制备高纯度化学对照品木鳖子皂苷I的方法技术

一种制备高纯度化学对照品木鳖子皂苷I的方法，通过将木鳖子水煎液液萃取除杂、经树脂洗脱得到粗提物后，再通过ODS柱层析后重结晶得到化学对照品木鳖子皂苷I。本发明专利技术能够用于木鳖子药材的准确、快速鉴定及质量评价。该方法具有简便、快速、纯度高、得率高、生产成本低等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种药物提取领域的技术，具体是一种从木鳖子中制备高纯度化学对照木鳖子皂苷I(momordica saponins I)的方法。
技术介绍
木鳖子Momordicae Semen为葫芦科苦瓜属植物木鳖Momordica cochinchinensis(Lour.)spreng.的干燥成熟种子，始载于宋·《开宝本草》，收载于历版《中国药典》中。具有消肿散结，攻毒疗疮之功效，主治疮疡肿毒，乳痈，瘰疬，痔瘘，干癣，秃疮。现代研究发现：木鳖子具有抗炎、镇痛、抗病毒、抗菌、抗肝纤维化、抗肿瘤作用等多种药理作用；木鳖子皂苷I是其主要活性成分。同时，木鳖子皂苷I也是木鳖子的特征性成分(结构如下所示)，结构独特(为丝石竹皂苷元八糖苷)，目前只在木鳖子中发现，具有很强的专属性。因此，制备高纯度的木鳖子皂苷I作为化学对照品，可以用于木鳖子药材的快速准确鉴定及质量评价，具有重要应用价值。然而，木鳖子化学成分复杂，含多种类型的化学成分，包括脂肪酸类、皂苷类、甾醇类、木脂素类、多肽类、蛋白类、糖类成分。另一方面，木鳖子皂苷I为强极性成分，结构式中有8个糖基(包括2个鼠李糖、2个木糖、1个半乳糖、1个葡萄糖、1个葡萄糖醛酸、1个岩藻糖)。除此之外，木鳖子中尚含有一系列皂苷，这些皂苷木鳖子皂苷I结构类似。因此，木鳖子皂苷I分离难度极大。经对现有技术文献进行检索发现，《化学与药理通报》(Chem Pham Bull)于1985年第33卷第2期第464页‐478页，名称为“木鳖化学成分研究I.木鳖子皂苷I和Ⅱ的分离和特征”(Studies on constituents of Momordica cochinchinensis SPRENG.I.Isolation and characterization of seed saponins,momordica saponins I and II)公开了一种分离木鳖子皂苷I的方法：木鳖子种仁粉碎后先用正已烷脱脂，然后甲醇提取，得甲醇提取物和药渣。甲醇提取物依次用正已烷、氯仿、正丁醇萃取，得萃余水溶液；药渣继续用50％的甲醇水溶液提取，提取液挥干甲醇，然后用正丁醇萃取，得萃余水溶液。合并两次所得萃余水溶液，经MCI柱层析，先用水液，然后用30％的乙醇洗脱，收集30％的乙醇洗脱液，得木鳖子总皂苷。木鳖子总皂苷经C18柱反复柱层析，最后得木鳖子皂苷I。该方法操作繁琐，得率很低(仅为万分之二点四)，且分离过程中使用大量氯仿、甲醇、正丁醇等有毒溶剂。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的上述不足，提出一种制备高纯度化学对照品木鳖子皂苷I的方法，用于木鳖子药材的准确、快速鉴定及质量评价。该方法具有简便、快速、纯度高、得率高、生产成本低等优点。本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术通过将木鳖子水煎液萃取除杂、经树脂洗脱得到粗提物后，再通过ODS柱层析后重结晶得到化学对照品木鳖子皂苷I。所述的萃取除杂，通过乙酸乙酯萃取进行。所述的树脂洗脱，采用但不限于D101大孔树脂柱，通过乙醇洗脱。所述的树脂洗脱，通过乙醇洗脱后经反相TLC检测后合并主斑点相同的流份。所述的ODS柱层析，优选采用C18反相硅胶。所述方法具体包括：1)木鳖子粉碎后加水煎煮，水煎液离心，浓缩至0.8g生药/mL～1.0g生药/mL。加入等量乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层回收溶剂(用于下一次萃取)，弃去乙酸乙酯提取物。水层置水浴上挥尽乙酸乙酯，得水溶液。所述的木鳖子为葫芦科植物木鳖Momordica cochinchinensis(Lour.)Spreng.的干燥成熟种子。所述的煎煮中，水和木鳖子的料液比为1:8～1:12(g/mL)，提取次数为2～3次，提取时间为0.5～1h。所述的乙酸乙酯萃取次数各为2～3次。2)水溶液上D101大孔树脂柱，先以水洗，继用20％乙醇洗脱，然后50％的乙醇洗脱。收集50％乙醇洗脱液(每个流份0.4BV)，反相TLC检测，合并主斑点相同(Rf0.20‐0.25)的流份，回收乙醇(可再次使用)得木鳖子皂苷I提取物。所述的大孔树脂柱层析树脂用量为药材重量的2～3倍，每个梯度洗脱4～6个柱体积(BV)，流速为0.4BV/h。