羟基胆固醇类琥珀酸单脂及其盐制造技术

＊＊＊ 本发明专利技术涉及下述结构通式的化合物 其中甾体母环的Ｃ↑［４］、Ｃ↑［５］可为单键或双键；Ｃ↑［６］与Ｏ的键可为α或β；Ｒ为ＯＨ，但当Ｃ↑［４］、Ｃ↑［５］为双键时Ｒ不存在；Ｒ′为Ｈ或－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＸ；Ｘ为Ｈ或碱金属。上述这些化合物及其盐，在体外试验及体内试验均比现有结构类似的化合物具有更强的抗癌活性，同时还有在动物体内试验不降低其白细胞的优点和具有免疫增强作用。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种具有下述结构通式(Ⅰ)的羟基胆固醇类琥珀酸单酯及其盐 其中甾体母环的C4，C5可为单键或双键;C6与O的键可为α或β;R为OH，但当C4，C5为双键时R不存在;R为H或-COCH2CH2COOX;X为H或碱金属。碱金属为钠、钾等，优先采用钠。癌症是严重威胁人类健康的一类疾病。目前用于治疗癌症的主要手段是化学疗法。但现在临床应用的化疗药物绝大多数都有使患者骨髓抑制、白细胞下降、恶心呕吐等副作用。因此在化疗过程中需同时监测患者的白细胞数，如下降至一定程度，即使疗程未结束，化疗也只能被迫中止。也正因为如此，寻找副作用小的抗癌药物亦成为新药研究的一项重要课题。羟基胆固醇类化合物具有抗癌活性的发现始于七十年代，是在从中药僵蚕中分离出7β-羟基胆固醇(Ⅱ)经体外试验表明其具有抗癌活性。(K.P.Cheng et al，J.Chem.Research(M)1977，2501～2509，H.Nagano et al，ibid，1977，2519～2527)。在此基础上本专利技术人合成了7β-羟基胆固醇双琥珀酸单酯钠(Ⅲ)。 7β-羟基胆固醇虽具有选择性的细胞毒作用，但因其水溶性很差，在动物体内试验未能显示抗癌活性。尽管7β-羟基胆固醇双琥珀酸单酯钠水溶性有所改善，体外、体内试验均有抗癌活性，但其水溶性仍不够大(室温下只有0.2%)，且体内试验对腹水型动物模型有效，对实体型动物模型效果不稳定。本专利技术的目的是提供一种羟基胆固醇类琥珀酸单酯及其盐，在体外试验及动物体内试验均比现有结构类似的化合物具有更强的抗病活性，同时还有在动物体内试验不降低其白细胞的优点和免疫增强作用。本专利技术的目的是这样实现的羟基胆固醇类琥珀酸单酯是采用相应的羟基胆固醇类化合物，与过量琥珀酸酐在吡啶及惰性溶剂中，回流反应制得。惰性溶剂采用甲苯、苯、二甲苯、乙苯等。优先采用甲苯。羟基胆固醇类琥珀酸单酯盐是采用上述单酯在无水乙醇中，与等当量的乙醇碱金属盐的乙醇溶液反应制得，乙醇盐优先采用乙醇钠。上述反应中的羟基胆固醇类化合物采用胆甾烷-3β，5α、6β-三醇、胆甾烷-3β，5α，6α-三醇、胆甾-4-烯-3β，6β-二醇、胆甾-4-烯-3β，6α-二醇。利用式(Ⅰ)结构的化合物与至少一种药物上可接受的赋形剂、稀释剂或载体制得的药物组合物可用于治疗癌症。以下结合实施方式列举本专利技术的典型化合物。化合物1 胆甾烷-3β，5α，6α-三醇3，6-双琥珀酸单酯制备过程如下将2.0g(4.76毫摩尔)胆甾烷-3β，5α，6α-三醇和3.0g(30毫摩尔)琥珀酸酐加入10毫升吡啶与20毫升甲苯的混合液中，回流十小时，减压浓缩至干，加入碎冰块，放置、抽滤、水洗，在不超过100℃下烘干，将产物用硅胶柱析纯化，得1.4g化合物1。性状为白色结晶体，收率45%，熔点184-185℃。元素分析(C35H56O9)计算值(%) C:67.71 H:9.09测得值(%) C:67.52 H:9.14红外光谱(cm-1) 1700-1740( C＝O)化合物2 胆甾烷-3β，5α，6α-三醇3，6-双琥珀酸单酯二钠盐制备过程如下将1.857g(3.00毫摩尔)胆甾烷-3β，5α，6α-三醇3，6双琥珀酸单酯溶于30毫升无水乙醇，加入4.00毫升 1.500M乙醇钠(6.00毫摩尔)的乙醇溶液，搅拌、过滤，以乙醇洗涤，得化合物2，性状为白色无定形粉末，熔点＞300°，收率82.9%。本品水溶液的PH值为7.4。