一种多糖中脂肪酸含量的检测方法技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，且公开了一种多糖中脂肪酸含量的检测方法，包括以肝素钠多糖为例其检测特征包括以下步骤：标准溶液的配制、样品溶液的配制、标准加入样品溶液、实验分析和计算结果。该多糖中脂肪酸含量的检测方法，通过将脂肪转化为脂肪酸，克服了脂肪不容易气化，不能采用气相色谱仪检测的难题，能够有效控制肝素钠中脂肪酸的含量，降低肝素钠的致病风险；整个检测方法简单、快速、准确率高，便于工业化推广应用。便于工业化推广应用。便于工业化推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种多糖中脂肪酸含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体为一种多糖中脂肪酸含量的检测方法。

技术介绍

[0002]细胞中的脂质按照功能分类主要有3类：储藏脂类，结构脂类，调节脂类，据文献报道，小肠粘膜组织中脂质主要是膜脂与粘附在小肠表面的脂肪，膜脂主要包括磷脂、糖脂和胆固醇三种类型。磷脂是构成膜脂的基本成分，约占整个膜脂的50％以上。
[0003]糖脂是含糖而不含磷酸的脂类，含量约占膜脂总量5％以下。糖脂也是两性分子，其结构与鞘磷脂很相似，只是由一个或多个糖残基代替了磷脂酰胆碱而与鞘氨醇的羟基结合。其含量较少。胆固醇是中性脂质胆固醇主要存在真核细胞膜上，含量一般不超过膜脂的1/3。胆固醇功能是提高双脂层的力学稳定性，调节双脂层流动性，降低水溶性物质的通透性。食物中的脂肪在消化道分解为脂肪酸被小肠吸收，重新合成脂肪附着在小肠黏膜上；食物中的糖和蛋白质，如果摄入量超过消耗量，也会转化为脂肪酸，进一步合成脂肪附着在小肠上。因此粘附在小肠表面的脂肪与脂肪酸可以相互转化。
[0004]粘多糖是含氮的不均一多糖，是构成细胞间结缔组织的主要成分，也广泛存在于哺乳动物各种细胞内。化学组成为糖醛酸和氨基己糖交替出现，有时含硫键。也称为糖胺聚糖。重要的粘多糖有：皮肤素，肝素钠，角质素，软骨素和透明质酸等。近10年来由于膜的化学功能，免疫物质的化学研究与发展以及新药资源寻找与开发等，发现糖类具有多种多样的功能，在生命现象中参与了细胞的各种活动。因此，多糖的研究开始活跃起来。关于动物粘多糖在生物学、医学范围内的研究正在不断深入展开。已经证实，此类成分具有多种药理活性，包括抗凝血、降血脂、抗病毒、抗肿瘤及抗放射等作用。粘多糖大多从动物组织中提取，脂质作为细胞膜的主要组成部分，在生产多糖的提取过程中有可能会引入一定量的脂质，进而影响多糖的药理，因此多糖尤其是肝素钠中脂质检测方法的建立非常重要。
[0005]针对多糖中脂肪酸，我们提出了一种多糖中脂肪酸含量的检测方法。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的上述不足，本专利技术提供了一种多糖中脂肪酸含量的检测方法，本专利技术利用该方法可以快速、准确地定量肝素钠中各类脂肪酸，从而保证肝素钠的质量。
[0007]本专利技术提供如下技术方案：一种多糖中脂肪酸含量的检测方法，包括以肝素钠多糖为例其检测特征包括以下步骤：
[0008]S1、标准溶液的配制：
[0009]内标溶液：二甘醇二甲醚溶液；
[0010]标准储备液A：称取各脂肪酸甲酯标准品适量，用内标液配制为溶液；
