本发明专利技术公开了一种紫金龙中生物碱和抗炎有效组分的制备筛选方法及其应用，它通过对紫金龙药材进行乙醇回流提取、合并提取液，减压回收乙醇、浓缩药液，然后将浓缩液进行柱层析，然后依次用氯仿、氯仿-甲醇1:1以及甲醇-水1:1进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，分别获得氯仿组分(CHCl3 Fr.)、氯仿-甲醇组分(CHCl3-MeOH Fr.)和甲醇-水组分(MeOH-H2O Fr.)，合并氯仿组分和氯仿-甲醇组分得紫金龙生物碱组分并筛选出其中抗炎最佳有效组分(CHCl3-MeOH Fr.)。制备和筛选出的生物碱及抗炎有效组分在安全浓度范围内能够应用于治疗炎症疾病方面，为该药材的深入开发提供了依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及紫金龙抗炎有效组分的制备及其应用
，具体涉及一种紫金龙中的生物碱及抗炎有效组分的制备筛选方法及其在预防和治疗炎症疾病药物方面的用途。
技术介绍
紫金龙，为毛茛科植物深裂黄草乌AconitumvilmorinianumKomvar.altifidumW.T.Wang的干燥块根。是贵州省苗族习用药材，收载于《贵州省中药材、民族药质量标准》2003年版。具有驱风除湿，温经止痛的功效。用于跌扑损伤、腰膝疼痛、疮毒等的治疗。但是，有关紫金龙在中医临床、药理作用、化学成分、药效物质基础、作用机理等各方面研究的报道均较少。到目前为止，对紫金龙化学成分的研究报道甚少。仅有张嘉岷等利用硅胶柱色谱对紫金龙提取物进行分离纯化，分离得到3个化合物，分别为二帖类生物碱，其中1个位C-19骨架类型，另2个位C-20骨架类型。然而，已有的文献只是针对紫金龙提取物进行分离纯化得到3个二帖类生物碱，缺乏对紫金龙有效组分的制备及其应用的研究，因此，本专利技术利用合理的提取、分离和检测手段，最终提供一种有效提取、分离富集紫金龙生物碱以及紫金龙有效组分的制备方法，并将该类组分应用于预防和治疗炎症疾病药物方面的用途。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供紫金龙生物碱的制备方法以及紫金龙有效组分在制备预防和治疗炎症疾病相关药物中的用途。本专利技术的技术方案，包括如下几个方面：首先，本专利技术提出了紫金龙药材中生物碱的制备方法，其方法分为两种：第一种生物碱制备方法的步骤是：取紫金龙药材分别加入不同倍量的60%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收乙醇、浓缩药液；将浓缩液加样于装有D101大孔吸附树脂的柱体中进行柱层析，依次用水、60%乙醇以及95%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，并将60%乙醇组分及95%乙醇组分合并，分别得到水组分H2OFr.和合并的乙醇组分EtOHFr.；进一步将合并的乙醇组分浓缩后进行生物碱成分的富集。其中，前述的加入不同倍量的60%乙醇回流提取3次是取紫金龙药材分别加入10倍、8倍、6倍量60%乙醇回流提取3次，每次2小时。前述的进行生物碱成分的富集是将合并的乙醇组分浓缩液经中性氧化铝柱层析，然后依次用氯仿、氯仿-甲醇进行洗脱，收集、合并洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，获得紫金龙生物碱组分。第二种生物碱制备方法的步骤是：紫金龙药材中生物碱的制备方法，其特征在于：取紫金龙药材分别加入不同倍量的60%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收乙醇回收乙醇得浓稠浸膏；浸膏用适量水溶散，1%稀硫酸调pH为3，用石油醚萃取3次，将萃取后水部分用1%NaOH调pH为9，用氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，获得紫金龙生物碱组分。该方法获得的生物碱与第一种方法获得的生物碱相同。通过HPLC获得化学组分液相色谱信息，以及薄层色谱点板展开，碘化铋钾专属显色反应显示，获得富含不同极性的生物碱。紫金龙药材中的生物碱成分有效地富集在了氯仿及氯仿-甲醇两个组分,其中氯仿组分主要富含小极性生物碱，氯仿-甲醇组分则主要富集到的是中高极性的生物碱，因此，本专利技术的方法获得的生物碱组分是氯仿组分CHCl3Fr.、氯仿-甲醇组分CHCl3-MeOHFr.。本专利技术进一步提出了以上两种方法获得的紫金龙生物碱组分在制备治疗炎症疾病的药物中的应用。该应用是将获得的紫金龙生物碱组分为活性成分制成的药用制剂，因此，本专利技术还提出了紫金龙生物碱组分加入药用添加剂按照药剂学允许的制备方法制成的药用制剂。以上生物碱组分，使紫金龙能够在制备抗炎药物中应用，但是，本专利技术进行了进一步的研究，提出了除上述生物碱组分以外，还有其它组分可以在制备抗炎药物中应用。为了获得紫金龙药材中抗炎有效组分及筛选出最佳组分，本专利技术提出了紫金龙药材中抗炎有效组分的筛选方法，其步骤是：取紫金龙药材以60%乙醇提取后经D101大孔树脂柱层析，依次用水、60%乙醇以及95%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，并将60%乙醇组分及95%乙醇组分合并，分别得到水组分H2OFr.和合并的乙醇组分EtOHFr.