红外光谱(cm-1) 1700( C＝O);1550，1350-1410(COO-1)化合物3 胆甾-4-烯-3β，6β-二醇3，6-双琥珀酸单酯制备过程如下将2.0g(4.975毫摩尔)胆甾-4-烯-3β，6β-二醇和3.0g(30毫摩尔)琥珀酸酐加入到10毫升吡啶和20毫升甲苯的混合液中。其余操作与化合物1制备过程相同。得1.2g化合物3，性状为白色结晶体，收率为40%。熔点228-229℃。元素分析(C35H54O8)计算值(%) C:67.71 H:9.09测得值(%) C:67.52 H:9.14红外光谱(cm-1) 1700-1740( C＝O)化合物4 胆甾-4-烯-3β，6β-二醇3，6-双琥珀酸单酯二钠盐制备过程如下将1.857g(3.075毫摩尔)胆甾-4-烯-3β，6β-二醇3，6双琥珀酸单酯溶于30毫升无水乙醇，加入4.10毫升 1.500M乙醇钠(6.15毫摩尔)的乙醇溶液，其余操作与化合物2的制备过程相同。性状为白色粉末状固体，熔点＞300°，收率91.0%。本品水溶液的PH值为7.6。红外光谱(cm-1) 1700( C＝O);1550，1400-1440(COO-1)从下列实验数据中可清楚地表明本专利技术化合物具有很好的抗癌活性和对白细胞的影响。L1210细胞体外增殖抑制试验样品用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释后，将各浓度组加入96孔培养板各孔内，对照组加相应稀释液。每样品设6档浓度，复管。取对数生长期的L1210细胞新鲜培养液稀释后加入各孔内，置于37℃，5%二氧化碳培养箱内。48小时后计数各孔内存活细胞数，与对照组比较，计算出各浓度组的百分抑制率，然后计算出各种样品的直线回归方程，进而求出各样品的IC50(抑制50%细胞增殖所需的样品浓度)。结果如下样品名称 回归 方程 相关系数 IC50(γ) (μg/ml)化合物1 =-86.4870+113.0618 lgx 0.9617 16.11化合物2 =-23.7348+92.1204 lgx 0.9659 6.32式(III) =-106.9062+106.0791 lgx 0.9843 30.14化合物对淋巴白血病P-388癌细胞的抗癌活性试验体外抗癌活性采用淋巴白血病P-388癌细胞以排染法进行，先将P-388细胞传代培养于RPMI1640培养液中，内含10%小牛血清及青霉素和链霉素。实验时取对数生长期的癌细胞接种于40孔微量培养板内，同时加入不同浓度的样品的生理食盐溶液。对照孔加入生理食盐溶液，在5%二氧化碳培养箱中于37°培养24小时，用排染法计数活细胞，与对照组相比计算细胞生长抑制百分率。结果如下不同浓度的抑制率(%)样品名称100μg/ml 10μg/ml 1μg/ml化合物2 100 100 30化合物4 100 43 14式(III)化合物 100 100 -体内抗癌活性以小鼠肝癌实体瘤作为动物模型，接种后次日开始腹腔给药，连续给药9天，每天一次。第十天将动物处死，称取瘤重，与对照组(腹腔注射生理盐水)对照，计算其抑制率。结果如下样品名称 剂量 给药途径及次数 抑制率(%)化合物2 50mg/kg ip×9 64.912.5mg/kg ip×9 58.0化合物4 12.5mg/kg ip×9 59.03mg/kg ip×9 51.7用小鼠试验其对白细胞的影响，腹腔给药连续4天。第五天取血化验。样品名称 剂量 给药途径 白细胞数及次数 (×106个/ml)化合物2 20mg/kg ip×4 9.13±2.0110mg/kg ip×4 8.67±1.7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有下述结构通式（Ⅰ）的化合物－羟基胆固醇类琥珀酸单酯及其盐＊＊＊ （Ⅰ）其中甾体母环的Ｃ↑［４］、Ｃ↑［５］可为单键或双键；Ｃ↑［６］与Ｏ的键可为α或β；Ｒ为ＯＨ，但当Ｃ↑［４］、Ｃ↑［５］为双键时Ｒ不存在；Ｒ′为Ｈ或－ＣＯＣ Ｈ↓［２］ＣＨ↓［２］ＣＯＯＸ；Ｘ为Ｈ或碱金属。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：容士宏，张新华，
申请(专利权)人：沈阳药学院，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]