从红车轴草提取异黄酮类物质的工艺制造技术

本发明专利技术为从红车轴草中提取异黄酮类物质的工艺，涉及从植物提取有效物质的领域，异黄酮类物质是一种很有价值的药用原料，但完整的提取工艺还未见报导，本发明专利技术公开了的完整的提取工艺包括用乙醇溶液热回流进行初提，得乙醇浸膏，再用氢氧化钠溶液进行水解进行纯化，再用盐酸溶液进行水层处理，经乙酸乙酯萃取，减压蒸馏得到异黄酮类物质的粗产品，本发明专利技术具有提取效率高、设备投资少、工程启动快、成本低、易于推广的有益效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及有机物提取工艺，尤其是从植物中提取有效物质的工艺。
技术介绍
红三叶也称红车轴草(Trifolium. Pratense.L)，为豆科(Leguminosae)车轴草 (Trifolium.L)属多年生草本植物。原产于小亚西亚及欧洲西南部，是欧洲、美国东部、新 西兰等海洋性气候地区的最重要的牧草和饲料之一，我国南北各地均有栽培。岷县于1944年 由美国引进红三叶，已有60余年的种植历史，经多年的驯化、选育，现已成为当地的优势草 种。由于岷山红三叶蛋白质含量高、营养丰富，1987年经全国饲料牧草品种审定委员会审定 登记并命名为岷山红三叶，并被誉为中国第一草。研究表明，岷山红三叶是重要的药材，含丰富的异黄酮类物质，因其独特的药用价值， 已由牧草型向药用型发展，该草的主要异黄酮成分为鹰嘴豆芽素A (bionchanin A)和B (formonetin)、芒柄花素(Formononetin)、刺芒柄花苷(0nonirO、染料木素(genistein)、 大豆素(daidzein)、大豆甙元、大豆甙、染料木甙等，其中以鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量最高o分子式结构如下<formula>formula see original document page 3</formula>鹰嘴豆芽素A(biochanin A) <formula>formula see original document page 3</formula>芒柄花素(Formononetin)<formula>formula see original document page 3</formula>刺芒柄花苷(Ononin)<formula>formula see original document page 3</formula> 异黄酮<formula>formula see original document page 3</formula>异黄酮的主要作用是调节人体的内分泌，防止妇女更年期综合症，降低血脂，减少冠心 病的发生、防止骨质疏松症、抗癌、止痛消肿、保护神经系统、抗感染、延缓衰老等。现代 药理学研究证明红车轴草的主要药理作用有-1. 选择性抗痉挛、消炎和杀菌作用红车轴草在体外有抑制草履虫的作用(0.2%醇浸剂 可使草履虫于30min内停止活动)；大豆苷及大豆素可以缓解高血压患者的头痛等症状；其 花粉对某些革兰氏阴性杆菌有抗菌作用，利用其消炎杀菌作用治疗皮肤病。2. 抗癌作用红车轴草含高浓度异黄酮等黄酮类物质,实验表明异黄酮类物质为强抗氧 化剂，是自由基的强清除剂，故具抗癌效用。乳腺癌病人血浆中雌激素偏高，植物雌性激素 对其有拮抗作用，从而抑制乳腺癌；红车轴草对结肠癌也有治疗效果。3. 预防骨质疏松症骨质疏松症,是指骨骼失去致密性而变得粗疏与脆弱，尤以闭经后的 女性最容易患骨质疏松症。这是由于雌性激素的分泌功能随着年龄的增长而降低，防止骨骼,丐 质溶出的作用逐渐减弱,造成钙质流失。4. 雌激素样作用红车轴草作为植物雌激素能够分布到人体每个细胞中发挥作用，这是 人体自身激素达不到的，并且它们具双调节作用，当人体雌激素水平高时，可抑制激素分泌， 当人体雌激素水平低时，它们能够提供额外的雌激素样作用。染料木素、鹰嘴豆芽素A和B 及大豆素均有雌性激素样作用，这可能是由于它们与己烯雌酚和雌二醇结构相似的缘故。红 三叶中的异黄酮以芒柄花素的含量最高,芒柄花素等异黄酮具有弱的雌激素活性,在动物体内 具有多方面的生理作用可以促进肝脏性激素结合蛋白的合成，提高性激素的生物学半衰期； 可以在外周组织(如脂肪组织)抑制芳香化酶的活性,减少睾酮向雌二醇转化；可以在细胞水平 上与内源雌二醇竞争雌二醇受体,从而影响包括下丘脑垂体在内的神经内分泌调节过程,使内 源激素水平发生变化。总之，异黄酮类物质在医学上具有多种用途，是一种很有价值的药物原料，但是其提取 工艺报导得还很少，尤其是完整的提取工艺还未见到。
技术实现思路
