇数Ｋ－卡拉胶寡糖，无需再用离子交换色谱法进一步分离，大大简化了工艺操作和提高了寡糖的制备效率。本发明专利技术以碳酸氢铵作为流动相，因其容易挥发，克服了寡糖单体样品制备中除盐的困难。本发明专利技术获得的Ｋ－卡拉胶寡糖单体可用于制备寡糖标准试剂和作为寡糖中间体进一步制备成糖类药物。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种K-卡拉胶寡糖，具体地说是涉及一种聚合度为7-25的。
技术介绍
卡拉胶是某些红藻类的细胞壁多糖，是由半乳糖及半乳糖衍生物构成的半乳聚糖硫酸酯，其中K-卡拉胶是由1，3-连接的4-硫酸基-β-D-半乳糖与1，4-连接的3，6-内醚-α-D-半乳糖交替连接而成的聚合物。卡拉胶由于是一种天然聚阴离子硫酸多糖，广泛应用于医药、食品、农业和日用化工等领域。近些年来，卡拉胶寡糖及其衍生物的许多重要生物学功能和生理活性逐渐被人们所认识，在抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗凝血和抗溃疡等方面都显示出良好的应用前景。如日本专利JP3-170406A公开了一种以K-卡拉胶酸水解产物为有效成分的抗菌剂。但目前有关卡拉胶寡糖的降解制备技术和专利中，得到的是寡糖的混合物，不利于进一步开展寡糖结构与活性即构效关系的深入研究，不利于从分子水平来研究K-卡拉胶寡糖及其衍生物与疾病发生发展的关系及其作用机理，从而指导新药的研究与开发，因此有关K-卡拉胶寡糖单体的制备是十分必要的。但如果采用化学合成的方法来制备K-卡拉胶寡糖单体，特别是聚合度(Dp)＞10以上的寡糖单体合成，因涉及活性基团的保护、糖单位的连接方式和立体构型等一系列问题，其技术难度和合成成本都是令人难以接受的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，用它制备的寡糖单体能满足现有技术的上述需求。一种K-卡拉胶寡糖单体，其特征是聚合度Dp＝7-25的K-卡拉胶寡糖，它们的分子式分别为C18+12nH28+17nO21+12nS2+nNa2+n，式中n＝2-11，结构式如下所示 式中n＝2-11一种K-卡拉胶寡糖单体的制备方法，包括将K-卡拉胶用酸降解，用碱中和，浓缩，醇沉，洗涤，再经柱层析分离，按洗脱峰合并收集，浓缩，干燥，其特征是柱层析分离采用示差检测器检测，以碳酸氢铵溶液为流动相，用Superdex 30柱进行分离。本专利技术采用Superdex 30柱进行分离，一次即可得到聚合度为7-25的所有奇数K-卡拉胶寡糖，无需再用离子交换色谱法进一步分离，大大简化了工艺操作和提高了寡糖的制备效率。本专利技术采用碳酸氢铵作为流动相，因其容易挥发，经反复浓缩可基本除去，大大克服了寡糖单体样品制备中除盐的困难，提高了产品的品质。同时，本专利技术克服了现有合成技术难以制备大量寡糖的困难，为进一步开展寡糖及其衍生物的构效关系和作用机理研究以及在指导新药的研究与开发方面，都具有重要的现实意义。本专利技术获得的K-卡拉胶寡糖单体还可用于制备寡糖标准试剂和作为寡糖中间体进一步制备成糖类药物。附图说明及具体实施例方式下面结合附图和具体实施例来对本专利技术做进一步的说明。附图1为本专利技术制备K-卡拉胶寡糖的洗脱曲线图。附图2为本专利技术制备K-卡拉胶7-21糖的红外光谱图。附图3为本专利技术制备K-卡拉胶九糖的ESI/MS质谱图。附图4为本专利技术制备K-卡拉胶九糖的核磁共振图实施例将K-卡拉胶用0.05-1.0M的酸在60-100℃降解20-180min后，用碱中和，旋转浓缩后，用醇沉淀，洗涤，再用示差检测器进行检测，以0.05-0.5M的碳酸氢铵为流动相，用Superdex 30柱进行分离，按洗脱峰合并收集，浓缩，然后冷冻干燥即得。共10种卡拉胶单体寡糖，它们的分子量依次为1506，1914，2322，2730，3138，3546，3954，4362，4770和5178。其中所述的酸为盐酸、硫酸、硝酸和草酸；碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾。从图1可以看出，聚合度为7-25的所有奇数K-卡拉胶寡糖都得到了良好的分离。从图2中可以看出，各寡糖在1253cm-1和848cm-1处都有强吸收峰，分别为4-硫酸基-β-D-半乳糖中S＝O伸缩振动和C-O-S的特征吸收，在924cm-1处的吸收峰为α-D-3，6内醚半乳糖的特征吸收，表明本专利技术制备的为K-卡拉胶系列寡糖。图3中1891为-峰，推算其分子量为1914，与K-卡拉胶九糖的分子量相符对其碎片离子进行进一步分析表明其含有五个G4S和四个AnGal糖残基，为K-卡拉胶九糖。图4中K-卡拉胶九糖各碳的信号归属如表1。表1K-卡拉胶九糖的核磁共振图碳信号归属. Residue C1 C2C3C4C5C6αG4Sre86.2 69.2 76.5 76.2 - 60.9βG4Sre94.2 69.0 78.3 74.5 - 61.0G4Sint102.3 68.9 75.5 - 76.2 -α-G4Snre102.5 - 73.3 77.9 71.6 61 .3AnGal 89.3 - - - - -adjacent to α reAnGal 89.9 - - - - -adjacent to β reAnGal 89.9 68.9 78.8 78.3 77.7 68.9权利要求1 一种K-卡拉胶寡糖单体，其特征是聚合度Dp＝7-25的K-卡拉胶寡糖，它们的分子式分别为C18+12nH28+17nO21+12nS2+nNa2+n，式中n＝2-11，结构式如下所示 式中n＝2-112 一种K-卡拉胶寡糖单体的制备方法，包括将K-卡拉胶用酸降解，用碱中和，浓缩，醇沉，洗涤，再经柱层析分离，按洗脱峰合并收集，浓缩，干燥，其特征是柱层析分离采用示差检测器检测，以碳酸氢铵溶液为流动相，用Superdex 30柱进行分离。3 如权利要求2中所述的方法，其特征是所述的酸为盐酸、硫酸、硝酸和草酸；碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾。全文摘要一种K－卡拉胶寡糖单体，其特征是聚合度Dp＝7－25的K－卡拉胶寡糖，它们的分子式分别为C文档编号C08B37/00GK1513880SQ03138968公开日2004年7月21日 申请日期2003年8月4日 优先权日2003年8月4日专利技术者于广利, 赵峡, 王长云, 管华诗 申请人:中国海洋大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Ｋ－卡拉胶寡糖单体，其特征是聚合度Ｄｐ＝７－２５的Ｋ－卡拉胶寡糖，它们的分子式分别为Ｃ↓［１８＋１２ｎ］Ｈ↓［２８＋１７ｎ］Ｏ↓［２１＋１２ｎ］Ｓ↓［２＋ｎ］Ｎａ↓［２＋ｎ］，式中ｎ＝２－１１，结构式如下所示：＊＊＊式中：ｎ ＝２－１１。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：于广利，赵峡，王长云，管华诗，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]