本发明专利技术公开了一种检测三叶青叶中多种化学成分的RRLC‑Q‑TOF‑MS方法，包括以下步骤：a、对照品溶液的制备：b、对照品溶液的检测：c、供试品溶液的制备：d、供试品溶液的检测。本发明专利技术的方法，可以通过RRLC‑Q‑TOF‑MS法快速定性鉴定或定量检测三叶青叶中主要黄酮成分，为三叶青叶的开发利用和质量评价提供了可靠的实验依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药材质量检测方法，具体涉及检测三叶青叶中多种化学成分的RRLC-Q-TOF-MS方法。
技术介绍
三叶青是我国特有的珍稀药用植物，为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg)，以块根或者全草入药，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功效，其主要活性成分为有机酸类、黄酮类及挥发油类成分等。已有报道针对三叶青的块根进行了质量评价，但对于三叶青另外重要的药用部位——叶的质量评价研究较少，三叶青叶也广泛用于多种国药准字中成药和保健食品，如结石康胶囊、排石利胆胶囊、三叶青茶等。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种检测三叶青叶中多种化学成分的RRLC-Q-TOF-MS方法，包括以下步骤a、对照品溶液的制备：分别取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆苷、牡荆苷、荭草素鼠李糖苷对照品，加入甲醇，制备得到对照品溶液；b、对照品溶液的检测：将对照品溶液注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行检测；色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A：乙腈-0.1％甲酸，流动相B为水；梯度洗脱条件为：0～0.5min，5％A→5％A；0.5～1.5min，5％A→9％A；1.5～16min，9％A；16～17.5min，9％A→10％A；17.5～19min，10％A→30％A；19～22min，30％→70％A；质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源；检测方式：正离子模式；c、供试品溶液的制备：取待测三叶青叶样品，加甲醇超声或回流提取，过滤得供试品溶液；d、供试品溶液的检测：取供试品溶液，注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪，以步骤b相同的条件进行检测，即可同时定性或定量检测出三叶青叶中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆苷、牡荆苷和荭草素鼠李糖苷。进一步地，所述色谱柱的规格为2.1mm×100mm，1.6μm。进一步地，所述色谱柱为WatersCORTECSC18色谱柱。进一步地，所述色谱条件中，流动相的流速为0.25～0.4mL/min。进一步地，所述色谱条件中，柱温为30～45℃。进一步地，所述色谱条件中，进样量为1～5μL。进一步地，所述质谱条件中：毛细管电压：3500V；喷雾器压力：0.2Mpa；干燥气体氮气流速：4.0L·min-1，干燥气体氮气温度：180℃，离子漏斗funnel1：200.0Vpp,funnel2：200.0Vpp，六级杆射频：100.0Vpp，四级杆离子能量:3.0eV，碰撞射频：150.0Vpp，离子传输时间：80μs，前脉冲存储时间：5μs，碰撞气体：氩气，碰撞能量：20～30eV。进一步地，所述所述步骤c的提取是超声提取，超声提取的温度为50～80℃；超声的时间15～45分钟，优选30分钟。进一步地，所述步骤c中，所述甲醇为80％甲醇，其与待测三叶青叶样品的体积重量比为250mL：1g。进一步地，所述三叶青叶为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg的干燥叶。本专利技术的方法，可以通过RRLC-Q-TOF-MS法快速定性鉴定或定量检测三叶青叶中主要黄酮成分，为三叶青叶的开发利用和质量评价提供了可靠的实验依据。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为三叶青的RRLC-Q-TOF-MS总离子流图。图2为各化学成分的结构。图3为不同色谱柱筛选的色谱图，WatersACQUITYUPLCBEHC181.7μm2.1x100mm(1)，WatersACQUITYUPLCHSST3C181.8μm2.1x100mm(2)，WatersCORTECSC181.6μm2.1x100mm(3)，PhenomenexKinetexC181.7μm(4)。图4为不同流动相筛选的色谱图，乙腈-0.1％甲酸水(5)，甲醇-0.1％甲酸水(6)，乙腈-0.5％醋酸水(7)，甲醇-0.5％醋酸水(8)。图5为提取方法筛选的结果。图6为提取溶剂筛选的结果。图7为提取时间筛选的结果。图8为料液比筛选的结果。具体实施方式实施例11仪器与试药1290型超高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；MicrOTOF飞行时间质谱仪(德国Bruker公司)；CPA225D型十万分之一分析天平(德国Sartorius公司)；KQ-500E台式超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DFY-500型500克摇摆式高速中药粉碎机(温岭市林大机械有限公司)；甲醇、乙腈为色谱纯(德国MERCK公司)；Milli-Q超纯水(美国Millipore公司)；其余试剂均为分析纯。