[0011]标准储备液B：吸取脂肪酸甲酯溶液，加入内标液定容；
[0012]回收标准溶液(肉豆蔻酸、棕榈酸)：称量适量肉豆蔻酸、棕榈酸，加入正己烷，配制
成溶液。
[0013]S2、样品溶液的配制
[0014]皂化：称取样品于西林瓶中，加入氢氧化钠溶液，水浴加热；
[0015]甲基化：冷却皂化后溶液至室温，加入甲醇和浓硫酸，漩涡搅拌，冷却至室温；
[0016]萃取：加入氯化钠溶液和二甘醇二甲醚溶液萃取甲基化溶液；
[0017]样品溶液：将有机相层转移到分液漏斗，加入氢氧化钠溶液，混匀后，收集有机相于GC进样瓶。
[0018]S3、标准加入样品溶液(检验萃取率)：
[0019]皂化：称取肝素钠于西林瓶中，加入氢氧化钠溶液和回收率标准溶液，水浴加热；
[0020]甲基化：冷却皂化后溶液至室温，加入甲醇和浓硫酸，漩涡搅拌，冷却至室温；
[0021]萃取：加入氯化钠溶液和二甘醇二甲醚溶液萃取甲基化溶液；
[0022]标准加入样品溶液：将有机相层转移到分液漏斗中，加入氢氧化钠溶液，混匀后，收集有机相于GC进样瓶。
[0023]S4、实验分析：
[0024]选择气相色谱仪、FID检测器、100％聚乙二醇毛细管色谱柱，在程序升温过程中对标准溶液，标准加入样品溶液，样品溶液进行分析，标准溶液中任何两个连续成分峰完全分离，分离度不小于2.0，肉豆蔻酸甲酯(C14)、棕榈酸甲酯(C16)在标准加入样品溶液中的峰面积是标准溶液中峰面积(以平均值计)的0.7,
‑
1.3倍；
[0025]S5、计算结果：
[0026]萃取效率适用性：按下式计算
[0027][0028]R：标准加入样品溶液中(肉豆蔻酸甲酯(C14)或棕榈酸甲酯(C16))与标准溶液平均峰面积之比；
[0029]A标加：标准加入样品溶液中(肉豆蔻酸甲酯(C14)或棕榈酸甲酯(C16))峰面积；
[0030]A样品：样品溶液中(肉豆蔻酸甲酯(C14)或棕榈酸甲酯(C16))平均峰面积；
[0031]A标准：标准溶液中(肉豆蔻酸甲酯(C14)或棕榈酸甲酯(C16))平均峰面积；
[0032]C标准：(肉豆蔻酸甲酯或棕榈酸甲酯)重量/(肉豆蔻酸甲酯或棕榈酸甲酯)分子量；
[0033]C标加：(肉豆蔻酸或棕榈酸)重量/(肉豆蔻酸或棕榈酸)分子量；
[0034]其中：肉豆蔻酸(C14)分子量为228.37，肉豆蔻酸甲酯分子量为242.40，棕榈酸(C16)分子量为256.42，棕榈酸甲酯(C16)的分子量为270.00。
[0035]S6、按下式计算供试溶液中各脂肪酸含量(％)：
[0036][0037]其中：A
t
：样品溶液中各脂肪酸甲酯峰的平均峰面积；
[0038]A
st
：标准溶液中各脂肪酸甲酯峰的平均峰面积；
[0039]C
t
：样品溶液浓度(约100mg/mL)；
[0040]C
st
：标准储备液B中各脂肪酸甲酯的浓度(约0.01mg/mL)；
[0041]C：标准品中各脂肪酸甲酯的含量。
[0042]优选的，所述S1中的二甘醇二甲醚吸取量为53uL到500mL容量瓶。
[0043]优选的，所述S1中标准储备液A配制浓度为1mg/mL，标准储备液B中各脂肪酸甲酯的浓度为0.01mg/mL，回收标准溶液中肉豆蔻酸、棕榈酸的浓度为0.1mg/mL。
