本发明专利技术涉及一种17种miRNA检测探针和包括上述检测探针的miRNA检测试剂盒，所述检测探针包括有杂交探针：其5'端为tag标签序列，3'端为结合序列，所述tag标签序列和所述结合序列之间还设有待检测靶标miRNA反向互补序列；所述tag标签序列选自SEQ ID NO.20—SEQ ID NO.38；所述待检测靶标miRNA反向互补序列选自SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.17；信号探针：其5'端为信号序列，3'端为polyT或oligoTGG。本发明专利技术所设计的各种检测探针，能够在均一的反应条件下进行杂交反应，且各种探针之间基本不存在非特异性结合，特异性好、信噪比高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学、医学和生物
，尤其涉及17种miRNA检测探针、试剂盒。
技术介绍
MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20～25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体(RNA-inducedsilencingcomplex,RISC)，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。最近的研究表明miRNA参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。目前研究表明，在多种病变组织中的miRNA表达有明显改变，例如，在子宫内膜异位症患者的组织中的miR-199a，miR-542-3p，miR-20a，miR-125b,miR-150,miR-125a,miR-223,miR-194,miR-365表达差异上调，而miR-142-3p,miR-424,miR-34c,miR-196b，miR-17-5p，miR-22，miR-200a,miR-200b表达却差异下调。目前，针对miRNA的检测方法主要有NorthernBlot、原位杂交、基因芯片、荧光定量探针法；但NorthernBlot方法敏感度低、耗时长且RNA的用量较大，不适合高通量分析；原位杂交技术在一次实验过程只能检测有限的miRNA，仍然难以满足高通量要求；基因芯片技术能实现miRNA的高通量分析，即在一块芯片上同时检测多个miRNA，但缺点是结果准确性低，重复性差，实验价格昂贵。荧光定量探针法检测灵敏度高，但检测费用昂贵；而基于微球的流式细胞术技术将探针固定于微球上并置于液相中，更有利于捕获miRNA序列，因此提高了准确性，但是由于miRNA同源性高，长度较短，细胞或组织内含量低，针对它的高灵敏高选择性检测方法仍然有待进一步完善。目前，也有报道采用的三明治结构嵌合杂交探针(tag—靶标miRNA反向互补序列—polyA或oligoCCA)用于miRNA的检测，与现有技术相比，该设计更为简单，更具有实用性。但对于针对能够实现多个miRNA既能单独检测也能并行检测时，其高特异性和高灵敏度是最大的瓶颈，主要是因为所设计的杂交探针、tag序列以及anti-tag序列之间往往存在交叉反应，这限制了多个miRNA的并行检测的实现。
技术实现思路
本专利技术的目的之一提供了一种miRNA检测的探针，该探针可以用于单独或者并行定量检测的miRNA包括有miR-199a，miR-542-3p，miR-20a，miR-125b，miR-150，miR-125a，miR-223，miR-194，miR-365，miR-142-3p，miR-424，miR-34c，miR-196b，miR-17-5p，miR-22，miR-200a，miR-200b。实现上述目的的技术方案如下。一种miRNA检测探针，包括有(1)杂交探针：其5'端为tag标签序列，3'端为结合序列，所述tag标签序列和所述结合序列之间还设有待检测靶标miRNA反向互补序列；所述结合序列为polyA序列或为oligoCCA序列，其长度为8-20个碱基；所述tag标签序列选自SEQIDNO.20-SEQIDNO.38；所述待检测靶标miRNA反向互补序列选自针对miR-199a的SEQIDNO.1，针对miR-542-3p的SEQIDNO.2，针对miR-20a的SEQIDNO.3，针对miR-125b的SEQIDNO.4，针对miR-150的SEQIDNO.5，针对miR-125a的SEQIDNO.6，针对miR-223的SEQIDNO.7，针对miR-194的SEQIDNO.8，针对miR-365的SEQIDNO.9，针对miR-142-3p的SEQIDNO.10，针对miR-424的SEQIDNO.11，针对miR-34c的SEQIDNO.12，针对miR-196b的SEQIDNO.13，针对miR-17-5p的SEQIDNO.14，针对miR-22的SEQIDNO.15，针对miR-200a的SEQIDNO.16，针对miR-200b的SEQIDNO.17，和用于对照的内标1序列和内标2序列；(2)信号探针：其5'端为信号序列，3'端为polyT或oligoTGG；所述polyT或oligoTGG是杂交探针中结合序列的反向互补序列；所述信号序列为OligoGT、OligoTG或OligoGTT序列，其长度为60-90个碱基。在其中一个实施例中，所述结合序列的长度为15-17个碱基。在其中一个实施例中，所述信号序列的长度为80-90个碱基。在其中一个实施例中，所述内标1序列为SEQIDNO.18，所述内标2序列为SEQIDNO.19。