高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置制造方法及图纸

本发明专利技术属于生物技术领域领域，具体涉及一种高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置。本发明专利技术提供了一种用于制备粗品肝素钠的试剂组合物，所述试剂组合物包括以下试剂：低盐洗涤试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；中盐洗涤试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠溶液；高盐洗涤试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；洗脱试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；沉淀试剂E：20～40°的肝素钠乙醇水溶液。本发明专利技术利用不同盐度的洗涤试剂进行梯度洗涤，结合低盐度洗脱和低乙醇度沉淀的制备方法制备的粗品肝素钠杂质低、肝素钠分子结构保存完整，生物活性接近或达到肝素钠注射级水平。

Method for preparing high efficient crude heparin sodium and production device thereof

The invention belongs to the technical field of biotechnology, in particular to a preparation method of a high efficiency crude product heparin sodium and a production device thereof. The present invention provides a method for preparing reagent composition by heparin sodium, the reagent composition comprises the following reagents: low salt washing reagent A: the quality of volume percentage of 2 to 5% sodium chloride solution; salt washing reagent B: the quality of volume percentage of 3 to 6% Sodium Chloride Solution; high salt washing reagent C quality: volume percentage of 4 to 7% sodium chloride aqueous solution; eluting reagent D: the quality of volume percentage of 8 to 20% sodium chloride aqueous solution; precipitation reagent E:20 to 40 degrees of heparin in ethanol water solution. The invention uses washing agents of different salinity gradient washing combined with heparin sodium in low salinity and low impurity elution ethanol precipitation of preparation method of low sodium heparin molecular structure intact, close to or reach the level of biological activity of heparin sodium injection.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
领域，具体涉及一种高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置。
技术介绍
肝素钠(HeparinSodium)肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药。肝素钠是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质。在动物体内多以肝素钠-蛋白质复合物的形式存在。医学上，肝素钠在体内外均有抗凝血作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间，常用于输血时预防血液凝固及血库保存鲜血等体外抗凝剂。临床上具有抗凝血、降血脂、保护内皮细胞、抗血小板积聚和释放、促纤溶、抑制动脉平滑肌细胞增殖、降低血液粘度、降血脂和抗炎等作用，可用于治疗各种疾病并发的播散性血管内凝血早期，预防动、静脉血栓和肺栓塞，治疗动、静脉血栓和肺栓塞，缺血性脑卒中，不稳定型心绞痛(减轻症状、预防心肌梗塞)，急性心肌梗塞(防止早期再梗塞和梗塞区延展，降低病死率)；在人工心肺、腹膜透析或血液透析时作为抗凝血药物。目前提取粗品肝素钠的方法有很多种，普通常用的主要有盐解法、酶解法等。常规提取工艺首先将猪粘膜或初级肝素钠水溶解，经氯化钠或酶解离，大孔阴离子树脂吸附，洗脱，乙醇沉淀、脱水得粗品肝素钠。常规生产方法使用饱和盐水造成盐的大量浪费和环境污染，而且得到的肝素钠粗品含大量蛋白核酸杂，硫酸皮肤素和硫酸软骨素等有机杂质，生物活性低。因此需要开发一种新的肝素钠制备工艺来制备低杂质、高效价的肝素钠粗品。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物及用所述试剂组合物制备粗品肝素钠的方法，本专利技术的方法制备的肝素钠粗品杂质低、生物活性接近到达肝素钠注射剂生物活性，使肝素钠注射级的生产变得极其容易。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物，包括以下试剂：试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠水溶液；试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为20～40°。所述试剂组合物能有效去除杂质、提高肝素钠的活性；所得粗品肝素钠抗IIa活性效价接近或达到肝素钠精品要求，极大方便肝素钠生产的质量控制。猪粘膜可以通过生猪屠宰厂采购猪小肠，然后采用自动肠衣清洗生产线获得，一般来说1根猪小肠生产约1～1.5公斤粘膜。初级肝素钠可以是市售常规生产工艺生产的含有大量杂质活性低的肝素钠粗品。本专利技术的目的之二在于提供一种用所述试剂组合物制备粗品肝素钠的方法，具体包括以下步骤：1)溶解：将猪粘膜置于水介质中混溶，加入氯化钠，至其全部溶解得溶液；2)酶解：在步骤1)所述溶液中加入蛋白酶进行酶解，灭活后得酶解液；3)吸附：用碱性阴离子交换树脂对步骤2)所述酶解液保温吸附；4)洗涤：依次用上述试剂A、试剂B和试剂C对步骤3)碱性阴离子交换树脂进行梯度洗涤；5)洗脱：用试剂D对步骤4)洗涤后的碱性阴离子交换树脂进行两次洗脱，收集两次的洗脱液；6)沉淀干燥：在步骤5)所述的洗脱液中加入乙醇得到试剂E进行沉淀，去掉上清液后对沉淀进行干燥，得高效价粗品肝素钠。常规生产方法在对肝素钠溶液进行酶解后，使用工艺用水洗涤得到低活性的粗品肝素钠(初级肝素钠)；这种方法基本上无法去除起始物料中的大量有机和无机杂质。本专利技术采用不同浓度的氯化钠溶液：低盐洗涤试剂A、中盐洗涤试剂试剂B和高盐洗涤试剂试剂C作为洗涤液对吸附后碱性阴离子交换树脂进行梯度洗涤以去除大量无极性或低极性的各种无机杂质和大量低极性的有机杂质如蛋白质和核酸包括酶解过程中使用的蛋白酶。本专利技术还首次在商业化生产中引进了离子交换树脂装柱进行动态离子交换进行吸附洗涤或洗脱生产粗品肝素钠。动态离子交换工艺比传统静态离子交换工艺去除杂质效果更好。常规生产方法一般都是用饱和氯化钠水溶液将在离子交换树脂上绑定的肝素洗脱下来。这种方法导致大量氯化钠的浪费，而且造成严重的盐碱地环境污染。本专利技术采用低离子强度的试剂D将肝素洗脱下来，既节约氯化钠使用量，对环境友好；而且可以将其他大分子多糖相关物质阻止在粗品肝素钠产品中，减少污染可能性。常规生产方法在洗脱液中加入大量乙醇使洗脱液中乙醇含量高达50°以上，导致肝素钠沉淀出来的同时也把大量的相关杂质如硫酸软骨素和硫酸皮肤素沉淀出来。本专利技术采用低乙醇含量沉淀提取肝素钠，将有关杂质基本完全去掉，大大提高肝素钠纯度，同时节约乙醇使用量，增加生产安全性。作为一种优选，步骤1)所述混溶的温度为10～70℃，混溶2-24小时。作为一种优选，步骤1)所述混溶的温度为50～60℃，混溶4-6小时。进一步，步骤1)所述加入氯化钠在混合溶液中质量体积百分数为1～7％的氯化钠。作为一种优选，步骤1)所述加入氯化钠在混合溶液中质量体积百分数为2～4％的氯化钠溶液。进一步，步骤2)所述蛋白酶与步骤1)所述混溶溶液的质量体积百分比为0.05～0.5％。作为一种优选，步骤2)所述蛋白酶与步骤1)所述混溶溶液的质量体积百分比为0.05～0.2％，所用蛋白酶为碱性蛋白酶。进一步，步骤2)所述酶解的温度为30～70℃，酶解的时间为1～10小时。作为一种优选，步骤2)所述酶解的温度为40～60℃，酶解的时间为2～4小时。作为一种优选，步骤2)中灭活为酶解后升温到80～100℃，保温10-120分钟。作为一种优选，步骤2)中灭活为酶解后升温到85～95℃，保温30-40分钟。进一步，步骤3)所述碱性阴离子交换树脂为大孔强碱性阴离子交换树脂，所述保温吸附的温度为30～80℃。作为一种优选，步骤3)所述碱性阴离子交换树脂为AmberliteTMFPA98CL阴离子交换树脂，保温吸附的温度为40～65℃。进一步，步骤3)所述保温吸附的速率为0.0008～0.004BV/分钟，步骤4)所述洗涤的速率为0.006～0.03BV/分钟；步骤5)所述洗脱的速率为0.004～0.009BV/分钟。作为一种优选，步骤3)所述保温吸附的速率为0.0015～0.002BV/分钟，步骤4)所述洗涤的速率为0.008～0.02BV/分钟；步骤5)所述洗脱的速率为0.005～0.008BV/分钟。作为一种优选，步骤4)梯度洗涤中，温度为10～60℃，优选室温。作为一种优选，步骤4)梯度洗涤中试剂A洗涤至少2次。作为一种优选，步骤5)所述洗脱温度为10～60℃，优选室温。进一步，步骤6)所述沉淀的温度为10～60℃，沉淀的时间为2～24小时。作为一种优选，步骤6)所述沉淀的温度为室温，沉淀的时间为12～24小时。作为一种优选，步骤6)中沉淀后收集沉淀物在50～60℃真空烘干48小时得粗品肝素钠。本专利技术的目的之三在于提供一种利用肝素钠的生产装置制备肝素钠的方法，所述生产装置包括反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3，试剂配制罐4和沉淀罐5，所述反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3和沉淀罐5从上至下顺序布置，所述反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3和沉淀罐5之间通过管道连接，管道上设置有启闭阀门6；所述离子交换柱3的上端设有排气管31，在离子交换柱3的外侧壁上设置有放液管32；所述试剂配制罐4位于离子交换柱3上方，所述试剂配制罐4的底部设有两个出液管，出本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物，其特征在于，包括以下试剂：试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠水溶液；试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为20～40°。

