编码ＰＡＩＧＢ多肽的分离的核酸片段，其选自： （ａ）编码ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、４、６、８和１０的分离的核酸片段， （ｂ）编码与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、４、６、８和１０具有至少８５％同一性的氨基酸序列的分离的核酸片段， （ｃ）与（ａ）的分离的核酸片段杂交的分离的核酸分子，其中杂交条件为６×ＳＳＣ（１Ｍ ＮａＣｌ）、４５至５０％的甲酰胺、１％ＳＤＳ，于３７℃，以及５５至６０℃下在０．５×至１×ＳＳＣ中洗涤；和， （ｄ）与（ａ）、（ｂ）或（ｃ）互补的分离的核酸片段。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于分子生物学领域。更具体地，本专利技术涉及用于骨相关病症的诊断、预后、预防、治疗和疗法评估的方法和组合物。
技术介绍
动物，包括人和其他哺乳动物，会受到许多骨相关病症如骨质疏松症和Paget氏病的困扰。虽然骨相关病症的原因很不清楚，但可以确信的是可能在骨形成和骨吸收(骨分解)之间存在不平衡。例如，在患有骨质疏松状况的动物中，骨吸收超过了骨形成。骨形成和骨吸收的复杂过程可由两种细胞类型介导成骨细胞，其参与骨形成，以及破骨细胞，其参与骨吸收。试剂的施用将是用于骨相关病症治疗的一种有希望的治疗方法，该试剂设计用于以一定方式修饰骨形成速率和骨吸收速率之间的平衡，从而提高前者相对于后者的比率，导致没有净骨丢失。例如，骨丢失可通过抑制骨吸收(如，抑制破骨细胞的活性)或诱导骨形成(如，诱导成骨细胞的活性)而得以遏制。在此前出现的骨丢失恢复后，达到一种稳定的状态，其中骨产生速率和骨吸收速率相等。所述修饰可以通过刺激骨沉积的生理机制，即，骨形成，或通过延缓骨吸收的机制，或两者一起而实现。用于达到该目的的目前所用的或处于实验阶段的药物包括激素替补疗法，选择性雌激素受体调节剂(SERMs)(如，雷洛昔芬)，二膦酸盐(如，阿仑膦酸钠)以及降钙素。这些治疗法通过减少破骨细胞生成和降低破骨细胞活性而减少骨吸收(Canalis E，2000，J Clin Invest.，106(2)pp 177-179)。虽然由此导致的骨吸收减少带来骨盐密度(BMD)的少量增高，但这些药物并没有增强骨基质沉积或骨量(Tashjian，A.H.，等，J.Bone Miner.Res.171151-1161.2002)。一种试剂，甲状旁腺激素(PTH)，每日施用一次能刺激骨基质形成(Cosman，F.等，Calcif.Tissue Int.62475-480，1998，Neer，R.M.，等，N.Engl.J.Med.3441434-1441，2001)。PTH和其生物活性片段PTH 1-34从1930年起就已经被认为能发挥强的骨形成作用。在大量的临床研究表明PTH的骨形成活性主要在松质骨中而对密质骨只有很少的或没有影响后，在1970年代和1980年代对PTH的骨形成能力再次产生了兴趣(Bauer等，1929，J Exp Med，49pp 145-162，Selye H，1932，Endocrinology，16pp 547-558，Dempster等，1993，Endocrine Reviews，14(6)pp 690-709，Bauer等，1929，J Exp Med，49pp 145-162；Selye H，1932，Endocrinology，16pp 547-558)。更多最新的工作表明通过PTH的骨形成的增强不仅增加骨量而且还改善骨结构和骨生物力学特性(Brommage，R.等，J.Clin.Endocrinol.Metab.8437573763，1999.，Sato，M.等，Osteoporos.Int.11871-880，2000.，Burr，D.B.，等，J.Bone Miner.Res.16157-165，2001.，Jerome，C.P.，等，Bone 28150-159，2001)。虽然PTH具有这些合成代谢(骨形成)特性，但其作用仍是复杂的，因为在某些治疗方案中其具有分解代谢(骨降解)活性(Dempster，D.W.