在其中一个实施例中，所述tag标签序列为选自于以下：针对miR-199a的SEQIDNO.20，针对miR-542-3p的SEQIDNO.21，针对miR-20a的SEQIDNO.22，针对miR-125b的SEQIDNO.23，针对miR-150的SEQIDNO.24，针对miR-125a的SEQIDNO.25，针对miR-223的SEQIDNO.26，针对miR-194的SEQIDNO.27，针对miR-365的SEQIDNO.28，针对miR-142-3p的SEQIDNO.29，针对miR-424的SEQIDNO.30，针对miR-34c的SEQIDNO.31，针对miR-196b的SEQIDNO.32，针对miR-17-5p的SEQIDNO.33，针对miR-22的SEQIDNO.34，针对miR-200a的SEQIDNO.35，针对miR-200b的SEQIDNO.36，和针对内标1序列的SEQIDNO.37和针对内标2序列的SEQIDNO.38。本专利技术的另一目的是提供了一种miRNA检测试剂盒。实现上述目的的技术方案如下。本专利技术所述miRNA检测试剂盒，包括以下组份：A、上述检测探针；B、包被有anti-tag序列的微珠，所述anti-tag序列与杂交探针5’端的tag序列互补配对。在其中一个实施例中，还包括有生物素标记的dCTP、dATP、dTTP或dGTP。在其中一个实施例中，所述anti-tag序列与微珠之间连接有间隔臂序列。在其中一个实施例中，所述间隔臂为序列为5～10个T。本专利技术的主要优点在于：(1)本专利技术所设计的各种检测探针，能够在均一的反应条件下进行杂交反应，且各种探针之间基本不存在非特异性结合；所设计的探针在检测中特异性好、信噪比高。同时，多种探针的组合使用使本专利技术试剂盒和检测方法形成一个检测效果完好的系统。(2)本专利技术试剂盒具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的杂交探针、tag序列以及anti-tag序列之间基本上不存在交叉反应，tag标签序列、anti-tag标签序列的选取以及tag标签序列与具体杂交探针、结合序列、信号探针的结合，能够避免交叉反应，实现多个miRNA的并行检测。(3)本专利技术的检测方法步骤简单，19种miRNA(17种目标mi本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种miRNA检测探针，其特征在于，包括有：(1)杂交探针：其5'端为tag标签序列，3'端为结合序列，所述tag标签序列和所述结合序列之间还设有待检测靶标miRNA反向互补序列；所述结合序列为polyA序列或为oligoCCA序列，其长度为8‑20个碱基；所述tag标签序列选自SEQ ID NO.20‑SEQ ID NO.38；所述待检测靶标miRNA反向互补序列选自针对miR‑199a的SEQ ID NO.1，针对miR‑542‑3p的SEQ ID NO.2，针对miR‑20a的SEQ ID NO.3，针对miR‑125b的SEQ ID NO.4，针对miR‑150的SEQ ID NO.5，针对miR‑125a的SEQ ID NO.6，针对miR‑223的SEQ ID NO.7，针对miR‑194的SEQ ID NO.8，针对miR‑365的SEQ ID NO.9，针对miR‑142‑3p的SEQ ID NO.10，针对miR‑424的SEQ ID NO.11，针对miR‑34c的SEQ ID NO.12，针对miR‑196b的SEQ ID NO.13，针对miR‑17‑5p的SEQ ID NO.14，针对miR‑22的SEQ ID NO.15，针对miR‑200a的SEQ ID NO.16，针对miR‑200b的SEQ ID NO.17，和用于对照的内标1序列和内标2序列；(2)信号探针：其5'端为信号序列，3'端为polyT或oligoTGG；所述polyT或oligoTGG是杂交探针中结合序列的反向互补序列；所述信号序列为Oligo GT、Oligo TG或OligoGTT序列，其长度为60‑90个碱基。...
【技术特征摘要】
1.一种miRNA检测探针，其特征在于，包括有：(1)杂交探针：其5'端为tag标签序列，3'端为结合序列，所述tag标签序列和所述结合序列之间还设有待检测靶标miRNA反向互补序列；所述结合序列为polyA序列或为oligoCCA序列，其长度为8-20个碱基；所述tag标签序列选自SEQIDNO.20-SEQIDNO.38；所述待检测靶标miRNA反向互补序列选自针对miR-199a的SEQIDNO.1，针对miR-542-3p的SEQIDNO.2，针对miR-20a的SEQIDNO.3，针对miR-125b的SEQIDNO.4，针对miR-150的SEQIDNO.5，针对miR-125a的SEQIDNO.6，针对miR-223的SEQIDNO.7，针对miR-194的SEQIDNO.8，针对miR-365的SEQIDNO.9，针对miR-142-3p的SEQIDNO.10，针对miR-424的SEQIDNO.11，针对miR-34c的SEQIDNO.12，针对miR-196b的SEQIDNO.13，针对miR-17-5p的SEQIDNO.14，针对miR-22的SEQIDNO.15，针对miR-200a的SEQIDNO.16，针对miR-200b的SEQIDNO.17，和用于对照的内标1序列和内标2序列；(2)信号探针：其5'端为信号序列，3'端为polyT或oligoTGG；所述polyT或oligoTGG是杂交探针中结合序列的反向互补序列；所述信号序列为OligoGT、OligoTG或OligoGTT序列，其长度为60-90个碱基。2.根据权利要求1所述的miRNA检测探针，其特征在于，所述结合序列的长度为15-17个碱基。3.根据权利要求1所述的miRNA检测探针，其特征在于，所述信号序列的长度为80-90个碱基。4.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈昌华，吴诗扬，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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