一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法技术

本发明专利技术适用于饲料原料及加工工艺技术领域，提供了一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法，以解决在畜禽生产中无法客观评定植酸酶使用效果的问题；该测定方法首先将底物各原料混合后粉碎，添加待测植酸酶与所述底物混合，同时作空白对照，分别加入到胃蛋白酶盐酸溶液中，水浴冷却后测定溶液pH，准确移取上清液至离心管中，并准确量取剩余上清液，将离心管中的上清液离心得上清液A，再准确移取1mL上清液A，加入钒钼酸胺显色剂，用分光光度计比色测定，最后从磷标准曲线中查得磷的浓度,计算添加待测植酸酶底物多释放的水溶性磷含量。本发明专利技术通过底物多释放水溶性磷的多寡来判定植酸酶的作用大小，选择质佳的植酸酶，有效减少外源磷的使用量。

Method for determining phosphorus content of phytase in simulated animal stomach environment

The invention is applicable to the technical field of feed raw materials and processing technology, provides a simulation environment in the stomach animal enzymolysis method for the determination of phosphorus in livestock production, in order to solve the no objective evaluation of application effect of phytase; the determination method of first substrate mixed after crushing the raw materials, adding phytase and the substrate to be measured at the same time as control. The mixture were added to pepsin HCl solution, pH solution was measured after cooling in water bath, accurate remove the supernatant to a centrifuge tube, and the accurate quantity of residual supernatant, the supernatant centrifugal tube from the experience of A in the supernatant, and accurate shift from 1mL was A, with vanadium ammonium molybdate coloration agent, colorimetric determination by spectrophotometry, finally from phosphorus concentration standard curve. Phosphorus, calculation of phytase substrate release of water-soluble phosphorus content to be measured. The invention determines the function size of phytase by releasing the amount of water-soluble phosphorus in a substrate, and selects the phytase with good quality, thereby effectively reducing the use of exogenous phosphorus.

【技术实现步骤摘要】
一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法
本专利技术涉及饲料原料及加工工艺
，尤其涉及一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法。
技术介绍
磷是畜禽日粮中仅次于能量、蛋白质及钙的重要营养物质，是动物体生长发育所必需的常量矿物质元素，参与体内许多生理功能和生物化学反应。常用植物性饲料中60％-70％的磷是以植酸或者植酸盐的有机磷形式存在，反刍动物瘤胃微生物可以产生大量的植酸酶，可以很好地利用植酸磷，而单胃动物对植酸磷的利用效率很低，食入的磷有75％都随粪便排出，需要通过在饲料中添加磷酸氢钙等无机磷的形式进行补充，不仅增加成本，还会造成环境污染。植酸酶在动物胃中可以将植酸磷释放，提高植物性饲料中磷的利用效率，减少外源磷的使用量，节省成本，并减少环境污染。另外，植酸往往还会和其他养分(如锌、铁等)以络合物的形式存在，不易解离，使用植酸酶可以提高此部分养分的使用效率。现在，随着饲料工业的快速发展，饲料用植酸酶制剂的应用也越来越广泛，不同公司采用不同的生产菌种、基因来源生产植酸酶，其使用方式及活性评定方法各有差异，因此在畜禽生产中无法客观的评定植酸酶的使用效果。植酸酶是一种蛋白质，进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法，包括以下步骤：首先将底物各原料混合后粉碎，所述底物由以下原料按照质量百分比组成：玉米60％、豆粕20％、棉粕10％及DDGS 10％，添加待测植酸酶与所述底物混合，同时作空白对照，分别加入到胃蛋白酶盐酸溶液中，40℃恒温水浴，冷却至室温后再测定溶液pH，准确移取12mL上清液至离心管中，并准确量取剩余上清液，将离心管中的上清液离心，得上清液A，再准确移取离心管中上清液A 1mL，加入钒钼酸胺显色剂，再加蒸馏水定容，摇匀静置，用分光光度计比色测定，最后从磷标准曲线中查得待测植酸酶磷浓度和空白对照中磷浓度,计算在模拟胃环境中添加植酸酶饲料底物多释放的水溶...

【技术特征摘要】
1.一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法，包括以下步骤：首先将底物各原料混合后粉碎，所述底物由以下原料按照质量百分比组成：玉米60％、豆粕20％、棉粕10％及DDGS10％，添加待测植酸酶与所述底物混合，同时作空白对照，分别加入到胃蛋白酶盐酸溶液中，40℃恒温水浴，冷却至室温后再测定溶液pH，准确移取12mL上清液至离心管中，并准确量取剩余上清液，将离心管中的上清液离心，得上清液A，再准确移取离心管中上清液A1mL，加入钒钼酸胺显色剂，再加蒸馏水定容，摇匀静置，用分光光度计比色测定，最后从磷标准曲线中查得待测植酸酶磷浓度和空白对照中磷浓度,计算在模拟胃环境中添加植酸酶饲料底物多释放的水溶性磷含量。2.如权利要求1所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法，其具体实现步骤如下：(1)首先制备底物：所述底物由如下原料按照质量百分比组成:玉米60％、豆粕20％、棉粕10％及DDGS10％；按照上述配比称取各原料混合后粉碎，并过40目筛；(2)分别称取3～7g所述步骤(1)制备的底物各置于250mL碘量瓶中，按1000FYT/kg的酶活添加量添加0.1～1mg的待测植酸酶加入到其中一个碘量瓶中为处理组，同时平行做空白对照，即底物中不添加待测植酸酶；(3)然后将100mL胃蛋白酶盐酸溶液缓慢加入至碘量瓶中制成消化液，缓慢搅拌后测定消化液的pH，当pH大于3.5，用pH2.0的盐酸溶液将消化液调整至3.0～3.5之间，严密封口，所述盐酸溶液为取质量分数为36％的浓盐酸0.83mL，定容至1000mL；(4)40℃恒温水浴摇床2h，冷却至室温后再测定溶液pH，pH应保持在4.0～4.5之间；(5)准确移取12mL碘量瓶中的上清液至离心管中，同时，准确量取碘量瓶中剩余上清液的体积，将上清液4000rpm离心10min，得上清液A；(6)准确移取离心管中1mL上清液A至50mL比色管中，加入10mL钒钼酸胺显色剂，加蒸馏水定容至50mL，摇匀静置10min；(7)用分光光度计400nm比色测定，从磷标准曲线中查得...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘娇，王昕陟，李东全，杨光，郭伟，王密，李忠秋，孙丹彤，
申请(专利权)人：沈阳波音饲料有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21