一种虎眼万年青皂甙OSW-1的制备方法技术

技术编号：1535854 阅读：1096 留言：0更新日期：2012-04-11 18:40

一种虎眼万年青皂甙ＯＳＷ－１的制备方法，包括以下步骤：　　　　（１）去氢表雄酮溶于Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃中，加入三乙胺或吡啶中一种或二者的混合物，然后滴加Ｃ↓［３］～Ｃ↓［６］的烷基取代酰氯，用量是１ｍｏｌ去氢表雄酮用１～１０升有机溶剂，１～４ｍｏｌ三乙胺或吡啶中一种或二者的混合物，１～３ｍｏｌＣ↓［３］～Ｃ↓［６］的烷基取代酰氯，在－１０～２５℃温度下搅拌１～１０ｈｒｓ，加入冰水萃取，然后依次用碱溶液和无机盐溶液洗涤，干燥，过滤，干燥；　　　　（２）Ｐｈ↓［３］Ｐ溶于非极性芳香烃溶剂中，加入单卤代乙烷，５０～８０℃温度下搅拌２４～７２ｈｒｓ，过滤，非极性溶剂洗涤，干燥，惰性气体保护下，加入Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的醇钠或醇钾，溶于Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的无水醚类溶剂，１５～４０℃温度下搅拌０．５～５ｈｒｓ，然后加入步骤（１）中得到的产物，６０～９０℃温度下搅拌１～１０ｈｒｓ，冷却，萃取，无机盐溶液洗涤至中性，过滤，浓缩，柱层析纯化；　　　　１ｍｏｌ步骤（１）中的产物需要用１～３ｍｏｌ　　Ｐｈ↓［３］Ｐ，５～１０ｍｏｌ单卤代乙烷，１～３升非极性芳香烃溶剂，１～３ｍｏｌＣ↓［２］～Ｃ↓［４］的醇钠或醇钾，１～１０升无水醚类溶剂；　　　　（３）惰性气体保护下，步骤（２）所得的产物和多聚甲醛中加入Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃，在冰浴下，加入ＢＦ↓［３］·Ｅｔ↓［２］Ｏ的ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］溶液，－１０～２５℃温度下搅拌１～１０ｈｒｓ，加入淬灭剂，淬灭反应，反应液过滤除去固体，盐溶液洗涤有机相，真空除去溶剂，残留物经柱层析纯化；　　　　１ｍｏｌ步骤（２）中的产物需要用１～１０ｍｏｌ多聚甲醛，５～２０升Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃，含０．０１～０．１ｍｏｌＢＦ↓［３］·Ｅｔ↓［２］Ｏ的ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］溶液；　　　　（４）步骤（３）得到的产物，ＢｚＯ－ＴＥＭＰＯ或ＰｉｖＯ－ＴＥＭＰＯ或ＴＥＭＰＯ，相转移催化剂，ＮａＨＣＯ↓［３］（０．５Ｍ）／Ｋ↓［２］ＣＯ↓［３］（０．０５Ｍ）的水缓冲溶液，Ｎ－氯代琥珀酰亚胺，溶于Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃，０～４０℃温度下搅拌１～２４ｈｒｓ，分离有机相，水层萃取，合并有机相，盐溶液洗涤，干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析纯化；　　　　１ｍｏｌ步骤（３）中的产物需要用０．０５～１ｍｏｌ　　ＢｚＯ－ＴＥＭＰＯ，０．０５～１ｍｏｌ相转移催化剂，１～２０升缓冲溶液，１～４ｍｏｌ　　Ｎ－氯代琥珀酰亚胺，５～１０升Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃；　　　　（５）惰性气体保护下，步骤（４）所得产物溶于干燥的Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的无水醚类溶剂，冰浴下向其中缓慢加入新制的Ｇｒｉｇｎａｒｄ试剂，加完后搅拌０．