一种单克隆抗体，其仅与脱唾液酸α↓［１］－酸性糖蛋白作用，且排斥肝球蛋白和α↓［２］－巨球蛋白。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在早期快速诊断肝病的方法。更具体地，本专利技术涉及抗脱唾液酸α1-酸性糖蛋白的单克隆抗体；诊断肝病的方法，其使用所述的单克隆抗体评价试样中的脱唾液酸α1-酸性糖蛋白；和用于免疫色谱的诊断条，其由所述的抗脱唾液酸α1-酸性糖蛋白的单克隆抗体和蓖麻凝集素(RCA)组成。本专利技术的诊断装置可以方便地测量脱唾液酸α1-酸性糖蛋白的浓度，并快速诊断肝病。
技术介绍
肝病包括肝炎、肝硬化和肝癌，是韩国、日本、台湾、中国和其它东南亚国家最流行的疾病。目前，通过评价患者尿中的胆红素或尿胆素原的含量，通过测量谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶、全胆红素、白蛋白、乳酸脱氢酶等的含量来分析血液中的生化组分的变化，和通过检测来自乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)的抗原或抗这些病毒的抗体，已经可以诊断肝病。另外，通过甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)实验，可以诊断肝硬化。但是，肝脏是一个复杂的器官，因为它有多种功能，且不能从外表上非常特异性地揭示异常状态。而且，尚未建立早期诊断方法，因而肝病经常难以治疗，因为它是在严重恶化以后才被确诊。本专利技术的专利技术人已经开发出了一种标记，其可以在临床上早期诊断肝病，且能准确地反映出患者的严重性，从而生产出了一种诊断试剂盒。本专利申请和论文已经揭示，该标记是诊断肝病的显著试剂。准确地说，本专利技术的专利技术人已经证实了韩国专利申请PCT/KR00/00840(2000年8月1日)，美国专利申请09/662,363(2000年9月13日)和韩国专利申请10-2000-0040609(2000年7月14日)中的诊断方法和诊断试剂盒，其通过使用特异性抗体和凝集素来利用夹心ELISA方法，并测量血液中的脱唾液酸糖蛋白。证实该技术是可再现的和准确的，因而可以用于诊断肝功能和治疗肝病。据报道，脱唾液酸糖蛋白作为血清中的标记代表着肝病的预后状态(T.Sawamura等，Gastroenterology 1981，81527～533；T.Sawamura等，Gastroenterology 1984，871217～1221)。另外，阐明了脱唾液酸糖蛋白有助于检测肝癌的状况，因为其浓度与肝癌的严重性成比例(T.Sawamura等，Gastrologia Japonica 1985，20201～208)。常规地，从人或其它动物(例如兔子和小鼠)分离出针对脱唾液酸糖蛋白的受体，纯化后用作捕获蛋白，以测量脱唾液酸糖蛋白的浓度。将其标记上放射活性的底物后，进行竞争性放射性测定和电免疫扩散(J.S.Marshall等，J.Lab.Clin.Med.1978，9230～37；N.Serbource-Goguel等，Hepatology 1983，3356～359)。不幸的是，存在一些问题。首先，难以大规模地得到针对脱唾液酸糖蛋白的受体，但是检测试剂盒需要大量的脱唾液酸糖蛋白。在竞争性放射受体测定中，使用放射性物质是危险的，且难以制备用于处理废弃物等的特殊设备。在电免疫扩散中，定量分析数据非常困难。特别地，竞争性测定不适用于一般的诊断试剂盒，因为其缺少准确性和再现性。附图简述从下面的详述中，结合附图，可以更清楚地理解本专利技术的上述的和其它的目的、特征和其它优点，其中附图说明图1显示了通过进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)从血浆中纯化出的α1-酸性糖蛋白(AGP)和去唾液酸化的α1-酸性糖蛋白。图2显示了通过进行蛋白印迹从本专利技术的杂交瘤细胞系生产出的抗脱唾液酸α1-酸性糖蛋白的单克隆抗体。图3显示了在本专利技术中通过实施ELISA方法制备出的单克隆抗体，其仅与脱唾液酸α1-酸性糖蛋白反应，且排斥肝球蛋白和α2-巨球蛋白。