抑制外胚层衍生组织中肿瘤增殖的活性物质和组合物制造技术

本发明专利技术涉及抑制外胚层衍生组织中肿瘤增殖的物质和包含这样的物质的组合物。根据本发明专利技术所述的活性物质和组合物的特征在于在受精后至多２４小时，优选地１４－１６小时后，对人或动物来源的受精卵，优选地来自海水鱼或淡水鱼或两栖动物的受精卵进行细胞壁破碎，然后将材料超速离心，分离上清，混匀沉淀，然后超速离心数次，每次都分离上清和沉淀，之后将所有上清混合并优选地在８，０００－１５，０００ｒｐｍ离心，分离所得的上清并且用生理溶液优选地按重量比１∶２稀释，材料经至少两次一系列凝胶过滤，然后将过滤的物质冷冻干燥或选择性地用稀释剂，优选地用生理盐溶液或葡萄糖溶液或无菌蒸馏水优选地按重量比１∶２稀释。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抑制外胚层衍生组织中肿瘤增殖的物质和组合物。20世纪最严重的疾病之一是肿瘤。许多实验工作的目的是发现形成肿瘤组织增殖的原因。肿瘤细胞的形成和这些细胞的特性在下列公开文献中讨论癌症研究47.，第1473页，1987；欧洲癌症杂志15；第585页，1979；科学197.，第893页，1977；Int.Rev.Exp.Pathol.16.，第207页，1976。已知一些抑制肿瘤增殖的药物和组合物。组合物的活性成分是天然的或合成的。由此，例如从植物分离的天然活性物质的肿瘤抑制效应在下列论文中讨论Rkrain.细胞生物化学杂志，1987.，增刊11A53J.Tumor Marker Oncol.，1988，3.，第463-465页。在我们研究工作的进程中，我们提出外胚层衍生的分化组织中的细胞增殖的原因可能是新细胞由于原先受抑制的原始复制密码的释放而开始无休止的复制。倍增的新细胞形成聚集体(肿瘤组织)并依靠其金属蛋白酶裂解周围组织。它们以如此扩散的方式生长，进入到它们周围环境中，并在引起血管糜烂后进入淋巴系统和血液循环。分散的细胞可诱发远离原发肿瘤位置的肿瘤。此细胞增殖模型对应于按照系统发育早期阶段中无休止细胞复制密码的细胞复制。在有机结构而不是细胞聚集体的形成的初生时期，无休止细胞复制密码的抑制和确保特定机体形成和功能的密码在细胞中的建立是必需的。已知在包括人形机的动物中，DNA包含机体形成和功能的密码系统。在我们的研究过程中，我们已发现在分化之前起作用的引起细胞恶性转化的基础事件发生在DNA水平。我们的目的是提供包含那些能抑制无休止和快速的细胞复制的密码的活性物质。我们已发现已含此遗传密码的物质，可能与RNA相连接，可 以上实验结果说明①1号经嫩肉液的作用后，烹2分钟后即可食用，5分钟可达到鲜嫩，而2号需20分钟；②1号由于蛋白质部分降解成氨基酸，故汤味很鲜。③1号2分钟后即可食用，2号达到可食用需20分钟，即节约时间又节约能源。1号时间仅为2号时间的十分之一。3.用于牛脯肉块红烧肉的嫩化试验牛肉块2000克分成四份，分别为1号、2号、3号、4号(对照) 以上实验结果说明随着嫩肉液的添加量提高，嫩化作用加强。沉淀再次超速离心以将上清更好地与由高分子量蛋白和碳水化合物组成的组分分离。将含有活性物质的混合上清反复离心以实现有效分离，然后将以此方法获得的上清数次凝胶过滤以去除蛋白和细菌。制备的活性物质可冷冻干燥或与生理溶液混合形成组合物。组合物中活性物质和生理溶液的比例是选择性的，但优选地，我们制备其中活性物质与添加剂按重量比为1∶2的溶液。冷冻干燥的活性物质能贮存无限长时间，通过用生理盐溶液或葡萄糖溶液稀释制备的组合物能在-15℃贮存4年。我们认为用受精卵的上清我们已将RNA与碳水化合物和高分子量蛋白分离。作为肿瘤抑制剂，该组合物可以治疗的形式通过静脉给药。对于70公斤体重的病人，给予优选地用生理盐溶液稀释至10ml体积后的1.5ml活性物质。治疗根据所谓的Besredka方法进行。开始治疗，前0.1ml含活性物质的溶液用生理盐溶液稀释至10ml给病人用药。如果发生敏感性，即发生所谓的过敏性休克，将活性物质含量逐步增加到1.5ml体积。在我们的实验中未观察到这样的敏感性。一次治疗持续14天，每天通过静脉给予用生理盐溶液稀释至10ml的1.5ml活性物质(以70公斤体重计算)。之后，用同样的组合物隔天给药进一步持续14天。半年后进行对照，如果肿瘤抑制效果不令人满意，用每日静脉给药再进行14天的治疗。根据本专利技术所述的活性物质和组合物及其制备方法通过下列实施例加以说明。