１～２ｈｒ，ＴＬＣ显示底物完全消失，向反应体系中加入饱和ＮＨ↓［４］Ｃｌ溶液淬灭反应，Ｅｔ↓［２］Ｏ萃取，饱和食盐水洗涤至中性，无水Ｎａ↓［２］ＳＯ↓［４］干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析纯化；　　　　１ｍｏｌ步骤（４）中的产物需要５～１０升无水醚类溶剂，１～３ｍｏｌ新制的Ｇｒｉｇｎａｒｄ试剂；　　　　（６）惰性气体保护下，步骤（５）所得产物溶于干燥的Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃，加入烷基胺类化合物，冰浴下向其中缓慢加入ＳＯ↓［３］·Ｐｙｒｉｄｉｎｅ的干燥ＤＭＳＯ溶液，加完后于室温下搅拌０．５～２ｈｒｓ，然后倒入饱和食盐水中，Ｅｔ↓［２］Ｏ萃取，依次用３％ＨＣｌ溶液、饱和ＮａＨＣＯ↓［３］溶液及饱和食盐水洗涤至中性，无水Ｎａ↓［２］ＳＯ↓［４］干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析纯化；　　　　１ｍｏｌ步骤（５）中的产物需要１～１０升Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃，１～１０升烷基胺类化合物，１～１０ｍｏｌＳＯ↓［３］·Ｐｙｒｉｄｉｎｅ，１～１０升ＤＭＳＯ；　　　　（７）惰性气体保护下，步骤（６）所得产物，（ＣＨ↓［２］ＯＨ）↓［２］，（ＥｔＯ）↓［３］ＣＨ，ｐ－ＴｓＯＨ·Ｈ↓［２］Ｏ溶于干燥的Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃，室温下搅拌２４～９６ｈｒｓ，然后加入烷基胺类化合物中止反应，Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃萃取，饱和食盐水洗涤至中性，无水Ｎａ↓［２］ＳＯ↓［４］干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析纯化；　　　　１ｍｏｌ步骤（６）中的产物需要１～１０ｍｏｌ（ＣＨ↓［２］ＯＨ）↓［２］，１～１０ｍｏｌ（ＥｔＯ）↓［３］ＣＨ，１～１０ｍｏｌ　　ｐ－ＴｓＯＨ·Ｈ↓［２］Ｏ，１～１０升Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃；　　　　（８）步骤（７）所得产物及强碱溶于ＭｅＯＨ／ＴＨＦ／Ｈ↓［２］Ｏ（８０ｍＬ，１∶６∶１），室温搅拌１２～４８ｈｒｓ，ＥｔＯＡｃ萃取，饱和食盐水洗涤至中性，无水Ｎａ↓［２］ＳＯ↓［４］干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析纯化；　　　　（９）惰性气体保护下，步骤（８）所得产物溶于干燥的Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃和Ｐｙｒｉｄｉｎｅ，然后加入ＤＭＡＰ，冷却至０℃，加入ＴｓＣｌ，加完后升至室温，搅拌反应２４～７２ｈｒｓ，Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃萃取，饱和食盐水洗涤至中性，无水Ｎａ↓［２］ＳＯ↓［４］干燥，过滤，浓缩，溶于干燥的无水醇溶剂，加入ＫＯＡｃ，加热回流反应１～５ｈｒｓ，然后浓缩，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水Ｎａ↓［２］ＳＯ↓［４］干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析纯化；　　　　