【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品领域，具体涉及一种观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法。
技术介绍
1、淀粉是自然界中除纤维素外的第二大可再生原料，因其来源广泛、可完全降解、可再生及价格低廉等优点，广泛应用于食品、化工、医药、纺织、造纸等工业中作为增稠剂、粘合剂、稳定剂或胶凝剂等。然而，在淀粉应用中，天然淀粉由于其本身固有的缺陷(对热处理、剪切应力耐受性差，加工性不佳)，在工业中的应用受到一定限制。为了满足工业需要，往往会通过物理、化学或生物方式对天然淀粉进行改性从而改善其性质和功能。而这些改性手段往往需要在碱性环境下进行或直接以碱作为改性手段。碱性环境对于淀粉的理化性质和改性反应都有着重要的影响，并受到了越来越多的关注。
2、淀粉颗粒主要由直链淀粉和支链淀粉构成，此外还含有微量的脂质，蛋白，矿物元素等微量成分。这些微量成分虽然含量低，对淀粉的理化、功能和营养特性有着极其重要的作用。其中淀粉颗粒中的脂质能够与直链淀粉形成复合物，增强淀粉颗粒结构的完整性和刚性，同时表面脂质可能会在淀粉颗粒表面形成一层膜结构，限制颗粒内部和外部环境的分子进出等。而许多研究也发现脂质在淀粉的化学改性中发挥着重要作用，影响改性效率和改性淀粉的性质。而另一方面脂质在碱性环境下会发生皂化反应，导致脂质的降解。在淀粉化学改性中的碱性环境无疑会对淀粉中的脂质造成影响，这极有可能是化学改性中碱的作用之一。因此有必要探究淀粉中脂质在碱性环境下发生的变化。
3、而在众多研究手段中，采用激光共聚焦显微镜来观察淀粉脂质的分布变化无疑是非常直观且有效的。近年
技术实现思路
1、为了满足在碱性环境下观察淀粉结合脂质分布的需求，本专利技术提供一种观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，对于指导与淀粉改性和淀粉结合脂质相关的淀粉结构、性质和功能的研究以及淀粉在食品工业上的应用具有重要意义。
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
3、本专利技术涉及一种观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，包括淀粉颗粒结合脂质染色和激光共聚焦显微镜观察步骤，
4、s1、将在碱性环境下处理后的淀粉用碱溶液稀释至合适浓度，选择尼罗红染料对淀粉颗粒脂质进行染色，从而完成对淀粉颗粒脂质的荧光标记；在整个染色过程中以碱性溶液作为反应分散体系，保证淀粉颗粒处于实验所需的碱性ph环境下，避免染色过程中溶液ph的变化；
5、s2、利用激光共聚焦显微镜对步骤s1所得样品进行观察，通过激光激发和原位扫描成像获得淀粉颗粒在碱性环境下脂质的分布情况。
6、作为一个实施方案，所述淀粉选自玉米淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、糯米淀粉、小麦淀粉或魔芋淀粉。
7、作为一个实施方案，所用碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙。
8、作为一个实施方案，染色反应过程中，连续震荡使得淀粉颗粒均匀分散在染色剂中。用以确保所有的淀粉都能与染色试剂接触，从而保证反应的均匀性。
9、作为一个实施方案，步骤s1包括以下步骤：
10、s1-1，将淀粉加入到碱液中依据所需实验条件，调至ph＝7-14的碱性环境下进行处理，制备淀粉乳液；
11、s1-2，将所述淀粉乳液用与所述淀粉乳液相同ph的碱溶液稀释，使稀释后的淀粉浓度在10-40mg/l，得到具有与所述淀粉乳液相同ph的淀粉稀溶液；所述碱溶液与步骤s1-1中碱液采用的碱试剂相同；
12、s1-3，将淀粉稀溶液与1-5mg/ml的尼罗红乙醇染液按20-500:1的比例进行混合，在室温下振荡反应3-5min，使得尼罗红与淀粉颗粒充分接触，标记淀粉结合脂质；
13、s1-4，将反应体系离心5-20min(5000-15000×g)，弃去上清液，用步骤s1-2中所述碱溶液将沉淀清洗，洗去残留的染料。
14、作为一个实施方案，所述尼罗红乙醇染液现用现配；采用的乙醇为100％的纯乙醇。
15、在一些实施例中，步骤s1-3中，将淀粉稀溶液与1-5mg/ml的尼罗红乙醇染液按100:1的比例进行混合。
16、在一些实施例中，步骤s1-4中，反应体系离心5min(5000-15000×g)。
17、作为一个实施方案，步骤s1-2中淀粉稀释目的在于使观察时淀粉浓度合适，该步骤亦可移至步骤s1-3之后。
18、作为一个实施方案，步骤s1-4中洗去残留的染料，直到涡旋、离心后的上清液无明显的颜色为止。在一些实施示例中，重复清洗3-5次。
19、作为一个实施方案，步骤s2包括以下步骤：
20、s2-1，在淀粉颗粒沉淀中加入0.5-2ml的步骤s1-2中所述碱溶液，涡旋，吸取5-20μl样品滴加到载玻片上，涂布均匀；
21、s2-2，将制备好的载玻片放到提前滴加香柏油的物镜上方，用激光器进行激发；在570-649nm的间隔波长处检测其发射光。
22、在一些实施例中，s2-1中，在淀粉颗粒沉淀中加入1ml的步骤s1-2中所述碱溶液
23、作为一个实施方案，所述激发是用dpss(561nm)激光器分别以1-4％的功率工作，进行激发。
24、本专利技术所用染料为尼罗红，本领域中认可的是尼罗红可用于脂质染色，但少有用于淀粉脂质的染色，而常作为细胞染色。而提及尼罗红染色条件的文献多使用中性水溶液，尚无明确的的碱性ph下使用尼罗红染色的报道。
25、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
26、本专利技术的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，是在整个染色过程是在维持体系的ph不变的情况下进行的，实现了碱性环境下的原位染色，避免了ph变化对脂质分布的影响，更好的观察碱性环境中淀粉脂质的分布。
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1.一种观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，包括淀粉颗粒结合脂质染色和激光共聚焦显微镜观察步骤，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，所述淀粉选自玉米淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、糯米淀粉、小麦淀粉或魔芋淀粉。
3.根据权利要求1所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，所用碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙。
4.根据权利要求1所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，染色反应过程中，连续震荡使得淀粉颗粒均匀分散在染色剂中。
5.根据权利要求1所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，步骤S1包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，所述尼罗红乙醇染液现用现配；采用的乙醇为100％的纯乙醇。
7.根据权利要求5所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，步骤S1-4中洗去残留的染料，直到涡旋、离心后的上清液无明显的颜色为止
8.根据权利要求5所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，步骤S2包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，所述激发是用DPSS(561nm)激光器分别以1-4％的功率工作，进行激发。
...【技术特征摘要】
1.一种观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，包括淀粉颗粒结合脂质染色和激光共聚焦显微镜观察步骤，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，所述淀粉选自玉米淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、糯米淀粉、小麦淀粉或魔芋淀粉。
3.根据权利要求1所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，所用碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙。
4.根据权利要求1所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布的方法，其特征在于，染色反应过程中，连续震荡使得淀粉颗粒均匀分散在染色剂中。
5.根据权利要求1所述的观察碱性环境下淀粉颗粒结合脂质分布...
【专利技术属性】
技术研发人员：隋中泉，许泽坤，张闯闯，马梦婷，徐雨婷，张馨予，南流，南潇，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：
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