【技术特征摘要】
1.用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物，其特征在于，包括以下试剂：试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠水溶液；试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为20～40°。2.用权利要求1所述试剂组合物制备粗品肝素钠的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1)溶解：将猪小肠粘膜或初级肝素钠置于水介质中和氯化钠混溶，得混合液；2)酶解：在步骤1)所述混合液中加入蛋白酶溶液进行酶解，灭活后得酶解液；3)吸附：用碱性阴离子交换树脂对步骤2)所述酶解液进行保温吸附；4)洗涤：依次用上述试剂A、试剂B和试剂C对步骤3)碱性阴离子交换树脂进行梯度洗涤；5)洗脱：用试剂D对步骤4)洗涤后的碱性阴离子交换树脂进行两次洗脱，收集两次的洗脱液；6)沉淀干燥：在步骤5)所述的洗脱液中加入乙醇得试剂E进行沉淀，去掉上清液后对沉淀进行干燥，得粗品肝素钠。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)所述氯化钠加入质量体积百分比为1～7％。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述蛋白酶与步骤1)所述混合液的质量体积比为0.5～5g：1L。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述酶解的温度为30～70℃，酶解的时间为1～10小时。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)所述碱性阴离子交换树脂为大孔强碱性阴离子交换树脂，所述保温吸附的温度为≤65℃，上柱速率为0.0008～0.004BV/分钟。7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4)所述洗涤的速率为0.006～0.03BV/分钟；步骤5)所述洗脱的速率为0.004～0.009BV/分钟。8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤6)所述沉淀的温度为10～60℃，沉淀的时间为2～24小时。9.利用肝素钠的生产装置制备肝素钠的方法，其特征在于，所述生产装置包括反应罐(1)，吸...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹怀君，
申请(专利权)人：重庆伊诺生化制品有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50