一种甘蔗叶片中柠檬酸含量的HPLC检测方法的应用技术

本发明专利技术公开了一种甘蔗叶片中柠檬酸含量的HPLC检测方法，包括以下步骤：S1.将待测的甘蔗叶片加入液氮磨碎，再加入70~90%的甲醇水溶液研磨成浆，2~5℃浸提，超声提取，离心，取上清液，残渣再加入70~90%甲醇水溶液超声提取，离心后取出上清液，重复残渣浸提和离心操作1~3次，合并上清液，用70~90%甲醇定容，过滤；S2.采用HPLC检测样品溶液中柠檬酸的含量。本方法能准确检测出甘蔗叶片中柠檬酸含量，为判断甘蔗品种对梢腐病感抗差异研究和柠檬酸介导甘蔗梢腐病病原菌胁迫应答生化机制提供科学有力的检测技术。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及甘蔗内源激素检测
，特别是一种甘蔗叶片中柠檬酸含量的HPLC检测方法。
技术介绍
甘蔗（Saccharumofficinarum)是我国最重要糖料作物，蔗糖占我国食糖总产92%。甘蔗中含有的植物激素几乎参与了其生长发育所有过程的生理调节，从细胞的生长分裂和分化，到种子的休眠、果实发育、性别分化和衰老过程等。对于甘蔗而言，它有2个非常重要的指标直接影响着甘蔗的经济价值，分别糖分和产量，但如果甘蔗受到病虫害影响而不能及时发现，则会大大影响甘蔗的糖分和产量。如果能够通过研究甘蔗生长过程中内源激素的变化趋势，判断甘蔗品种感染病原后的感抗差异，并建立对应病原菌胁迫应答的生化机制，那么将对甘蔗经济价值的增长具有重大的现实意义。甘蔗梢腐病最早是在印尼首先发现的，并随甘蔗品种POJ2878及其衍生品种的推广蔓延至全世界，其发病最高级和严重阶段，会导致蔗株心叶整个基部腐烂和快速失水，最终在甘蔗梢部幼嫩组织上形成顶腐状，从而造成产量和糖分损失。尤其近年，云南、广西蔗区种植的桂糖11号、GT21号和主推的桂糖37号多为感病品种，ROC22以及ROC16等主栽品种感染梢腐病程度也日益严本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘蔗叶片中柠檬酸含量的HPLC 检测方法，其特征在于包括以下步骤：S1.将待测的甘蔗叶片加入预冷至2~5℃的体积分数为70~90%甲醇水溶液，再加入液氮研磨成浆，定容，2~5℃浸提50~90min，超声提取1.5~3h，离心，取上清液，残渣再加入预冷至2~5℃体积分数为70~90%甲醇水溶液超声提取20~40min，离心后取出上清液，重复残渣浸提和离心操作0~3次，合并上清液，用70~90%甲醇定容，过滤，作为样品溶液备用；S2.采用HPLC检测样品溶液中柠檬酸的含量。

【技术特征摘要】
1.一种甘蔗叶片中柠檬酸含量的HPLC检测方法，其特征在于包括以下步骤：S1.将待测的甘蔗叶片加入预冷至2~5℃的体积分数为70~90%甲醇水溶液，再加入液氮研磨成浆，定容，2~5℃浸提50~90min，超声提取1.5~3h，离心，取上清液，残渣再加入预冷至2~5℃体积分数为70~90%甲醇水溶液超声提取20~40min，离心后取出上清液，重复残渣浸提和离心操作0~3次，合并上清液，用70~90%甲醇定容，过滤，作为样品溶液备用；S2.采用HPLC检测样品溶液中柠檬酸的含量。2.根据权利要求1所述的甘蔗叶片中柠檬酸含量的HPLC检测方法，其特征在于：所述步骤S2中，HPLC色谱条件为：采用C18反相色谱柱；流动相由12.5mmol/L的磷酸二氢钠水溶液与甲醇按体积比50:1混合，再加入0.5mol/L的磷酸水溶液调节pH至2.8；柱温为32~38℃，流速0.8~1.2mL/min，紫外检测波长214nm。3.根据权利要求2所述的甘蔗叶片中柠檬酸含量的HPL...

【专利技术属性】
技术研发人员：王泽平，李长宁，刘璐，张保青，杨翠芳，高轶静，蒋洪涛，罗霆，梁强，林善海，段维兴，张革民，周珊，韦金菊，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所中国农业科学院甘蔗研究中心，
类型：发明
国别省市：广西;45