[0044]优选的，所述S2中皂化称取样品量1000mg于20mL西林瓶中再加入2mL15％w/v氢氧化钠溶液，水浴加热25min，甲基化加入甲醇5mL，浓硫酸1mL，旋涡搅拌30min。
[0045]优选的，所述S2中萃取加入300μL20％w/v氯化钠溶液和3mL0.1mg/mL二甘醇二甲醚溶液，样品溶液中加入6mL1.2％w/v氢氧化钠溶液。
[0046]优选的，所述S3中皂化称取样品量1000mg于20mL西林瓶中再加入2mL15％w/v氢氧化钠溶液和1mL回收率标准溶液，水浴加热25min，甲基化加入甲醇5mL，浓硫酸1mL，旋涡搅拌30min。
[0047]优选的，所述S3中萃取加入300μL20％w/v氯化钠溶液和3mL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多糖中脂肪酸含量的检测方法，其特征在于，包括以肝素钠多糖为例其检测特征包括以下步骤：S1、标准溶液的配制：内标溶液：二甘醇二甲醚溶液；标准储备液A：称取各脂肪酸甲酯标准品适量，用内标液配制为溶液；标准储备液B：吸取脂肪酸甲酯溶液，加入内标液定容；回收标准溶液(肉豆蔻酸、棕榈酸)：称量适量肉豆蔻酸、棕榈酸，加入正己烷，配制成溶液。S2、样品溶液的配制皂化：称取样品于西林瓶中，加入氢氧化钠溶液，水浴加热；甲基化：冷却皂化后溶液至室温，加入甲醇和浓硫酸，漩涡搅拌，冷却至室温；萃取：加入氯化钠溶液和二甘醇二甲醚溶液萃取甲基化溶液；样品溶液：将有机相层转移到分液漏斗，加入氢氧化钠溶液，混匀后，收集有机相于GC进样瓶。S3、标准加入样品溶液(检验萃取率)：皂化：称取肝素钠于西林瓶中，加入氢氧化钠溶液和回收率标准溶液，水浴加热；甲基化：冷却皂化后溶液至室温，加入甲醇和浓硫酸，漩涡搅拌，冷却至室温；萃取：加入氯化钠溶液和二甘醇二甲醚溶液萃取甲基化溶液；标准加入样品溶液：将有机相层转移到分液漏斗中，加入氢氧化钠溶液，混匀后，收集有机相于GC进样瓶。S4、实验分析：选择气相色谱仪、FID检测器、100％聚乙二醇毛细管色谱柱，在程序升温过程中对标准溶液，标准加入样品溶液，样品溶液进行分析，标准溶液中任何两个连续成分峰完全分离，分离度不小于2.0，肉豆蔻酸甲酯(C14)、棕榈酸甲酯(C16)在标准加入样品溶液中的峰面积是标准溶液中峰面积(以平均值计)的0.7,
‑
1.3倍；S5、计算结果：萃取效率适用性：按下式计算R：标准加入样品溶液中(肉豆蔻酸甲酯(C14)或棕榈酸甲酯(C16))与标准溶液平均峰面积之比；A标加：标准加入样品溶液中(肉豆蔻酸甲酯(C14)或棕榈酸甲酯(C16))峰面积；A样品：样品溶液中(肉豆蔻酸甲酯(C14)或棕榈酸甲酯(C16))平均峰面积；A标准：标准溶液中(肉豆蔻酸甲酯(C14)或棕榈酸甲酯(C16))平均峰面积；C标准：(肉豆蔻酸甲酯或棕榈酸甲酯)重量/(肉豆蔻酸甲酯或棕榈酸甲酯)分子量；C标加：(肉豆蔻酸或棕榈酸)重量/(肉豆蔻酸或棕榈酸)分子量；其中：肉豆蔻酸(C14)分子量为228.37，肉豆蔻酸甲酯分子量为242.40，棕榈酸(C16)分子量为256.42，棕榈酸甲酯(C16)的分子量为270.00。
S6、按下式计算供试溶液中各脂肪酸含量(％)：其中：A
t
：样品...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹怀君，吕佳，
申请(专利权)人：重庆伊诺生化制品有限公司，
类型：发明
国别省市：