所述的反相TLC法检测为：将样品溶于甲醇，C18硅胶板上点样，以甲醇‐水50：50(v/v)为展开剂，展开后电吹风吹干展开剂，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂，加热显色进行检测。3)木鳖子皂苷I提取物溶于水，离心，取上清液，进行ODS柱层析。先用20％的甲醇溶液洗脱(弃去洗脱液)，然后35％、50％的甲醇溶液洗脱，收集35％、50％甲醇洗脱液(每流份0.2BV)，反相TLC检测，合并主斑点相同(Rf0.20‐0.25)的流份，减压回收溶剂，得木鳖子皂苷I粗品。所述的ODS硅胶柱层析采用C18反相硅胶(ODS)，粒径为45～75μm，样量比为1:100～1:200(样品比反相硅胶，w/w)。每个梯度洗脱4～6个BV，流速0.2BV/h。4)将步骤3)所得木鳖子皂苷I粗品利用甲醇重结晶2次，即得木鳖子皂苷I粗精制品。本专利技术涉及上述的方法提取得到的木鳖子皂苷I其纯度达到96％，可用于木鳖子药材的真伪鉴定及优劣评价等方面。技术效果与现有技术相比，本专利技术通过上述方法可以制备木鳖子皂苷I精制品；所得产品纯度高，均在95％以上，收率高(达1‰以上)。采用水作为溶剂提取药材，既提高了目标成分的提取率，同时又去除了木鳖子中大部分脂溶性成分(如脂肪酸、木脂素类成分)的干扰，还降低了成本；水提液浓缩后用乙酸乙酯萃取，进一步去除了脂溶性成分，提高了目标产物的纯度。采用D101大孔树脂柱层析方法，又进一步排除了水溶性成分如多糖、蛋白质的干扰，简化了制备工艺。经ODS柱层析，进一步提高了目标产物的纯度。制备过程不经过常规的正相硅胶柱层析，而是采用反相硅胶，避免了填料对目标产物的吸附损失，提高了得率；整个制备过程只需使用乙醇、乙酸乙酯、甲醇3种有机溶剂，分离中用到的填料、溶剂均可反复使用，无需HPLC等精密仪器进行纯化，生产成本低、简便快速。附图说明图1为木鳖子皂苷I的1H‐NMR图(600MHz，DMSO‐d6)图2为木鳖子皂苷I的13C‐NMR图(150MHz，DMSO‐d6)具体实施方式实施例1本实施例1是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：1.木鳖子200g，加入1600mL水煎煮2次，每次0.5h，离心，取上清液，上清液浓缩至250mL备用。2.上清液加入250mL乙酸乙酯萃取2次，回收乙酸乙酯，弃去提取物；下层水溶液水浴上挥至无乙酸乙酯味，得水溶液。3.水溶液上D101大孔树脂柱(400g树脂)，先以水洗4柱体积，继用20％乙醇洗脱4个柱体积，然后50％的乙醇洗脱4个柱体积(流速均为0.4BV/h)。收集50％乙醇洗脱液(每个流份0.4BV)，反相TLC检测，合并主斑点相同(Rf0.20‐0.25)的流份，回收乙醇(可再次使用)得木鳖子皂苷I提取物(3.8g)。4.木鳖子皂苷I提取物进行ODS柱层析(420g反相硅胶，MeOH‐H2O梯度洗脱，流速为0.2BV/h)，先用20％的甲醇溶液洗脱，然后35％、50％的甲醇溶液洗脱，收集35％、50％甲醇洗脱液(每个梯度洗脱4BV，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备高纯度化学对照品木鳖子皂苷I的方法，其特征在于，通过将木鳖子水煎液萃取除杂、经树脂洗脱得到粗提物后，再通过ODS柱层析后重结晶得到化学对照品木鳖子皂苷I；所述的萃取除杂，通过乙酸乙酯实现；所述的树脂洗脱，采用D101大孔树脂柱，通过乙醇洗脱；所述的树脂洗脱，通过乙醇洗脱后经反相TLC检测后合并主斑点相同的流份；所述的ODS柱层析，采用C18反相硅胶；所述的木鳖子为葫芦科植物木鳖Momordica cochinchinensis(Lour.)spreng.的干燥成熟种子。

【技术特征摘要】
1.一种制备高纯度化学对照品木鳖子皂苷I的方法，其特征在于，通过将木鳖子水煎液萃取除杂、经树脂洗脱得到粗提物后，再通过ODS柱层析后重结晶得到化学对照品木鳖子皂苷I；所述的萃取除杂，通过乙酸乙酯实现；所述的树脂洗脱，采用D101大孔树脂柱，通过乙醇洗脱；所述的树脂洗脱，通过乙醇洗脱后经反相TLC检测后合并主斑点相同的流份；所述的ODS柱层析，采用C18反相硅胶；所述的木鳖子为葫芦科植物木鳖Momordica cochinchinensis(Lour.)spreng.的干燥成熟种子。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的水煎煮中，水和木鳖子的料液比为1:8～1:12(g/mL)，提取次数为2～3次，提取时间为0.5～1h。水溶液浓缩至0.8g～1.0g生药/mL。3.根据权利要求1所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓波，王梦月，詹志斌，冯晓茹，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31