本发明专利技术涉及一种多价合成化合物在制备用于治疗涉及细胞增殖和／或血管生成下调的疾病，优选作为表面核仁素配体，或者治疗炎性疾病的药物中的用途，该化合物包含一个载体，在所述载体上至少三个假肽单元被接枝，该化合物符合通式（Ⅰ），其中每个Ｘ独立代表任何氨基酸；Ｙ↓［１］和Ｙ↓［２］独立选自具有碱性侧链的氨基酸；Ｚ选自脯氨酸，可选地在≠、－或．．被取代；天然的或非天然的Ｎ－烷基氨基酸；二烷基氨基酸；环二烷基氨基酸；哌可酸或其衍生物；ｎ和ｉ独立地为０或１；ｍ是０至３的整数；ｋ是大于或等于３的整数；ψ代表经修饰的肽键，其相对于标准肽键来说，对至少一种蛋白酶具有更显著抗性。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表面核仁素的多价合成配体在治疗癌症或发炎中的用途本专利技术涉及一种多价合成化合物在制备用于治疗涉及细胞增殖和/或血管生成 下调的疾病以及优选地作为表面核仁素配体的药物中的用途，该化合物包含或者 由一个载体(support)组成，在所述载体上至少三个假肽单元被接枝，该化合物通式(I)为 Met/Cys标记的全核仁素和N-和l C-术端部分(分别含有氨基酸1-707， 1-308和 309-707)。然后以生物素化的HB19来温育标记的粗产物，复合体在亲和素-琼脂糖 柱上纯化。如所期望的，全核仁素与HB19相互作用。另一方面，富含酸性残基的 核仁素的N-末端部分根本不与该化合物相互作用，而核仁素的C-末端含有HB19 的靶位(14)。鉴定了含有HB19靶位的核仁素的C-末端后，制造了这个区域的各种 构建体(N。l-9)。第一个构建体对应于编码人核仁素(包括4个RBD和RGG结构域) 的C-末端部分的cDNA，与GST蛋白(谷胱甘肽S-转移酶)融合以进行用抗-GST抗 体的检测。其它的构建体，也是与GST融合，对应于同样的部分但一个或多个较 短结构域。所有这些蛋白以五.co/Z产生。HB19与每个构建体相互作用的能力这样 测定将表达不同的核仁素构建体的细菌粗提物与生物素化的HB19温育，然后固 定于亲和素-琼脂糖以进行纯化。然后以聚丙烯酰胺凝胶和GST分析这些样品，使 用抗-GST抗体以免疫检测(Westem Blot)显示。结果表明RGG结构域的存在对于 HB19与核仁素的C-末端部分相互作用是必需的。而且，RGG结构域自身对这种 相互作用已足够。图2.A.化合物HB19的结构。B.三价化合物Nucant01的结构，所述Nucant 01具有环形六肽作为载体，所述环形六肽由交替的D构型的丙氨酸残基(A)禾口 L 构型的赖氨酸残基(K)组成。3个假肽单元KvPR(v^CH2-N)共价连接至每个赖氨酸 残基(K)的s氨基基团；C.五价化合物Nucant 2(SEQ ID NO: 10)的结构，所述Nucant 2具有直链肽作为载体，所述直链肽具有SEQIDNO: 8序列的螺旋面结构，其中 5个假肽单元Kv]/PR(fCH2-N)共价逢接至5个赖氨酸残基中的每个的s氨基基团，Ac代表CH3-CO-基团；D.五价化合物Nucant 3(SEQ ID NO: ll)的结构，所述 Nucant 3具有直链肽作为载体，所述直链肽具有SEQ ID NO: 9序列的螺旋面结构， 其中5个假肽单元KyPRO-CH2-N)共价连接至5个赖氨酸残基(K)中的每个的e氨 基基团，Ac代表CH3-CO-基团。E.六价化合物Nucant 6(SEQ ID NO: 16)的结构， 所述Nucant 6具有直链肽作为载体，所述直链肽具有SEQ ID NO: 15序列的螺旋 面结构，其中5个假肽单元KvPR(vi/《H2-N)共价连接至6个赖氨酸残基(K)中的每 个的s氨基基团，Ac代表CH3-CO-基团。F.六价化合物Nucant 7(SEQ ID NO: 17)的结构，所述Nucant 7具有直链肽作为载体，所述直链肽具有SEQ ID NO: 13 序列的螺旋面结构，其中6个假肽单元KvPR(x^CH2-N)共价连接至6个赖氨酸残 基(K)中的每个的s氨基基团，Ac代表CH3-CO-基团。图3. A.抗-核仁素(抗Nu)， B.同位型IgG， C.肽F3和D. HB-19在经HARP 刺激的NIH-3T3细胞增殖中的效应。在所示浓度的HB19存在或不存在的情况下， 不剌激或以4 nM HARP刺激静止的NIH-3T3细胞。温育24小时后，通过测定氚 化胸苷的引入来确定细胞增殖。结果以相对于经HARP刺激的对照(100%)的百分 率给出。MSD(起点)，(**p<0.01， ***p<0.001)。图4.以HB19预处理NIH-3T3细胞1个小时在HARP诱导的增殖中的效应。 NIH-3T3细胞以HB19处理1个小时，然后洗涤，不刺激或以3.6 nM HARP刺激。 温育24小时后，通过测定氚化胸苷的引入来确定细胞增殖。结果以相对于经HARP 刺激的对照(100%)的百分率给出。MSD(起点)，(**p<0.01， ***p<0.001)。图5. HB-19在经0.2 nM FGF-2(A)刺激或5。/。