一种苹果酵素及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开一种苹果酵素及制备方法，即将苹果将榨汁后与纯净水混匀，在所得苹果汁体积百分比为5‑20%的原料混合物中加入为原料混合物总重量1‑5%的葡萄糖，然后调pH值5.0‑7.0，灭菌，所得发酵原料液采用由毕赤酵母菌种子液：植物乳杆菌种子液的体积比为1：1‑5的组成混合菌种，控制温度25‑35℃进行第一次发酵12h~48h，所得第一次发酵液采用醋酸菌种子液控制温度为25‑35℃进行第二次发酵12‑36h，然后灭菌，即得苹果酵素成品。所得苹果酵素成品与自然发酵相比，其对痤疮丙酸杆菌具有明显抑菌效果，其对DPPH清除率IC50为0.43%。

Apple enzyme, preparation method and application thereof

The invention discloses an apple enzyme and preparation method, is apple juice after mixing with pure water, in the Apple Juice volume percent as the raw material mixture of 5 20% is added to the total weight of the mixture as raw materials 1 5% glucose, and then adjust the pH value of 5 7, sterilization, fermentation liquid by income by Pichia yeast seed liquid: Lactobacillus seed liquid volume ratio of 1:1 composed of mixed strains 5, 25 control temperature 35 DEG C for the first time the first fermentation 12h~48h, fermentation liquid by acetic acid bacteria seed liquid control temperature is 25 35 C second fermentation 12 36h, and sterilization. The apple enzyme product. Compared with the natural fermentation, the obtained Apple enzyme products have obvious bacteriostatic effect on Propionibacterium acnes, and the clearance rate of DPPH to IC50 is 0.43%.

【技术实现步骤摘要】
一种苹果酵素及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种苹果酵素及其制备方法与应用，属于生物工程