实施例1将雌性和雄性的实验用淡水鲤鱼-鲤分开。从雌性鱼中剥离卵，从雄性鱼中剥离鱼精。卵和鱼精在瓶中混合进行人工受精。将受精卵于14℃放置14个小时。然后将它与柠檬酸钠搅匀，同时混合物搅拌10分钟以破坏细胞壁。获得的材料深度冷冻并保存于-70℃直至使用。使用前该材料在27℃水浴中融化2小时，并在30,000rpm超速离心4小时。分离上清，含RNA的终产物可在此部分中发现。沉淀在35,000rpm再次超速离心2小时。分离上清并将所有上清部分混合，在10,000rpm离心1小时，然后分离上清，并按重量比将一份上清与二份生理盐溶液混合。产物通过不同孔径大小的凝胶过滤器在几个阶段进行过滤。凝胶过滤器的孔直径分别是8μ，0.8μ，0.45μ，0.22μ。然后重复上述一系列过滤，经过滤的材料用无菌水稀释至原体积的三倍，并测定细菌水平。所制备产物的样品在血琼脂培养基上划线并培养24小时。24小时后没有细菌培养物出现，因此我们宣称该产物是无菌的。组合物接受了内毒素测试。经测定的内毒素值为3U/ml。组合物的内毒素水平是适当的。将组合物装入安瓿中。配制好的组合物能在-18℃贮存两年。实施例2对根据实施例1的未稀释的活性物质进行高效液相层析检测。结果显示活性物质的特异峰在4,000和10,000道尔顿之间。活性物质可通过这些峰来鉴定。实施例3按照实施例1重复步骤，但用鳙作为起始材料。然后按照实施例1中描述的方法，但是在凝胶过滤后将获得的材料冷冻干燥。冷冻干燥的物质贮存于安瓿中。实施例4按照实施例1重复步骤，但用Rana pipiens作为起始材料。在雌性材料的胚根原中注射孕酮以确保排卵。从雌性中收集的卵和从雄性中得到的精子在装有10ml蒸馏水的培养皿中混合进行人工受精。之后按照实施例1中描述的方法进行，但活性物质用葡萄糖溶液而不是生理盐溶液按重量比1∶2稀释(1份按重量比的活性物质与2份按重量比的葡萄糖溶液混合)。实施例5药理学测试实施例1中活化材料的效应在体外用MCF-7人肺癌组织测试。MCF-7人肺癌组织从布达佩斯肿瘤学研究所获得。癌组织细胞数为7×10-4细胞/ml。培养过程在Greiner盘RPMI培养基中按重量比加入2％小牛血清进行。根据实施例1在实验1中将300ml活性物质加入200ml培养基中，实验2中将150ml活性物质加入850ml培养基中，实验3中将30ml活性物质加入970ml培养基中。对照实验中用蒸馏水代替活性物质加入培养基中。实验以三个平行重复进行。24，48和72小时后进行观察。细胞数及存活细胞的百分率用亚甲蓝染色方法测定。测试结果如下表所示 从该结果可看出本专利技术的组合物在最低检测浓度即可强烈抑制MCF-7人肺癌组织的增殖。根据检测72小时后达到最大抑制活性。对培养物进行形态学检测，即检测一个对照和一个经处理的培养物。在对照实验中用蒸馏水代替活性物质加入培养基中。对照和经处理的培养物均表现出有丝分裂和编程性细胞死亡活性。根据我们在实验1-3中48-72小时阶段的实验，用活性物质处理后编程性细胞死亡的量超过了有丝分裂的量。权利要求1.一种抑制外胚层衍生组织中肿瘤增殖的活性物质和包含所述物质的组合物，其特征在于在受精后至多24小时，优选地14-16小时后，对人或动物来源的受精卵，优选地来自海水鱼或淡水鱼或两栖动物的受精卵进行细胞壁破碎，然后将材料超速离心，分离上清，混匀沉淀，然后超速离心数次，每次都分离上清和沉淀，之后将所有上清混合并优选地在8,000-15,000rpm离心，分离所得的上清并且用生理溶液优选地按重量比本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制外胚层衍生组织中肿瘤增殖的活性物质和包含所述物质的组合物，其特征在于在受精后至多２４小时，优选地１４－１６小时后，对人或动物来源的受精卵，优选地来自海水鱼或淡水鱼或两栖动物的受精卵进行细胞壁破碎，然后将材料超速离心，分离上清，混匀沉淀，然后超速离心数次，每次都分离上清和沉淀，之后将所有上清混合并优选地在８，０００－１５，０００ｒｐｍ离心，分离所得的上清并且用生理溶液优选地按重量比１∶２稀释，材料经至少两次一系列凝胶过滤，然后将过滤的物质冷冻干燥或选择性地用稀释剂，优选地用生理盐溶液或葡萄糖溶液或无菌蒸馏水优选地按重量比１∶２稀释。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：久洛毛焦斯，
申请(专利权)人：久洛毛焦斯，
类型：发明
国别省市：HU[匈牙利]