（１０）Ｋ↓［３］Ｆｅ（ＣＮ）↓［６］，Ｋ↓［２］ＣＯ↓［３］，ＤＡＢＣＯ溶于水中，步骤（９）所得产物溶于ｔ－ＢｕＯＨ中，搅拌下加入Ｋ↓［２］ＯｓＯ↓［４］·２Ｈ↓［２］Ｏ，然后加入Ｋ↓［３］Ｆｅ（ＣＮ）↓［６］的水溶液，４０～８０℃加热反应２４～７２ｈｒｓ，然后撤去油浴，降至室温，加入饱和ＮａＨＳＯ↓［３］溶液至有绿色沉淀，ＥｔＯＡｃ萃取，饱和食盐水洗涤，无水Ｎａ↓［２］ＳＯ↓［４］干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析；其中，１ｍｏｌ步骤（９）所得产物加入１０００～１００００ｍｌ　　ＥｔＯＡｃ；　　　　（１１）惰性气体保护下，步骤（１０）所得产物，（ｎ－Ｐｒ↓［４］Ｎ）ＲｕＯ↓［４］，ＮＭＯ及４＊ＭＳ溶于干燥的Ｃ↓［２］～Ｃ↓［４］的氯代烷烃及ＭｅＣＮ中，室温搅拌反应２４～７２ｈｒｓ，ＴＬＣ显示反应完毕，过滤除去４＊ＭＳ，低温浓缩，残留物经快速柱层析；　　　　（１２）惰性气体保护下，步骤（１１）所得产物及ＣｅＣｌ↓［３］·７Ｈ↓［２］Ｏ溶于干燥的ＴＨＦ（５０ｍＬ）中，－５～１０℃下加入ＮａＢＨ↓［４］，使之自然升至室温反应过夜，然后加入ＭｅＯＨ淬灭反应，Ｅｔ↓［２］Ｏ萃取，饱和食盐水洗涤，无水Ｎａ↓［２］ＳＯ↓［４］干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析；　　　　（１３）惰性气体保护下，步骤（１２）所得产物、二糖给体及４＊ＭＳ溶于干燥的ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］，室温搅拌１０～６０ｍｉｎ，然后浴温降至－７８～０℃，向体系中缓慢滴加促进剂ＴＭＳＯＴｆ或ＢＦ↓［３］．Ｅｔ↓［２］Ｏ，加完后继续于－７８～０℃反应０．５～２ｍｉｎ，ＴＬＣ显示给体基本已经没有，撤去干冰浴，向体系中加Ｅｔ↓［３］Ｎ淬灭反应，过滤除去固体，浓缩，残留物经快速柱层析后溶于体积比１０～５０∶１的丙酮和水混和溶剂中，加入０．０１－０．５当量Ｐｄ（ＭｅＣＮ）↓［２］Ｃｌ↓［２］，搅拌反应１～２天，ＴＬＣ显示反应完毕，浓缩，柱层析即得。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药领域，具体的说，涉及一种虎眼万年青皂甙OSW-1的制备方法。
技术介绍
1992年，日本东京药学和生命科学大学化学家Yutaka Sashida教授从一种原产于南非斯威士兰(Swaziland)，德兰士瓦(Transval)，纳塔尔(Natal)等省的常绿观赏植物虎眼万年青(OrnithogalumSaundersiae)的地下球茎中分离提取出一系列具有胆固醇骨架的皂甙，其主成分是虎眼万年青皂甙OSW-1(Kubo，S.Y.；Terao，M.M.；Sashida，Y.Phytochemistry 1992，31，3969)。生物活性测试显示OSW-1具有极强的广普抗肿瘤活性(Mimaki，Y.；Kuroda，M，；Kameyama，A.；Sashida，Y.Biorg.Med.Chem.Lett.1997，7，633)，例如抗白血病HL-60，鼠淋巴瘤细胞，人肺癌细胞，人肺巨瘤细胞，人肺鳞瘤细胞，人淋巴瘤细胞，鼠乳腺癌细胞，抗阿霉素P388，抗喜树碱P388等。其IC50值在0.1-0.7nM之间，比临床使用的甲胺喋呤(methotreate)、依托泊甙(etoposide)、阿霉素(adriamycin)、顺铂(cisplatin)、喜树碱(camptothecin)以及紫杉醇(taxol)等强10～100倍。而它对人正常肺细胞毒性与临床用药相当(IC50＝1500nM)，而且使用10mg/Kg的量即可延长感染P388白血病的老鼠的寿命达到59％。通常皂甙在很低的浓度下就有显著的溶血作用(如10μg/mL，这种溶血作用大大阻碍了皂甙...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：惠永正，杨志奇，葛强，
申请(专利权)人：上海中药创新研究中心，
类型：发明
国别省市：

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