异鼠李醇在食管癌化学预防中的应用制造技术

本申请属于癌症治疗和预防技术领域，具体涉及异鼠李醇在食管癌预防中的应用。异鼠李醇用于化学预防食管癌的癌变过程。本申请的总体设计思路为：在NMBA诱导的大鼠食管癌变过程中，通过影响癌前病变的发生率、多样性，以及通过免疫组化方法判断Ki67，c‑Jun指标的表达情况来对异鼠李醇对于食管癌的化学预防作用进行判定。本申请通过构建NMBA诱导的大鼠食管上皮癌变模型过程，对异鼠李醇干预食管癌发生发展的效果做了具体评价。结果表明，适当浓度的异鼠李醇对于食管癌病变过程的预防具有较好地效果，为食管癌的化学预防提供了新的思路和参考借鉴的可能性。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于癌症治疗和预防
，具体涉及异鼠李醇在食管癌化学预防中的应用。
技术介绍
食管癌在世界上是最常见的恶性肿瘤，在导致癌症死亡最常见的肿瘤中，位居第六位，预后非常差，五年生存率仅为8~12%。食管鳞状细胞癌（esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC）和食管腺癌（esophagealadenocarcinoma，EAC）是食管癌的两个主要组织学类型。ESCC是发展中国家最常见的亚型，但在美国和其他西方国家食管癌主要是EAC。近年来，尽管食管癌早期诊断、早期发现技术有了很大进步，标准的化疗和放疗已在临床上应用了几十年，但大多数临床中晚期病人的整体生存率仍无明显改善，提示了仅强调肿瘤早期发现和治疗而忽视肿瘤预防，结果收效甚微。癌症是否可以预防？早在20世纪80年代中期，世界卫生组织（WHO）就已经明确地提出了3个1/3的观点，即1/3的癌症可以预防，1/3的癌症患者可以治愈，1/3的患者积极治疗后可以提高生活质量，延长生存期。现有研究认为，食管癌变是一个多阶段进行性发展过程(正常－基底细胞增生－不典型增生－原位癌－食管鳞状细胞癌），并确立了癌前病变的概念。食管癌前病变呈现明显的双向发展的不稳定特性，即这些病变可向癌的方向发展，也可退回到较轻度的病变，或维持同一状态多年不变。食管癌癌前病变的这一特点提示如果在早期介入干预，癌前病变可能被逆转或发展过程被阻断，从而抑制食管癌的发生和发展。更好地了解食管癌癌前病变的基因和/或癌前病变发生机制会对确定癌前病变发展的关键分子起决定作用，因此，需要开发针对这些关键基因的安全、有效的靶向药物，进而逆转，抑制，或停止癌前病变进一步进展为癌症。因此构建能够模拟食管癌发生发展过程的动物模型可以为食管癌化学预防提供一个好的思路。食管癌发生发展是环境因素和基因相互作用的结果。通过对河南地区食管癌高发区人群的流行病学调查研究，发现甲基苄基亚硝胺（N-nitrosomethylbenzylamine，NMBA）与食管癌的发生具有密切的正相关性。目前NMBA诱导的大鼠食管鳞状细胞癌变模型，广泛地用于评估食管癌的病理生理学过程，以确认化学预防药物在人类试验中的应用前景。大鼠从正常的食管上皮发展为鳞状细胞癌经历了增生、粘膜白斑、不典型增生、乳头状瘤，这种应变反应与人类病变过程极为相似，可以充分模拟人食管上皮癌变的过程，采用该动物模型可以进一步探讨食管癌变过程的分子机制，从而为寻找分子靶标，并为进一步筛选干预或者延缓食管癌发生发展的癌症化学预防药物提供了一个平台。食管癌化学预防研究中，除了维生素和多种微量元素外，多种化合物也被用来尝试进行食管癌的化学预防研究，如茶多酚、冻干草莓、没食子酸、抗氧化类及非甾体类抗炎药物等，这些化合物通过不同的靶向分子预防食管癌的发生和发展，但其作用机制还需要更深入地研究。但根据预先确定的食管癌预防靶点，筛选安全性好、效率好、低毒的化合物是开展食管癌预防的基础设计目标。异鼠李醇是多种药用植物中的一种槲皮素衍生物。槲皮素为一种天然的黄酮类化合物，广泛存在于多种中药，研究表明，槲皮素通过调节癌基因c-fos和c-jun基因表达，以及抑癌基因p53、p21、p27，癌基因c-myc、c-src等的表达发挥抑制肿瘤细胞增殖，促进凋亡的作用，并且对MEK-ERK、STAT3等信号传导通路都具有调控作用。异鼠李醇的同分异构体异鼠李素在肿瘤中的研究也非常多，异鼠李素能通过降低凋亡抑制基因bcl-2表达、增加促凋亡蛋白Bax的数量以及激活caspase活性诱导肿瘤细胞凋亡，并且对MEK-ERK、PKC、JNK等信号传导通路都具有调控作用。而关于异鼠李醇抗肿瘤作用的研究非常少，异鼠李醇仅仅在皮肤癌和乳腺癌中研究报道过，在皮肤癌中，异鼠李醇通过其靶点Erk阻止皮肤癌细胞的转化过程，同时其还可以抑制乳腺癌细胞的增殖。而关于异鼠李醇与食管癌的关系则缺少相应的研究。
