本发明专利技术公开了一种白血病ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因靶向小分子抑制剂，该化合物是由２β－（４’－甲基－１’－哌嗪基）－３α－羟基－５α－甾体－１７－酮和咖啡酸反应成盐得到。该化合物盐通过有效抑制ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因的ｍＲＮＡ合成，进而抑制ＢＣＲ／ＡＢＬ蛋白的表达，从而抑制蛋白酪氨酸激酶的活性，最终抑制白血病细胞的生长。本发明专利技术的化合物盐有望成为真正意义上的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因靶向治疗剂而被开发，从而为ＣＭＬ和Ｐｈ阳性（Ｐｈ↑［＋］）慢性粒细胞白血病以及Ｐｈ阳性（Ｐｈ↑［＋］）急性淋巴细胞白血病的治疗提供一种全新化学实体。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种白血病基因靶向治疗剂，特别涉及一种甾体衍生物的咖 啡酸盐类。
技术介绍
慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是人类发现最早的 白血病之一，发病率约为人群的每十万分之二，其年发病率呈上升的趋势。 对CML的研究和治疗，分为几个标志性阶段1960年，Nowell和Hungerford 发现了Ph染色体。1972年，Rowley发现Ph染色体是由于9号和22号染色体之间 的abl与bcr基因相互易位造成的。1982年，Klein等人证实了融合基因bcr/abl的 存在，几乎在95X以上的CML病例中，均存在bcr/abl融合基因。1990年，Daley 等人证实，将bcr/abl融合基因导入小鼠体内可诱发类似CML的疾病，从而将 bcr/abl融合基因锁定为CML的致病基因。1996年，Druker等人发现了酪氨酸激 酶抑制剂(TKI) Imatinib的抗白血病活性。2000年后，Imatinib在治疗CML 中得到了广泛的临床应用。根据机理研究，Imatinib主要是与BCR/ABL融合 蛋白结合，从而抑制了该蛋白过度活化的酪氨酸激酶活性，诱导白血病细胞 调亡。堪称第一个基因耙向治疗药物。随着该药的应用，暴露出来的主要问 题是抗药性的产生，其主要原因是由于BCR/ABL蛋白的点突变，通常位于酪 氨酸激酶的活性区域，使Imatinib不能有效地与激酶部位结合而抑制其活性， 导致约70%左右的白血病复发率。目前，为了克服这一缺点，纷纷开发出了 第二代和第三代酪氨酸激酶抑制剂，但都是针对BCR/ABL蛋白结合部位的， 尚未见有真正意义上的bcr/abl融合基因靶向抑制剂，即直接抑制bcr/abl mRNA 融合基因的表达，继而抑制BCR/ABL蛋白的表达。尽管文献报导siRNA可抑 制bcr/ablmRNA融合基因的表达，但作为药物，其在体内的稳定性尤为重要， 而siRNA由于其稳定性差而限制了其作为药物的被开发。所以，寻找bcr/abl 融合基因的特异性的抑制剂，对CML的治疗具有十分重要的应用价值。
技术实现思路
4本专利技术的目的在于提供一种bcr/abl融合基因抑制剂及其制备方法。 本专利技术的另一目的在于提供该化合物的药物制剂，这种制剂是以本专利技术 的bcr/abl融合基因抑制剂作为药物活性成分，包含一种或多种药学上可接受的 赋形剂、稀释剂等载体成份的组合物。经过反复筛选，专利技术人得到一种下列化学结构式的甾体小分子化合物的 咖啡酸盐，即2卩-(4'-甲基-l'-哌嗪基)-3a-羟基-5a-甾体-17-酮咖啡酸盐，该 化合物能直接抑制bcr/abl融合基因mRNA的合成，继而抑制BCR/ABL蛋白的 表达，从而有望作为bcr/abl融合基因靶向治疗剂而用于Ph阳性(Ph+)慢性粒 细胞白血病(CML)以及Ph阳性(Ph+)急性淋巴细胞白血病(ALL)的治疗。o本专利技术bcr/abl融合基因抑制剂的制备方法为采用表雄酮(I )为起始原 料，经过烯化、环化、开环和成盐四步化学反应而得到目的化合物(V)，目 的化合物经元素分析、IR、 ^111和]^8或1^/]\^确证其化学结构为2(3- (4，-甲基-r-哌嗪基)-301-羟基-501-甾体-17-酮咖啡酸盐。其合成路线如下由表雄酮(I )合成(II)时，将对甲苯磺酰氯在无水吡啶中反应，混 合物不分离而直接回流一步制得HI),不用毒性较大的2、 4、 6-三甲吡啶， 产率尚可。