对照品牡荆苷(批号：111687-200602)购自中国食品药品检定研究院；其他对照品新绿原酸(批号：SH906332)、隐绿原酸(批号：SH905997)、绿原酸(批号：SH327979)购自北京赛百草科技有限公司；牡荆素鼠李糖苷、荭草苷、异荭草苷、异牡荆苷、荭草素鼠李糖苷对照品由参照文献(林婧,纪明妹,黄泽豪,等.三叶青的化学成分及其体外抗肿瘤活性研究[J].中国药学杂志,2015,50(8):658)的方法制备。三叶青叶样品采自福建省10个不同地方，分别为顺昌、闽侯、南安、光泽、霞浦、福安、泰宁、宁化、建阳和仙游，经福建中医药大学药用植物实验室范世明高级实验师及生药教研室黄泽豪副教授鉴定为葡萄科植物三叶青TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg的干燥叶。样本存放于福建中医药大学药学院药用植物标本室。2方法与结果2.1色谱条件WatersCORTECSC18色谱柱(2.1mm×100mm,1.6μm)，流动相乙腈(A)-(0.1％甲酸)水(B)，梯度洗脱(0～0.5min，5％A→5％A；0.5～1.5min，5％A→9％A，1.5～16min，9％A；16～17.5min，9％A→10％A；17.5～19min，10％A→30％A；19～22min，30％→70％A)，流速0.25mL·min-1，柱温45℃，进样量2μL。2.2质谱条件飞行时间质谱采用电喷雾正、负离子模式：毛细管电压:4.5kV(-)和3.5kV(+)，毛细管电压:4.5kV，喷雾器压力：0.2Mpa，干燥气体(N2)流速：4.0L·min-1，干燥气体温度：180℃，离子漏斗funnel1：200.0Vpp,funnel2：200.0Vpp，六级杆射频(hexapoleRf)：100.0Vpp，四级杆离子能量:3.0eV，碰撞射频(collisionRf)：150.0Vpp，离子传输时间：80μs，前脉冲存储时间：5μs，碰撞气体：氩气，碰撞能量：20～30eV。质谱测定数据采用全扫描模式采集，数据采集范围m/z50～1000。2.3对照品溶液的制备取新绿原酸、绿原酸、隐绿原本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测三叶青叶中多种化学成分的RRLC‑Q‑TOF‑MS方法，其特征在于：包括以下步骤：a、对照品溶液的制备：分别取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆苷、牡荆苷、荭草素鼠李糖苷对照品，加入甲醇，制备得到对照品溶液；b、对照品溶液的检测：将对照品溶液注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行检测；色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A：乙腈‑0.1％甲酸，流动相B为水；梯度洗脱条件为：0～0.5min，5％A→5％A；0.5～1.5min，5％A→9％A；1.5～16min，9％A；16～17.5min，9％A→10％A；17.5～19min，10％A→30％A；19～22min，30％→70％A；质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源；检测方式：正离子模式；c、供试品溶液的制备：取待测三叶青叶样品，加甲醇超声或回流提取，过滤得供试品溶液；d、供试品溶液的检测：取供试品溶液，注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪，以步骤b相同的条件进行检测，即可同时定性或定量检测出三叶青叶中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆苷、牡荆苷和荭草素鼠李糖苷。...
【技术特征摘要】
1.一种检测三叶青叶中多种化学成分的RRLC-Q-TOF-MS方法，其特征在于：包括以下步骤：a、对照品溶液的制备：分别取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆苷、牡荆苷、荭草素鼠李糖苷对照品，加入甲醇，制备得到对照品溶液；b、对照品溶液的检测：将对照品溶液注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行检测；色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A：乙腈-0.1％甲酸，流动相B为水；梯度洗脱条件为：0～0.5min，5％A→5％A；0.5～1.5min，5％A→9％A；1.5～16min，9％A；16～17.5min，9％A→10％A；17.5～19min，10％A→30％A；19～22min，30％→70％A；质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源；检测方式：正离子模式；c、供试品溶液的制备：取待测三叶青叶样品，加甲醇超声或回流提取，过滤得供试品溶液；d、供试品溶液的检测：取供试品溶液，注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪，以步骤b相同的条件进行检测，即可同时定性或定量检测出三叶青叶中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆苷、牡荆苷和荭草素鼠李糖苷。2.根据权利要求1所述的RRLC-Q-TOF-MS方法，其特征在于：所述色谱柱的规格为2.1mm×100mm，1.6μm。3.根据权利要求2所述的RRLC-Q-TOF-MS方法，其特征在于：所述色谱柱为WatersCORTECSC18色谱柱。4.根据权利要求1-3任一项所述的RRLC-Q-...
【专利技术属性】
技术研发人员：范世明，许文，
申请(专利权)人：福建中医药大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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