用于预测硫代嘌呤诱导的白细胞减少症风险的组合物，所述组合物含有NUDT15基因中的单核苷酸多态性标记制造技术

本发明专利技术涉及用于预测硫代嘌呤诱导的白细胞减少症风险的组合物，所述组合物含有NUDT15基因中的单核苷酸多态性标记；本发明专利技术特别涉及：用于预测克罗恩病、溃疡性结肠炎、白血病或器官移植患者中的硫代嘌呤诱导的白细胞减少症风险的组合物，所述组合物含有NUDT15基因中的单核苷酸多态性标记；用于预测该风险的试剂盒；以及用于预测该风险的方法。根据本发明专利技术，能够在克罗恩病、溃疡性结肠炎、白血病或器官移植患者中对对于在硫代嘌呤治疗期间发生的白细胞减少症高度敏感的患者进行早期快速分类，因此能有效地实施患者个性化的治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的构思涉及用于预测克罗恩病、溃疡性结肠炎、白血病或器官移植患者中的硫代嘌呤(thiopurine)诱导的白细胞减少症(leukopenia)风险的组合物，所述组合物含有NUDT15基因中的单核苷酸多态性标记；用于预测该风险的试剂盒；以及用于预测该风险的方法。
技术介绍
硫代嘌呤药物硫唑嘌呤(AZA)和6-巯基嘌呤(6-MP)广泛地应用于癌症、器官移植和自体免疫疾病或炎症性疾病(例如炎症性肠病(IBD))患者的治疗。用于治疗IBD的推荐剂量对于AZA来说为2.0-3.0mg/kg/天，对于6-MP来说为1.0-1.5mg/kg/天。然而，应用AZA/6-MP的主要缺陷之一在于骨髓抑制(myelosuppression)，在利用这些药剂治疗的白种人IBD患者的2％至5％中发生骨髓抑制。因此，为了降低骨髓抑制的风险，美国食品与药品管理局建议在开始硫代嘌呤治疗前进行硫代嘌呤S-甲基转移酶(TPMT)基因活性测试或酶活性测试。然而，以往的研究显示，在硫唑嘌呤治疗过程中经历骨髓抑制的IBD患者仅有1/4具有TPMT突变，这表明在大多数患者中骨髓抑制由其它因素引起。因此，在硫代嘌呤治疗开始之前预先测试TPMT状态的实用性尚存质疑。进一步地，虽然亚洲人中TPMT突变的频率(2％至3％)比白种人(约10％)低，但是与白种人相比，亚洲人在硫代嘌呤治疗过程中白细胞减少症的发生非常普遍。在之前的研究中，在硫代嘌呤治疗过程中，在31.2％的韩国克罗恩病(CD)患者中观察到白细胞减少症(定义为白细胞[WBC]计数<3000/mm3)。观察到白细胞减少症时的AZA的中值剂量(mediandose)仅为1.34mg/kg/天。在另一项韩国多中心研究中，在39.6％的IBD患者中注意到白细胞减少症(WBC<3000/mm3)；在这些患者中AZA的平均剂量为1.80mg/kg/天。在一项日本的研究中，尽管在大多数患者中AZA的每日剂量仅有50mg，在15.8％的具有野生型TPMT的日本IBD患者中发现白细胞减少症(WBC<3000/mm3)。鉴于在硫代嘌呤治疗过程中发生白细胞减少症的亚洲IBD患者中仅有0至5.6％存在TPMT突变，亚洲人群中的白细胞减少症的遗传基础仍然知之甚少。
技术实现思路
技术问题本专利技术的构思提供了用于预测白细胞减少症风险的组合物，所述组合物含有NUDT15基因中的单核苷酸多态性标记。本专利技术的构思提供了用于预测白细胞减少症风险的方法，所述方法包括确定NUDT15基因中的单核苷酸多态性标记的基因型的步骤。本专利技术的构思提供了用于预测白细胞减少症风险的试剂盒，其中，所述试剂盒包含探针或者引物，所述探针特异性结合于含有NUDT15基因中的单核苷酸多态性标记的多核苷酸，所述引物用于扩增所述多核苷酸。技术方案根据本专利技术构思的一个方面，提供用于预测白细胞减少症风险的组合物，其中，所述组合物含有由10-100个连续的DNA序列组成的多核苷酸或其互补多核苷酸，其中，所述多核苷酸包含SEQIDNO:1第101位的核苷酸和SEQIDNO:1第102位的核苷酸中的至少一个单核苷酸多态性(SNP)标记。根据本专利技术构思的另一方面，提供用于预测白细胞减少症风险的方法，其中，所述方法包括确定SEQIDNO:1第101位的核苷酸或SEQIDNO:1第102位的核苷酸的基因型的步骤。根据本专利技术构思的另一方面，提供用于预测白细胞减少症风险的试剂盒，其中，所述试剂盒包含探针或者引物，所述探针特异性结合于所述多核苷酸，所述引物用于扩增所述多核苷酸。有益效果如本文所述，本专利技术构思的方面涉及用于预测克罗恩病、溃疡性结肠炎、白血病或器官移植患者中的硫代嘌呤诱导的白细胞减少症风险的组合物，所述组合物含有NUDT15基因中的单核苷酸多态性标记；用于预测该风险的试剂盒；以及用于预测该风险的方法。根据本专利技术，能够在克罗恩病、溃疡性结肠炎、白血病或器官移植患者中对对于在硫代嘌呤治疗期间发生的白细胞减少症高度敏感的患者进行早期快速分类，因此能有效地实施患者个性化的治疗。