来源于纯滋养层的干细胞及包含其的细胞治疗剂制造技术

本发明专利技术涉及来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层(除了绒毛膜绒毛以外的滋养层，chorionic trophoblast layer without villi，CT‑V)的干细胞及包含其的细胞治疗剂。与现有的来源于整个胎盘的干细胞相比，本发明专利技术的来源于纯滋养层的干细胞具有匀质的生长特性、优秀的增殖特性及分化特性，尤其，分化成软骨细胞的特性优秀，从而可有效用作用于治疗软骨损伤或软骨缺损等的细胞治疗剂及组织再生用组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层(除了绒毛膜绒毛以外的滋养层，chorionictrophoblastlayerwithoutvilli，CT-V)的干细胞及包含其的细胞治疗剂。
技术介绍
最近生命工程将人类福利作为最终目标来提供可解决粮食、环境、健康问题的新解决办法，其中利用干细胞的技术正成为治疗顽固性疾病的新篇章。以前为了治疗人类的顽固性疾病而提出了脏器移植、基因治疗等，但由于免疫排斥反应和脏器供应不足、载体研发或者缺少针对疾病基因的知识而无法有效地应用。由此，提高了对干细胞的关注，从而认识到具有通过增殖和分化可形成所有器官的能力的全能干细胞既能治疗大部分的疾病又能从根本上解决脏器损害。并且，许多科学家们提出了通过使用干细胞既能实现人体的几乎所有脏器再生又能治疗帕金森病、各种癌、糖尿病和脊椎损伤等的多种可能性。干细胞(stemcell)是指作为未分化的细胞具有自我复制能力及分化成两个以上的互不相同种类的细胞的能力的细胞。干细胞根据分化能力可分为全能干细胞(totipotentstemcell)、多潜能干细胞(pluripotentstemcells)、多能(多功能)干细胞(multipotentstemcells)，根据细胞学起源可分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞来源于着床前受精卵或者生成中的胎儿生殖器组织等，相反，成体干细胞来源于成体中的各器官，例如，骨髓、脑、肝、胰脏等。由于胚胎干细胞存在道德上的限制，因此在使用为细胞治疗剂的方面存在限制。与此相反，由于成体干细胞可主要从脂肪、脐带血、骨髓及胎盘等提取，从而不存在道德上的问题，尤其，存在于脂肪组织的脂肪干细胞和存在于分娩时胎盘的胎盘干细胞安全且分化能力优秀，因此可适用于改善现代医学难以治疗的作为不治之症的糖尿病、痴呆、退行性关节炎、心肌梗塞、脑梗塞、肾功能障碍等的多种细胞损伤疾病的症状。其中，在上述干细胞为来源于胎盘的干细胞的情况下，利用分娩后废弃的胎盘，从而具有容易提取且可便于确保大量的干细胞的优点。在上述干细胞为来源于脂肪或骨髓的干细胞的情况下，受到所要分离、提取的捐献者的年纪或健康状态等影响而在增殖力或分化能力等上有限制，而且变动性多，但在来源于胎盘的干细胞的情况下，作为成体干细胞中可最早获取的干细胞，几乎不受到根据捐献者的年纪等的变数的干细胞干性影响，而且具有优秀的增殖力及分化能力。并且，来源于胎盘的干细胞可分离能够适用于神经系统疾病、肝病、肌肉骨骼疾病等多种疾病的干细胞组。由于上述的优点，正积极进行与来源于胎盘的干细胞相关的研究。例如，在韩国专利授权第818214号中公开了利用含N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC，N-acrtyl-L-cysteine)培养基从羊膜或蜕膜分离干细胞的方法，在韩国专利授权第871984号中公开了利用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF，BasicFibroblastGrowthFactor)培养基培养来源于羊膜、浆膜、底蜕膜及胎盘组织的干细胞的方法，在韩国公开专利第10-2007-0052204号中公开了从胎盘滋养膜的胎盘绒毛(chorionicvilli)分离干细胞的方法。但是，目前为止未执行针对来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层的干细胞的研究。
技术实现思路
专利技术要解决的课题对此，本专利技术人为了在来源于胎盘的干细胞中也找到干细胞干性更优秀的干细胞而持续研究的结果，发现与现有的来源于整个胎盘的干细胞相比，来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层(除了绒毛膜绒毛以外的滋养层)的干细胞具有匀质的生长特性、优秀的增殖特性及分化特性，尤其，分化成软骨细胞的特性优秀，从而可有效用作细胞治疗剂，由此完成了本专利技术。并且，本专利技术的目的在于，提供来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层的干细胞。本专利技术的另一目的在于，提供将来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层的干细胞或从上述干细胞分化的细胞作为有效成分包含的细胞治疗剂及组织再生用组合物。