图4a显示了在本专利技术中制备的用于免疫色谱的诊断条的平面图。图4b显示了在本专利技术中制备的用于免疫色谱的诊断条的正视图。图5显示了使用在本专利技术中制备的用于免疫色谱的盒式诊断条测量的结果，以浓度依赖方式显示了脱唾液酸α1-酸性糖蛋白。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，且通过检测脱唾液酸糖蛋白来快速、容易地诊断肝病，本专利技术人已经尝试开发了对脱唾液酸α1-酸性糖蛋白(AsAGP)特异性的单克隆抗体、使用所述的单克隆抗体诊断肝病的方法和用于该方法的免疫色谱的诊断条。本专利技术的目的是提供容易地检测肝病的装置和方法。为了实现所述的目的，本专利技术提供了仅结合脱唾液酸α1-酸性糖蛋白、且排斥肝球蛋白和α2-巨球蛋白的单克隆抗体。本专利技术的单克隆抗体也不与脱唾液酸肝球蛋白和脱唾液酸α2-巨球蛋白作用。优选地，本专利技术的单克隆抗体是亚类IgG1。通过现有技术公开的方法(Davidson R.L.和P.S.Gerald 1976，Improved techniques for the induction of mammalian cell hybridization bypolyethylene glycol，Somatic Cell Genet.，2165～176；Knott C.L.，Kuus-Reichel K.，Liu R.和Wolfert R.L.1997，Development of antibodies fordiagnostic assays，In Price C.和Newman D.(eds.)，Principles and Practice ofImmunoassay，2nded.New York，Stockton Press，36～64；Gillete R.W.1987，Alternatives to pristine priming for ascitic fluid and monoclonal antibodyproduction，J.Immunol.Meth.99，21～23；Norwood T.H.，C.J.Zeigler和G.M.Martin 1976，Dimethyl sulphoxide enhances polyethylene glycol-mediatedsomatic cell fusion，Somatic cell Genet.，2263～270)，可以制备出单克隆抗体。更准确地，通过包含下述步骤的方法生产(1)分离脱唾液酸α1-酸性糖蛋白，和(2)免疫小鼠。首先，为了大规模地生产上面得到的单克隆抗体，通过常规方法制备出了杂交瘤细胞，经分离、筛选后，腹膜注射进小鼠中，然后从腹膜液中收集。具体地，通过专利申请所述的方法，从血液中纯化脱唾液酸α1-酸性糖蛋白。将脱唾液酸α1-酸性糖蛋白悬浮到磷酸盐缓冲液中，通过Titer-MAX混合，并用于免疫小鼠。从免疫的实验小鼠中分离出脾细胞和骨髓瘤细胞，融合后，通过ELISA方法筛选对脱唾液酸α1-酸性糖蛋白特异性的杂交瘤细胞系。为了从上面的杂交瘤细胞大规模生产对脱唾液酸α1-酸性糖蛋白特异性的单克隆抗体，将生产抗脱唾液酸α1-酸性糖蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞注射进实验小鼠中，收集含有高水平的杂交瘤细胞的小鼠腹膜液，分离对本专利技术的单克隆抗体特异性的细胞。另外，本专利技术还提供了杂交瘤细胞系，其可以大规模地生产仅结合脱唾液酸α1-酸性糖蛋白、且排斥肝球蛋白和α2-巨球蛋白的单克隆抗体。为了研究从杂交瘤细胞得到的抗脱唾液酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：郑兑和，宋银永，姜智显，金京儿，李银荣，催龙卿，
申请(专利权)人：新生命迪吉姆有限公司，
类型：发明
国别省市：
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