附图说明图1展示了对作为受试者的在韩国首尔Asan医疗中心使用硫代嘌呤的1191名克罗恩病(CD)患者进行分析的示意图；以及图2显示了在转染野生型或突变型NUDT15后经7.5μM6-MP处理的Jurkat细胞的敏感性的结果。图2A.通过RT-PCR分析所测定的在转染野生型或突变型NUDT15的Jurkat细胞中NUDT15的mRNA水平。图2B.与转染野生型NUDT15的对照细胞相比，转染突变型NUDT15的活细胞的数目减少。图2C.使用膜联蛋白V(annexinV)和碘化丙啶染色测量的细胞毒性测定法的结果，显示与转染野生型NUDT15的细胞相比，转染突变型NUDT15的细胞对6-MP更敏感。数据以3次独立试验的平均值±标准差展示。具体实施方式为了确定与在克罗恩病、溃疡性结肠炎、白血病或器官移植患者的硫代嘌呤治疗过程中发生的白细胞减少症有关的敏感基因，本专利技术人使用免疫芯片实施了大规模关联分析，从而完成了本专利技术。本专利技术提供用于预测白细胞减少症风险的组合物，所述组合物含有由10-100个连续的DNA序列组成的多核苷酸或其互补多核苷酸，其中，所述多核苷酸包含SEQIDNO:1第101位的核苷酸和SEQIDNO:1第102位的核苷酸中的至少一个单核苷酸多态性(SNP)标记。在一些实施方式中，SEQIDNO:1第101位的核苷酸的等位基因型(allelotype)可以是C/T，并且SEQIDNO:1第102位的核苷酸的等位基因型可以是A/G。在一些实施方式中，所述白细胞减少症可以由硫代嘌呤诱导。在一些实施方式中，所述组合物优选用于在利用硫代嘌呤治疗的克罗恩病、溃疡性结肠炎、白血病或器官移植患者中预测白细胞减少症风险，但实施方式不限于此。在一些实施方式中，所述硫代嘌呤优选为硫唑嘌呤(AZA)或6-巯基嘌呤(6-MP)，但实施方式不限于此。包含SEQIDNO:1第101位的核苷酸的多核苷酸的多态性SNP突变可以由rs116855232表示。rs116855232存在于染色体13q14的NUDT15中，其等位基因型为C/T。根据多碱基记录法(multiplebasetranscriptmethod)记录SEQIDNO:1第101位的核苷酸，由于它可以是C或T，记为“y”。包含SEQIDNO:1第102位的核苷酸的多核苷酸的多态性SNP突变可以由rs147390019表示。rs147390019存在于染色体13q14的NUDT15中，其等位基因型为A/G。根据多碱基记录法记录SEQIDNO:1第102位的核苷酸，由于它可以是A或G，记为“r”。NUDT15蛋白(NCBI登录号NP_060753.1)由164个氨基酸组成，氨基酸序列记录于SEQIDNO:2中。当SEQIDNO:1第101位的核苷酸是C时，NUDT15蛋白(SEQIDNO:2)第139位的氨基酸是精氨酸(R)；当SEQIDNO:1第101位的核苷酸是T时，NUDT15蛋白(SEQIDNO:2)第139位的氨基酸是半胱氨酸(C)。当SEQIDNO:1第102位的核苷酸是G时，NUDT15蛋白(S本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于预测白细胞减少症风险的组合物，其中，所述组合物含有由10‑100个连续的DNA序列组成的多核苷酸或其互补多核苷酸，其中，所述多核苷酸包含SEQ ID NO:1第101位的核苷酸和SEQ ID NO:1第102位的核苷酸中的至少一个单核苷酸多态性(SNP)标记。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.22 KR 10-2014-00078211.用于预测白细胞减少症风险的组合物，其中，所述组合物含有由10-100个连续的DNA序列组成的多核苷酸或其互补多核苷酸，其中，所述多核苷酸包含SEQIDNO:1第101位的核苷酸和SEQIDNO:1第102位的核苷酸中的至少一个单核苷酸多态性(SNP)标记。2.权利要求1所述的组合物，其中，SEQIDNO:1第101位的核苷酸的等位基因型是C/T，并且SEQIDNO:1第102位的核苷酸的等位基因型是A/G。3.权利要求1所述的组合物，其中，所述白细胞减少症由硫代嘌呤诱导。4.权利要求3所述的组合物，其中，所述组合物用于在利用硫代嘌呤治疗的克罗恩病、溃疡性结肠炎、白血病或移植患者中预测白细胞减少症风险。5.权利要求3或4所述的组合物，其中，所述硫代嘌呤是硫唑嘌呤(AZA)或6-巯基嘌呤(6-MP)。6.用于预测白细胞减少症风险的方法，所述方法包括：从样品提取DNA；从所提取的DNA确定SEQIDNO:1第101位的核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋圭暎，梁硕均，
申请(专利权)人：蔚山大学校产学协力团，财团法人峨山社会福祉财团，
类型：发明
国别省市：韩国;KR