为了加速开发红车轴草资源，本专利技术旨在提供一种质量稳定可靠，提取方法简便的红车 轴草提取物异黄酮类物质的工艺。实现上述目的的技术方案如下从红车轴草提取异黄酮类物质的工艺，工艺步骤如下(1) 将红车轴草全草晒干，粉碎；(2) 干粉用50-95%的乙醇回流进行初提，料液比为6-10倍，在50-85。C回流1-2小时，再进行减压蒸馏，压力为0.08Mpa，温度为40-5(TC，回收溶剂，得到乙醇浸膏；(3) 乙醇浸膏用NaOH 1-5%溶液水解纯化，NaOH溶液用量为乙醇浸膏体的4-6倍，充 分溶解后过滤，除去沉淀；(4) 在室温下用石油醚萃取脱色，除去石油醚层；(5) 用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯用量为1:1.5-1:2，萃取5-6次，收集乙酸乙酯层；(6) 加入HC1 3-10%溶液，热回流进行酸解，热回流温度为60-80°C，回流1-2小时；(7) 水层中加入乙酸乙酯提取酸解后水相中的异黄酮类物质，乙酸乙酯用量为 1:1.5-1:2，提取5-6次，收集乙酸乙酯提取层；(8) 合并乙酸乙酯提取层，进行减压蒸馏，0.08Mpa， 40-50°C，得到异黄酮类物质粗PI叩o在上述提取工艺中各参数的优选值为热回流初提用的乙醇浓度为75%。用于水解纯化 的氢氧化钠水溶液浓度为2%。酸解时盐酸溶液浓度为3%。初提时乙醇用量料液比为10倍， 回流温度为7(TC，回流时间l小时。HC1酸解时反应温度为60。C，反应时间为l小时。上述技术方案包括了三个部分l初提取岷山红车轴草全草，晒干，粉碎，经乙醇热回流后，收集滤液，进行减压蒸馏，回收溶剂，得乙醇浸膏。为了达到优选效果，考察溶液浓度、料液比、、提取时间、提取 温度四个因素，从而确定出最佳工艺参数。^ii^用氢氧化钠水溶液将乙醇浸膏充分搅拌溶解，过滤除去沉淀，在适当温度下进 行石油醚萃取后，除去石油醚层，再用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层。为了进一步优化， 仍然采用正交实验的方法，确定了酸碱浓度、反应时间、反应温度四个因素。3水层处理水层加入HC1，进行热回流，并水解处理，加入乙酸乙酯，萃取数次，收集乙酸乙酯层，合并乙酸乙酯层，减压蒸馏，可得异黄酮类物质的粗产品。对异黄酮类物质粗品进行HPLC检测，以十八垸基硅垸键合硅胶柱作为色谱柱，分别取 适当浓度的磷酸水溶液及CH3CN溶液作为流动相，经检测，已划归异黄酮同宗的含量可达20% 以上。I、仪器与试材1、 实验材料红车轴草采自甘肃岷山，将红车轴草晒干，粉碎，粉碎粒径为0.6-0.8mm2、 试剂与仪器标准品鹰嘴豆芽素A (biochaninA,纯度97X， Fluke公司)；芒柄花素(formononetin， 98%， Sigma公司)，无水乙醇，石油醚，乙酸乙酯，盐酸，甲醇，氢氧化钠采用分析纯，乙 腈为国产色谱纯SHIMADZU高效液相色谱仪(闩本岛津)；UV2100紫外可见分光光度计(尤尼柯(上海) 仪器有限公司)，旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；SHZ-m型循环水真空泵(上海亚荣 生化仪器厂)；CU60型电热恒温水箱(上本文档来自技高网...

【技术保护点】
从红车轴草中提取异黄酮类物质的工艺，其特征为工艺步骤如下：　（１）将红车轴草全草晒干，粉碎；　（２）干粉用５０－９５％的乙醇回流进行初提，料液比为６－１０倍，在５０－８５℃回流１－２小时，再进行减压蒸馏，压力为０．０８Ｍｐａ，温度为４０－５０℃，回收溶剂，得到乙醇浸膏；　（３）乙醇浸膏用ＮａＯＨ　１－５％溶液水解纯化，ＮａＯＨ溶液用量为乙醇浸膏体的４－６倍，充分溶解后过滤，除去沉淀；　（４）在室温下用石油醚萃取脱色，除去石油醚层；　（５）用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯用量为１∶１．５－１∶２，萃取５－６次，收集乙酸乙酯层；　（６）加入ＨＣｌ３－１０％溶液，热回流进行酸解，热回流温度为６０－８０℃，回流１－２小时；　（７）水层中加入乙酸乙酯提取酸解后水相中的异黄酮类物质，乙酸乙酯用量为１∶１．５－１∶２，提取５－６次，收集乙酸乙酯提取层；　（８）合并乙酸乙酯提取层，进行减压蒸馏，０．０８Ｍｐａ，４０－５０℃，得到异黄酮类物质粗品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵志光，周振亚，白高英，马晓军，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]