用于解决课题的方法为了实现上述目的，本专利技术提供来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层的干细胞。并且，本专利技术提供将来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层的干细胞或从上述干细胞分化的细胞作为有效成分包含的细胞治疗剂。并且，本专利技术提供将来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层的干细胞或从上述干细胞分化的细胞作为有效成分包含的组织再生用组合物。专利技术的效果与现有的来源于整个胎盘的干细胞相比，本专利技术的来源于纯滋养层(除了绒毛膜绒毛以外的滋养层)的干细胞具有匀质的生长特性、优秀的增殖特性及分化特性，尤其，分化成软骨细胞的特性优秀，从而可有效用作用于治疗软骨损伤或软骨缺损等的细胞治疗剂及组织再生用组合物。附图说明图1作为示出胎盘的剖面的显微镜照片，示出了自上而下依次层叠有胎盘的羊膜上皮(amnioticepithelium，AE)、羊膜(amnioticmembrane，AM)、绒毛膜(chorionicmembrane，CM)、纯滋养层(chorionictrophoblastlayerwithoutvilli，CT-V)、绒毛膜绒毛(chorionicvilli，CV)及蜕膜(decidua，DC)的形态。图2为示出通过显微镜观察本专利技术的来源于纯滋养层(CT-V)的干细胞的继代培养之前(P0)的细胞形态与长时间继代培养之后(P28)的细胞形态的照片(X100)的图。图3为示出通过显微镜观察来源于整个胎盘的干细胞的继代培养之间(P0)的细胞形态与长时间继代培养之后(P29)的细胞形态的照片(X100)的图。图4为示出来源于整个胎盘的干细胞及来源于纯滋养层的干细胞的集落形成单位的图。图5为示出来源于整个胎盘的干细胞及来源于纯滋养层的干细胞的群体倍增时间的图。图6为示出本专利技术的用于确认来源于纯滋养层的干细胞的表面因子表达特性的流式细胞分析结果的图。图7为示出用于观察来源于整个胎盘的干细胞及来源于纯滋养层的干细胞的分化成脂肪细胞(Adipogenesis)、软骨细胞(Chondrogenesis)或骨细胞(Osteogenesis)的程度的各染色结果的图。图8为示出为了观察来源于整个胎盘的干细胞及来源于纯滋养层的干细胞的分化成软骨细胞的程度而利用番红O(Saparin-O)进行染色后进行定量化的结果的图。图9为示出为了观察来源于整个胎盘的干细胞及来源于纯滋养层的干细胞的分化成软骨细胞的程度而进行利用Ⅱ型胶原蛋白(TypeIIcollagen)的免疫组织化学染色后进行定量化的结果的图。图10为示出对来源于整个胎盘的干细胞及来源于纯滋养层的干细胞的分化成脂肪细胞、软骨细胞或骨细胞的程度进行比较分析的结果的图。具体实施方式以下，对本专利技术进行详细说明。本专利技术提供来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层的干细胞。在本专利技术中，“干细胞”是指具有自我复制能力及分化成两个以上的互不相同种类细胞的能力的细胞。干细胞根据分化能力可分为全能干细胞、多潜能干细胞、多能(多功能)干细胞。在本专利技术中，“全能干细胞”是指如下的细胞，即，作为具有可发育为一个完整的个体的全能的性质的细胞，在完成卵子与精子的受精之后，使细胞直到8细胞期为止具有上述性质，而且若分离上述细胞并移植于子宫，则可使上述细胞增殖为一个完整的个体。在本专利技术中，“多潜能干细胞”是指如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种干细胞，其特征在于，来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.08 KR 10-2014-00023081.一种干细胞，其特征在于，来源于作为胎盘的细微组织的纯滋养层。2.根据权利要求1所述的干细胞，其特征在于，上述干细胞对CD44、CD73、CD90及CD105具有阳性的表面因子表达特性。3.根据权利要求1所述的干细胞，其特征在于，上述干细胞对CD31、CD34、CD45及HLA-DR具有阴性的表面因子表达特性。4.根据权利要求1至3中任一项所述的干细胞，其特征在于，来源于上述纯滋养层的干细胞来源于位于绒毛膜与蜕膜之间的滋养层中除了绒毛膜绒毛之外的组织。5.根据权利要求1至3中任一项所述的干细胞，其特征在于，通过如下的步骤(a)、步骤(b)以及步骤(c)制备上述干细胞：步骤(a)，从胎盘分离作为细微组织的纯滋养层；步骤(b)，利用选自由胰蛋白酶、胶原酶、分散酶、脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、蛋白酶、脂肪酶、透明质酸酶以及弹性蛋白酶组成的组中的一种以上的酶对被分离的上述纯滋养层组织进行处理来获取来源于纯滋养层的细胞；步骤(c)，从所获取的上述来源于纯滋养层的细胞筛选干细胞。6.一种细胞治疗剂，其特征在于，包含来源于作为胎盘的细微组织...

【专利技术属性】
技术研发人员：河喆源，金鉁儿，
申请(专利权)人：社会福祉法人三星生命公益财团，
类型：发明
国别省市：韩国;KR