等，Endocrine Reviews，14690-709，1993)。存在重要的需求以鉴定新的基因及其蛋白产物，来用于阐明骨调节或骨形成分子机制、用于新药物的筛选和开发、用于骨发育和骨丢失病症的诊断、预后、预防和治疗，以及骨相关病症如骨质疏松症疗法的评估。此外，当前还存在对骨相关病症模型的工业需求，包括动物模型，以使得能够筛选和鉴定用于这些疾病治疗的化合物。本专利技术克服了这些问题且提供了所需的工具。专利技术概述本专利技术提供由PTH的合成代谢活性调节的新的PTH应答基因(PAIGB)和其变体。本专利技术进一步提供了编码PAIGB蛋白或其片段的分离的核酸片段。本专利技术涉及编码PAIGB多肽的分离的核酸片段，其选自(a)编码SEQ ID NO2、4、6、8和10的分离的核酸片段，(b)编码与SEQ ID NO2、4、6、8和10具有至少85％同一性的氨基酸序列的分离的核酸片段，(c)能与(a)的分离的核酸片段在6×SSC(1M NaCl)，45至50％甲酰胺，1％SDS中37℃的杂交条件，以及在0.5×至1×SSC中55至60℃的洗涤条件下杂交的分离的核酸分子；和(d)与(a)、(b)或(c)互补的分离的核酸片段。核酸分子及相应的多肽片段包含在附随的序列表中且在专利技术的简述中得以描述。在另一实施方案中，本专利技术提供PAIGB多肽。在另一实施方案中，本专利技术涉及编码PAIGB多肽的嵌合构建体。在另外的实施方案中，本专利技术涉及包含编码PAIGB多肽的嵌合构建体的宿主细胞。在另外的实施方案中，本专利技术提供获得编码PAIGB多肽的核酸片段的方法，包括(a)用SEQ ID NO3中所列核酸片段的全部或部分探测基因组文库；(b)鉴定与步骤(a)的核酸片段杂交的DNA克隆；以及确定包含步骤(b)中鉴定的DNA克隆的核酸片段的序列。在另一实施方案中，本专利技术提供获得PAIGB多肽的方法。在另一实施方案中，本专利技术提供用于在哺乳动物中调节骨形成活性的组合物，该组合物包含以下三者中的至少一个(i)PAIGB核酸片段，(ii)PAIGB多肽，或(iii)由所述多肽或其部分形成的抗体。在另一实施方案中，本专利技术提供改变PAIGB基因或多肽表达的试剂。在另一实施方案中，本专利技术提供确定试剂是否改变PAIGB mRNA表达的方法，该方法包括a)测量存在于不与试剂接触的试样中PAIGB mRNA的水平；b)测量存在于与试剂接触的试样中PAIGB mRNA的水平；和c)当步骤a)中测量的PAIGB mRNA水平与步骤b)中测量的PAIGB mRNA水平不同时，确定该试剂改变PAIGB mRNA的表达。在另一实施方案中，本专利技术提供筛选用于有效改变PAIGB核酸片段表达的试剂的方法，该方法包括a)将包含PAIGB核酸片段的试样与试剂在适合PAIGB核酸片段表达的条件下接触，b)检测改变的PAIGB核酸片段的表达，和c)在各种量的试剂存在时以及不存在该化合物时比较PAIGB核酸片段的表达。在另一实施方案中，本专利技术提供筛选用于治疗骨相关病症的试剂的方法，包括a)将试剂与经遗传工程改造可表达PAIGB基因的培养的宿主细胞接触和，b)检测在PAIGB基因、PAIGB mRNA或PAIGB多肽表达水平中的变化。在另一实施方案中，本专利技术提供在受试者中评估骨相关病症的治疗功效的方法，包括用给定的方案治疗受试者；评定PAIGB核酸片段或PAIGB多肽的表达水平，其中相对于治疗前的水平，治疗后PAIGB核酸片段或PAIGB多肽表达水平的变化指示了骨病症治疗的功效。在另一实施方案中，本专利技术提供鉴定能结合PAIGB的多肽的方法，包括应用哺乳动物双杂交方法，其中编码所述PAIGB的序列由一个杂交载体携带，来自cDNA或基因组DNA文库的序列由第二杂交载体携带，随后载体用于转化宿主细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：J·A·洛宾逊，V·斯托亚诺维克苏苏利克，P·巴比，R·J·默里尔斯，
申请(专利权)人：惠氏公司，
类型：发明
国别省市：
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