在环化反应中，产物(III)的酸性较大，应尽可能地用水洗至中 性，以免影响下一步碱开环反应。在开环反应中，水的存在可对反应起促进 作用，采用甲基哌嗪水的比例为100: 40时，可使反应时间縮短为50小时左 右。在成盐反应中，由于哌嗪基团上氮原子的碱性，较容易与咖啡酸形成有 机酸盐，产物稳定性较好，在水中有一定的溶解度。本专利技术所指的包含2P- (4'-甲基-l'-哌嗪基)-301-羟基-501-甾体-17-酮咖啡 酸盐的制剂，是以现有制剂领域的常规药物制剂技术得到的各种药学上可接 受的制剂，包括各种固体口服剂，液体口服剂，注射剂等。其中固体剂包括 片剂，胶囊剂，颗粒剂，缓释片及缓释微丸等等。液体剂型包括注射剂、输 液剂、粉针剂等等。使用本专利技术的药物制剂，以本专利技术的化合物的有效成分计，推荐成人剂 量为3mg/次，每日2 3次。通过药物临床志愿者实验表明，该剂量是安全有效 的。当然，实际的服用量可根据患者的病情、年龄、体重以及其他因素来进行调整。本专利技术甾体化合物的咖啡酸盐能在bcr/abl融合基因的转录或翻译水平抑 制bcr/abl原癌基因，从而抑制BCR/ABL蛋白酪氨酸激酶的活性。该化合物盐 的作用机制是通过有效抑制bcr/abl融合基因的mRNA合成，进而抑制 BCR/ABL蛋白的表达，从而抑制蛋白酪氨酸激酶的活性，最终抑制白血病细 胞的生长。与现有的抗白血病药物酪氨酸激酶抑制剂Imatinib类药物相比，由于本发 明的化合物盐抑制bcr/abl融合基因表达的药理作用发生在mRNA水平，与 Imatinib的蛋白结合部位无关，因此能彻底克服目前Imatinib类药物的抗药性。 本专利技术的化合物盐有望成为真正意义上的bcr/abl融合基因耙向治疗剂而被开 发，从而为CML和Ph阳性(Ph+)慢性粒细胞白血病以及Ph阳性(Ph+)急性 淋巴细胞白血病的治疗提供一种全新化学实体。本专利技术药物的原料可从市场上购得，合成方法简单可行。附图说明图h不同浓度本专利技术的化合物盐处理K562细胞第5天的MTT结果。 图2:不同浓度本专利技术的化合物盐处理Meg-01细胞第5天的MTT结果。 图3:不同浓度本专利技术的化合物盐处理CML细胞第5天的MTT结果。 图4:不同浓度本专利技术的化合物盐处理K562/R细胞第5天的MTT结果。 图5: 1(^mol/L浓度本专利技术的化合物盐处理不同白血病细胞第3天的bcr/abl mRNA表达结果。图6: 10^mol/L浓度本专利技术的化合物盐处理不同白血病细胞第5天的 BCR/ABL蛋白表达结果。图7: 1 (^mol/L浓度本专利技术的化合物盐处理不同白血病细胞第5天的PTK 活性结果。具体实施例方式以下的实施例均为对该专利技术作进一步的解释，并不以任何方式对该专利技术 的范围加以限制。实施例l制备本专利技术的2e-(4'-甲基-l，-哌嗪基)-3"羟基-5(1-甾体 -17-酮咖啡酸盐(V)(1)由表雄酮(I )为原料制备5a-甾体-2-烯-17-酮(II)表雄酮(I ) 4g (14mmol)溶于无水吡啶20ml中，加入对甲苯磺酰氯 4.6g(24mmo1)，搅拌反应3h后回流4h，回收吡啶后得半固体物。加入水溶液析 出固体，滤集后重结晶得白色结晶，收率60%左右，mp.l04-105°C， IR (KBr) cm" 3010 (OCH)， 1735 (OO)， 1650 (C=C)。(2) 2a， 3a-环氧-5a-甾体-17-酮(III)的制备 将8。/。过氧乙酸17ml、水14ml和醋酸钠1.7g混合，滴加II的氯仿溶液(1.7g溶于13ml氯仿中)。搅拌反应17h，分离有机层，洗至中性，浓縮后的固体， 重结晶后得白色结晶，收率本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种化合物，其特征在于该化合物是由２β－（４’－甲基－１’－哌嗪基）－３α－羟基－５α－甾体－１７－酮和咖啡酸反应成盐得到的，具有下列化学结构式： ＊＊＊。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何群，董俊，甄焕英，张君，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]
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