技术介绍
根据中国生物发酵产业协会的定义，酵素是指以果蔬或其他动、植物等为原料，采用自然或人工接种微生物发酵工艺，后经提取所制得的具有某些特定功能的发酵制品。酵素不仅保存了发酵原料中原有的营养物质，如多酚类、黄酮类、花青素等，而且通过有益菌的发酵代谢产生了一些新的生物活性成分，如有机酸，氨基酸等。与发酵前相比，微生物的转化使得这些小分子物质更易于人体吸收。近十年，微生物酵素功能性制品产业在全球开始大规模兴起，产业规模不断扩大。日本、台湾等地区开始采用纯种发酵进行生产。纯种发酵是在成分单一的发酵基质中，仅接入一种或几种微生物，通过对该微生物的培养，得到纯度较高的单一性产物。不同于自然发酵，其发酵时间短，易控制，十分适合酵素的产业化生产。但是为使发酵顺利进行，要求人工扩大的菌种不得被污染。因而对发酵设备和环境要求较高，要有严格的灭菌措施和空气净化系统。发酵用菌种也必须是经严格研究后筛选出的最适合生产的菌种。苹果酵素不仅保持了苹果原初营养和风味，还将赋予其益生菌所产生的抗氧化活性，为消费者提供新的功能性产品。但目前的水果酵素制作主要存在：发酵时间长，影响水果原料稳定性；发酵菌种性能和稳定性差，影响酵素中天然的活性物质等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是为了解决现有水果酵素生产过程中发酵时间过长影响酵素活性，菌种性能不稳定等问题而提供一种苹果酵素的制备方法，该苹果酵素的制备方法具有生产过程中发酵时间短的优点。本专利技术的目的之二是提供上述一种制备方法所得的苹果酵素，该苹果酵素具有抗氧化活性高，且能有效抑制痤疮丙酸杆菌生长等优点，适合应用于饮料和化妆品领域。本专利技术采用的技术方案一种苹果酵素，即以新鲜成熟度好的苹果为主材料，以毕赤酵母菌PichiakudriavzeviiPKD3001和植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001为第一次发酵菌株、沪酿1.01醋酸菌为第二次发酵菌株通过两次发酵制备而成，该制备方法具体包括以下步骤：（1）、菌种的选取本专利技术所用的植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001，是2016年1月18日于中国典型培养物保藏中心保藏的，其保藏编号为CCTCCNO:M2016045的植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001冷冻干燥管；本专利技术所用的毕赤酵母菌PichiakudriavzeviiPKD3001，是2016年9月29日于中国典型培养物保藏中心保藏的，其保藏编号为CCTCCNO:M2016537的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001冷冻干燥管；本专利技术所用的沪酿1.01醋酸菌为巴氏醋酸杆菌巴氏亚种Acetobacterpasteurianussubsp.PasteurianusDeLeyetFrateur，购买自上海市酿造科学研究所；（2）、发酵原料液的制备将新鲜、成熟度好的苹果用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到苹果汁，然后与纯净水混合，得到原料混合物，其中苹果汁与纯净水的比例，按体积百分比计算，苹果汁：纯净水为5-20%：80-95%；在上述所得的原料混合物中再加入为原料混合物总重量1-5%的葡萄糖，经1mol/L食用碳酸钠水溶液调pH值为5.0-7.0，然后于105℃灭菌10min得到发酵原料液；（3）、菌种活化用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001菌种一环在马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养皿上划线，在30℃培养箱中培养24h，得到平板活化毕赤酵母菌菌种；用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001菌种一环在乳酸菌琼脂培养基培养皿上划线，在37℃培养箱中培养24h，得到平板活化植物乳杆菌菌种；用接种环取无菌水溶解的沪酿1.01醋酸菌一环在醋酸菌琼脂培养基培养皿上划线，在30℃培养箱中培养24h，得到平板活化醋酸菌菌种；（4）、种子培养用接种环取步骤（3）所得的平板活化毕赤酵母菌菌种一环接入装有50ml麦芽浸粉肉汤液体培养基的250ml规格的三角瓶中，置于温度30℃的培养箱中，然后控制转速为120rpm，恒温培养36h，离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液清洗后，加入50mL0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液经500rpm下漩涡震荡重悬菌体，得到毕赤酵母菌种子液，每毫升毕赤酵母菌种子液中含毕赤酵母菌种1×106-1×109cfu；用接种环取步骤（3）所得的平板活化植物乳杆菌菌种一环接入装有50ml乳酸菌肉汤培养基的250ml规格的三角瓶中，置于温度37℃的培养箱中，恒温培养36h，离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液清洗后，加入50mL0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液经500rpm下漩涡震荡重悬菌体，得到植物乳杆菌种子液，每毫升植物乳杆菌种子液中含植物乳杆菌种1×107-1×1010cfu；用接种环取步骤（3）所得的平板活化醋酸菌菌种一环接入装有50ml醋酸菌液体培养基的250ml规格的三角瓶中，置于温度30℃的培养箱中，然后控制转速为120rpm，恒温培养36h，离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液清洗后，加入50mL0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液经500rpm下漩涡震荡重悬菌体，得到醋酸菌种子液，每毫升醋酸菌种子液中含醋酸菌种1×106-1×108cfu；（5）、发酵培养首先，将毕赤酵母菌种子液和植物乳杆菌种子液按体积比，即毕赤酵母菌种子液：植物乳杆菌种子液为1：1-5的比例进行混合，得到毕赤酵母菌和植物乳杆菌混合种子液；然后，按步骤（2）所得的发酵原料液体积的1-5%的比例，在步骤（2）所得的发酵原料液中加入上述所得的毕赤酵母菌和植物乳杆菌混合种子液，控制温度为25-35℃、转速100-200rpm进行第一次发酵12-48h，得到第一次发酵液；然后，按第一次发酵液体积的1-10%的比例，在第一次发酵液中加入醋酸菌种子液，控制温度25-35℃、转速100-200rpm进行第二次发酵12-36h，得到第二次发酵液；（6）、灭菌将步骤（5）所得的第二次发酵液于121℃下杀菌20min，然后灌装，即得到苹果酵素。本专利技术的有益效果本专利技术的一种苹果酵素，由于制备采用的原料苹果是纯天然的，利用低温杀菌、严格控制发酵温度，有效的降低了苹果酵素营养成分的损失，最大限度保留了苹果酵素活性。进一步，本专利技术的一种苹果酵素，由于制备过程所用的发酵时间控制在80h以内，从而避免了苹果本身含有的风味物质和酵素物质的损失。进一步，本专利技术的一种苹果酵素是以毕赤酵母菌PichiakudriavzeviiPKD3001和植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001组成混合菌种为第一次发酵菌株、沪酿1.01醋酸菌为第二次发酵菌株通过两次发酵制备而成，因此所得苹果酵素与自然发酵所得的苹果酵素相比，能显著抑制青春痘主要致病菌痤疮丙酸杆菌的生长，且其抗氧化活性指标提高75%以上，IC50浓度为0.43本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苹果酵素的制备方法，其特征在于所述的制备方法即以新鲜成熟度好的苹果为主材料，以毕赤酵母菌