胎牛血清(B)刺激的NIH-3T3细胞 增殖中的效应。在所示浓度的HB19存在或不存在的情况下，以FGF-2或5%血清 刺激静止的NIH-3T3细胞。温育24小时后，通过测定氚化胸苷的引入来确定细胞 增殖。结果以相对于经HARP刺激对照(100。/。)的百分率给出。MSD(起点)， (**p<0.01， ***p<0.001)。图6.抗-核仁素(抗Nu)(A)， IgG同位型(B)和HB-19(C)对MDA-MB231在湿 琼脂上生长的效应。MDA-MB231细胞在培养基上培养，所述培养基在0.6%琼脂 基质上含有0.35%琼脂。培养10天后，直径大于50 的克隆被计数。每孔5个 区域，每个点三次重复("pO.Ol)。图7.抗-核仁素(抗Nu)(A)和HB19(B)对B16-BL6在湿琼脂上生长的效应。 B16-BL6细胞在培养基上培养，所述培养基在0.6%琼脂基质上含有0.35%琼脂。 培养10天后，直径大于50 的克隆被计数。每孔5个区域，每个点三次重复 (*p<0.05， **p<0.01)。图8. HB-19在血管生成中的效应。A. HB-19在HUVEC细胞体外增殖中的效 应。20000个HUVEC细胞在孔中培养，每天加入不同浓度的化合物HB19。处理 6天后对细胞计数。B.也测定了 HB19(1 pM)在HUVEC细胞分化中的效应，所述 HUVEC细胞在HARP血管生成因子(l nM); VEGF(l nM)和FGF-2(3 nM)存在下以22三维胶原凝胶培养。结果以任意单位表现。C.体内血管生成模型(matrigel插入检 领ij)(matrigel plug assay)中，HB-19在HARP或FGF-2引发的血管生成中的效应。 将含有所示浓度的分子的matrigel(300 pl)经皮下注射入小鼠。l周后杀死小鼠，除 去matrigd。进行8 ^m厚的切片。染色后，通过图像分析估计内皮细胞的数目。 对于每个matrigel，每个实验点分析5个切片和4只小鼠。图9. MDA-MB231异种移植模型中，HB-19在肿瘤生长中的效应。人乳腺癌 MDA-MB231细胞经皮下注射入无胸腺小鼠(裸)。当肿瘤达到200 mm3的体积时， 以图A中所示的皮下途径处理小鼠。B.在第40天杀死的小鼠中肿瘤的观测和测 量。C.在第40天杀死的小鼠的肿瘤重量。附图说明图10.MDA-MB231异种移植模型中，HB-19在肿瘤生长中的效应。肿瘤生长 的变化。腹腔内(IP)或皮下(SC)注射。图11.MDA-MB231异种移植模型中，HB-19在转移的肿瘤细胞中的效应。使 用抗HLA-DR抗体，以流式细胞仪(FACS)研究经HB-19处理或未处理的异种移植 小鼠血液中的MDA-MB2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多价合成化合物在制备用于治疗涉及细胞增殖和／或血管生成下调的疾病的药物中的用途，该化合物包含或者由一个载体组成，在所述载体上至少三个假肽单元被接枝，该化合物通式（Ⅰ）为： ［（Ｘ）↓［ｎ］－Ｙ↓［１］＊（Ｚ）↓［ｉ］－Ｙ↓［２］－ （Ｘ）↓［ｍ］↓［ｋ］－载体 （Ⅰ） 其中每个Ｘ独立代表任何氨基酸； Ｙ↓［１］和Ｙ↓［２］独立选自具有碱性侧链的氨基酸； Ｚ选自： －脯氨酸，可能在γ、β或δ被羟基、胺、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［１０］烷基、Ｃ↓［１］－ Ｃ↓［１０］烯基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［１０］炔基、Ｃ↓［５］－Ｃ↓［１２］芳基、Ｃ↓［５］－Ｃ↓［１４］芳烷基、Ｃ↓［５］－Ｃ↓［１２］杂芳基基团取代，这些基团本身可能被１至６个选自卤素原子、ＮＯ↓［２］、ＯＨ、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］烷基、ＮＨ↓［２］、ＣＮ、三卤甲基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］烷氧基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］二烷基氨基、胍基基团、硫醇基团的取代基取代； －天然的或非天然的Ｎ－烷基氨基酸； －二烷基氨基酸； －环二烷基氨基酸；或 －哌可酸或其衍 生物； ｎ和ｉ独立地为０或１； ｍ是０至３的整数； ｋ是大于或等于３的整数；和 ψ代表经修饰的肽键，其相对于标准肽键来说，对至少一种蛋白酶具有更显著抗性。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J库尔蒂，A荷瓦耐森，JP白里安，G吉夏尔，Y哈马，
申请(专利权)人：国家科学研究中心，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
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