技术实现思路
本专利技术通过构建NMBA诱导的大鼠食管癌变的动物模型，对于异鼠李醇与食管癌癌变关系进行了初步研究，证明了异鼠李醇可以用于预防食管癌的癌变，具有较好地潜在应用价值。本专利技术所采取的技术方案如下所述。异鼠李醇在食管癌化学预防中的应用，用于预防食管上皮的癌变过程。具体而言，异鼠李醇用于食管上皮永生化细胞（SHEE细胞）时，10μM浓度以下时对于细胞毒性较小，且可抑制食管上皮永生化细胞转化；用于预防食管癌病变时，按70~350mg/m2剂量应用；进一步而言，用于大鼠时，70~350mg/m2剂量，相当于等效剂量10~50mg/kg，可以预防大鼠食管癌病变；用于小鼠时，按照70~350mg/m2剂量，相当于等效剂量15.4~78.54mg/kg，可以预防小鼠食管癌病变，用于人时，相当于等效剂量1.5~7mg/kg。本申请的总体设计思路为：NMBA诱导的大鼠食管癌变过程中，通过影响癌前病变的发生率、多样性，以及通过免疫组化方法判断ki67，c-jun指标的表达情况来对异鼠李醇对与食管癌的化学预防作用进行判定。实验过程中，申请人通过体外实验，筛选获得了最佳的用于SHEE细胞的异鼠李醇浓度，并证实了异鼠李醇可以强烈的抑制SHEE细胞在癌变过程中的细胞增殖以及锚定非依赖型生长。进一步地，通过构建NMBA诱导的大鼠食管上皮癌变模型，对异鼠李醇干预食管癌发生发展的效果做了具体评价。结果表明，适当浓度的异鼠李醇对于食管癌病变的预防具有较好地效果，为食管癌的化学预防提供了新的思路和参考借鉴的可能性。附图说明图1为异鼠李醇对SHEE细胞增殖及转化能力的影响结果，其中A为通过CCK8试剂盒检测异鼠李醇对SHEE细胞毒性的实验结果，图中10μM异鼠李醇细胞的存活率在80%左右；B为异鼠李醇对SHEE细胞生长抑制作用结果，其结果表明，在0~10μM时，异鼠李醇对SHEE细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性；C为异鼠李醇对SHEE细胞转化能力的影响结果，其结果表明，随着异鼠李醇浓度的升高，细胞转化能力和克隆数量下降，异鼠李醇能够抑制EGF诱导食管上皮永生化细胞SHEE的转化；图2为实验分组情况，其中A为溶剂对照组，皮下注射无菌水，每周3次，共5周；0.5%羧甲基纤维素钠灌胃（10ml/kg）；B为NMBA组，皮下注射NMBA（0.5mg/kg），每周3次，共5周（0周到5周）；C为增生平组，从-1周开始灌胃增生平（4g/kg），在0周到5周皮下注射NMBA（0.5mg/kg），每周3次；D为异鼠李醇低剂量组，从-1周开始灌胃异鼠李醇（10mg/kg），在0周到5周皮下注射NMBA（0.5mg/kg），每周3次；E为异鼠李醇高剂量组，从-1周开始灌胃异鼠李醇（50mg/kg），在0周到5周皮下注射NMBA（0.5mg/kg），每周3次；注：↑表示NMBA注射时间，在0~5周，每周注射3次；图3为35周时，各实验组大鼠食管粘膜鳞状上皮ki67表达情况（×400），其中A为溶剂对照组样品图，B为甲基苄基亚硝胺组样品图，C为增生平组样品图，D为异鼠李醇低剂量组样品图，E为异鼠李醇高剂量组样品图，F为各实验组ki67阳性细胞百分比（与NMBA组相比，差异有统计学意义，*表示P本文档来自技高网...

【技术保护点】
异鼠李醇在食管癌化学预防中的应用，其特征在于，用于预防食管上皮的癌变过程。

【技术特征摘要】
1.异鼠李醇在食管癌化学预防中的应用，其特征在于，用于预防食管上皮的癌变过程。2.如权利要求1所述异鼠李醇在食管癌化学预防中的应用，其特征在于，按70~350mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：董子钢，常俊标，董子明，赵四敏，刘康栋，李洪林，江亚南，赵继敏，王艳红，别荣海，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南;41