【技术特征摘要】
1.一种苹果酵素的制备方法，其特征在于所述的制备方法即以新鲜成熟度好的苹果为主材料，以毕赤酵母菌PichiakudriavzeviiPKD3001和植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001为第一次发酵菌株、沪酿1.01醋酸菌为第二次发酵菌株通过两次发酵制备而成，该制备方法具体包括以下步骤：（1）、菌种的选取所用的植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001，是2016年1月18日于中国典型培养物保藏中心保藏的，其保藏编号为CCTCCNO:M2016045的植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001冷冻干燥管；所用的毕赤酵母菌PichiakudriavzeviiPKD3001，是2016年9月29日于中国典型培养物保藏中心保藏的，其保藏编号为CCTCCNO:M2016537的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001冷冻干燥管；所用的沪酿1.01醋酸菌为巴氏醋酸杆菌巴氏亚种Acetobacterpasteurianussubsp.PasteurianusDeLeyetFrateur，购买自上海市酿造科学研究所；（2）、发酵原料液的制备；将新鲜、成熟度好的苹果用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到苹果汁，然后与纯净水混合，得到原料混合物，其中苹果汁与纯净水的比例，按体积百分比计算，苹果汁：纯净水5-20%：80-95%；在上述所得的原料混合物中再加入为原料混合物总重量1-5%的葡萄糖，经1mol/L食用碳酸钠水溶液调pH值为5.0-7.0，然后于105℃灭菌10min得到发酵原料液；（3）、菌种活化用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001菌种一环在马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养皿上划线，在30℃培养箱中培养24h，得到平板活化毕赤酵母菌菌种；用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的植物乳杆菌LactobacillusplantarumC2001菌种一环在乳酸菌琼脂培养基培养皿上划线，在37℃培养箱中培养24h，得到平板活化植物乳杆菌菌种；用接种环取无菌水溶解的沪酿1.01醋酸菌菌种一环在醋酸菌琼脂培养基培养皿上划线，在30℃培养箱中培养24h，得到平板活化醋酸菌菌种；（4）、种子培养用接种环取步骤（3）所得的平板活化毕赤酵母菌菌种一环接入装有50ml麦芽浸粉肉汤液体培养基的250ml规格的三角瓶中，置于温度30℃的培养箱中，然后控制转速为120rpm，恒温培养36h，离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液清洗后，加入50mL0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液经500rpm下漩涡震荡重悬菌体，得到毕赤酵母菌种子液，每毫升毕赤酵母菌种子液中含毕赤酵母菌种1×106-1×109cfu；用接种环取步骤（3）所得的平板活化植物乳杆菌菌种一环接入装有50ml乳酸菌肉汤培养基的250ml规格的三角瓶中，置于温度37℃的培养箱中，恒温培养36h，离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液清洗后，加入50mL0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液经500rpm下漩涡震荡重悬菌体，得到植物乳杆菌种子液，每毫升植物乳杆菌种子液中含植物乳杆菌种1×107-1×1010cfu；用接种环取步骤（3）所得的平板活化醋酸菌菌种一环接入装有50ml醋酸菌液体培养基的250ml规格的三角瓶中，置于温度30℃的培养箱中，然后控制转速为120rpm，恒温培养36h，离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液清洗后，加入50mL0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液经500rpm下漩涡震荡重悬菌体，得到醋酸菌种子液，每毫升醋酸菌种子液中含醋酸菌种1×106-1×108cfu；（5）、发酵培养首先，将毕赤酵母菌种子液和植物乳杆菌种子液按体积比，即毕赤酵母菌种...

【专利技术属性】
技术研发人员：田怀香，申永波，陈臣，于海燕，何玉洁，张雅敬，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：上海,31