；然后将合并的乙醇组分浓缩后进行生物碱成分的富集，将其合并的浓缩液经中性氧化铝柱层析，然后依次用氯仿、氯仿-甲醇以及甲醇-水作为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，分别获得氯仿组分CHCl3Fr.、氯仿-甲醇组分CHCl3-MeOHFr.和甲醇-水组分MeOH-H2OFr.。本专利技术提出了按照该筛选方法筛选出的紫金龙药材中抗炎有效组分为乙醇组分EtOHFr.、氯仿组分CHCl3Fr.、氯仿-甲醇组分CHCl3-MeOHFr.或甲醇-水组分MeOH-H2OFr.。其中，最佳组分为氯仿-甲醇组分CHCl3-MeOHFr.。基于上述方法筛选出的有效组分，本专利技术还提出了紫金龙药材中抗炎有效组分CHCl3-MeOHFr.在制备治疗炎症疾病的药物中的应用。它是利用紫金龙抗炎有效组分CHCl3-MeOHFr.为活性成分制成的药用制剂，因此，本专利技术还提出了紫金龙抗炎有效组分CHCl3-MeOHFr.加入药用添加剂按照药剂学允许的制备方法制成的药用制剂。通过以上几个方面的创新，本专利技术通过对紫金龙药材中的生物碱的制备和富集，进一步筛选出紫金龙在治疗炎症疾病中的有效组分，并明确了紫金龙治疗炎症疾病的最佳有效组分为CHCl3-MeOHFr.，同时提出了上述生物碱和抗炎有效组分在制备治疗炎症疾病中的应用。本专利技术生物碱的制备和筛选方法，仅采用了简单的大孔树脂柱层析和中性氧化柱层析的方法，可大大提高广泛运用的可操作性，制备出的有效组分在安全浓度范围内治疗炎症疾病方面的效果好、用量低，为该药材的深入开发提供了一定的科学依据。附图说明：已经修改图1紫金龙生物碱组分作用RAW264.7细胞24h后对生长的影响；图2紫金龙生物碱组分对RAW264.7细胞NO释放量的影响；图3紫金龙生物碱组分对RAW264.7细胞TNF-α释放量的影响；图4是紫金龙药材组分制备流程图；图5是紫金龙CHCl3Fr.组分作用RAW264.7细胞24h后对生长的影响；图6是紫金龙CHCl3Fr.组分对RAW264.7细胞NO释放量的影响；图7是紫金龙CHCl3Fr.组分对RAW264.7细胞TNF-α释放量的影响；图8是有效组分CHCl3-MeOHFr.对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO的影响；图9是有效组分CHCl3-MeOHFr.对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌PGE2的影响；图10是有效组分CHCl3-MeOHFr.对RAW264.7细胞TNF-α释放量的影响(n本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种紫金龙药材中生物碱的制备方法，其特征在于：取紫金龙药材分别加入不同倍量的60%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收乙醇、浓缩药液；将浓缩液加样于装有D101大孔吸附树脂的柱体中进行柱层析，依次用水、60%乙醇以及95%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，并将60%乙醇组分及95%乙醇组分合并，分别得到水组分H2O Fr.和合并的乙醇组分EtOH Fr.；进一步将合并的乙醇组分浓缩后进行生物碱成分的富集。
【技术特征摘要】
1.一种紫金龙药材中生物碱的制备方法，其特征在于：取紫金龙药材分别加入不同倍
量的60%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收乙醇、浓缩药液；将浓缩液加样于装有
D101大孔吸附树脂的柱体中进行柱层析，依次用水、60%乙醇以及95%乙醇进行洗脱，收集洗
脱液，并将60%乙醇组分及95%乙醇组分合并，分别得到水组分H2OFr.和合并的乙醇组分
EtOHFr.；进一步将合并的乙醇组分浓缩后进行生物碱成分的富集。
2.根据权利要求1所述的紫金龙药材中生物碱的制备方法，其特征在于：所述进行生物
碱成分的富集是将合并的乙醇组分浓缩液经中性氧化铝柱层析，然后依次用氯仿、氯仿-甲
醇进行洗脱，收集、合并洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，获得紫金龙生物碱组分。
3.一种紫金龙药材中生物碱的制备方法，其特征在于：取紫金龙药材分别加入不同倍
量的60%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收乙醇回收乙醇得浓稠浸膏；浸
膏用适量水溶散，1%稀硫酸调pH为3，用石油醚萃取3次，将萃取后水部分用1%NaOH调pH为
9，用氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，获得紫金龙生物碱组分。
4.一种权利要求2或3中获得的紫金龙生物碱组分在制备治疗炎症疾病的药物中的应
用。
5.一种权利要求2或3中获得的紫金龙生物碱组分为活性成分制成的药用制剂，其特征
在于：紫金龙生物碱...
【专利技术属性】
技术研发人员：董莉，李勇军，董永喜，兰燕宇，廖尚高，王永林，王爱民，刘亭，张晓红，杨雅欣，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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