本发明专利技术涉及专用型BRCA2基因多重PCR建库试剂盒。具体而言，本发明专利技术提供一种引物产品，所述产品中的引物包括SEQ ID NO:1－116所示的引物序列。本发明专利技术还提供一种多核苷酸序列产品，该产品中的每一种多核苷酸序列分别含有悬挂接头序列和SEQ ID NO:1－116任一所示的引物序列。还提供了相应的试剂盒及BRCA2基因多重PCR建库或BRCA2基因突变筛查方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于BRCA2基因突变体检测领域，具体涉及专用型BRCA2基因多重PCR建库试剂盒。
技术介绍
乳腺癌是世界女性最常见的恶性肿瘤之一，占女性癌症发病总数的23％，占女性癌症死亡人数的14％。乳腺癌转移复发是患者重要的致死原因，转移后中位生存时间不足2年。在我国，近年来乳腺癌的发病率呈逐年上升的趋势。从90年代以来，中国的乳腺癌发病率增长速度是全球的两倍多，城市地区尤为显著。以北京和上海为例，乳腺癌已经连续20年位于女性恶性肿瘤第一位，现在年发病率已达到40/10万以上，并且每年仍以2-3％的速度上升，有逐步接近欧美发达国家水平的趋势。另外，与欧美发达国家女性相比，中国乳腺癌患者绝经前患者占一半以上(欧美不足30％)，并且发病年龄高峰较西方女性早5到10年。由于这个年龄段的女性是家庭和社会的中坚力量，进一步突显了乳腺癌对我国社会和家庭带来的巨大危害。同时，上海是中国人口最多的城市，也是乳腺癌发病率最高的城市之一，海市乳腺癌发病趋势代表了未来20年中国城市化进程中的疾病趋势。乳腺癌的致病原因至今没有完全了解。乳腺癌家族史、乳腺良性疾病史、较晚的月经初潮年龄、较高的精神压力、较高的身体质量指数(Body Mass Index，BMI)及肿瘤家族史等被认为是罹患乳腺癌的重要诱因。乳腺癌的病因从遗传角度而言也有了较多的突破，BRCA1，BRCA2，TP53，PTEN，STK11/LKB1，CDH1，CHEK2，ATM，MLH1，MSH2等一系列乳腺癌易感基因的突变也被证明与乳腺癌相关。现有研究已经明确证实BRCA1和BRCA2基因的胚系突变与遗传性乳腺癌的发生与密切相关。遗传性乳腺癌约占所有乳腺癌5％-10％左右，其发病年龄相对年轻；30岁以下的年轻乳腺癌患者中约25-35％有乳腺癌易感基因的突变。更重要的是，携带BRCA1/2基因突变的妇女，其一生中患乳腺癌、卵巢癌累计危险随年龄增长而增高，BRCA1/2突变携带者到80岁时发生乳腺癌的预测累积风险均超过80％；而普通人群一生患乳腺癌危险度为14％左右，亦即BRCA1/2基因的突变让妇女罹患乳腺癌的风险升高了5倍以上。BRCA1/2的功能研究提示其属于抑癌基因，在DNA损伤修复、细胞周期调节、基因转录激活、染色质稳定等方面发挥着重要作用。在外界因素的干扰下，抑癌基因发生突变后，细胞的生长失去正常调控从而导致肿瘤的发生。BRCA1/2基因的任何有害突变都可导致较高的乳腺癌和卵巢癌终身风险，同时还会增加一系列其他肿瘤发生的风险。BRCA1/2突变基因携带者终身罹患乳腺癌的累积风险为80％。由此可见，对乳腺癌高危人群进行BRCA1/2基因突变检测，对于早期发现遗传性乳腺癌，尤其是对于恶性程度高、预后相对差的三阴性乳腺癌具有重要意义。通过了解合适患者的BRCA1/2状态有助于评估其癌症的终身风险，并采取可成功降低患病风险的伴随措施，比如建议大多数携带者接受乳腺癌和卵巢癌预防性手术和增加乳腺定期检查次数。BRCA1/2基因突变检测另一个重要的应用在于为乳腺癌患者使用新一代PARP抑制剂类抗肿瘤新药提供疗效预测。BRCA1/2基因突变显著增加了妇女罹患乳腺癌和卵巢癌的风险，原因是这些突变会致使某些蛋白无效，无法修复造成额外致癌突变的DNA损坏。但是两种基因的瑕疵使肿瘤细胞容易遭受PARP抑制剂的攻击，因为PARP抑制剂能够进一步破坏肿瘤细胞DNA的修复机制。这种组合效果使肿瘤细胞不能修复对DNA的破坏，然后肿瘤细胞就会死掉，这种观念被称为“合成致死”。研究发现新型PARP抑制剂——奥拉帕尼对于携带有BRCA1/2突变的乳腺癌和卵巢癌的肿瘤患者有效。因此，了解BRCA的突变状态对于乳腺癌治疗方面的作用也日趋重要，因为它能够指导PARP抑制剂类药物的应用，利用BRCA1/2基因检测来确定哪些乳腺癌患者会受益于奥拉帕尼，进一步加速乳腺癌诊治方式的革新，所以对于BRCA1/2基因突变的检测具有广泛及深远临床应用和市场开发前景。目前，针对突变基因检测方法主要分为两大方向：其一是对全基因序列的检测，其二是对已知的突变位点检测。因为BRCA1和BRCA2是两个功能复杂的大基因，需要进行整个基因的扫描才能确定是否存在基因突变，鉴于二代测序技术的发展，有望成为BRCA1/2基因突变的有效检测手段。1994年，美国率先在一些人群中开展基因筛检，经历了10多年的发展，截至2005年底，包括乳腺癌基因突变的筛查，美国已有500多万人接受了基因检测。从总体上看，美国乳腺癌的发病率下降了70％；在美国，已经有超过10万名妇女接受了乳癌易感基因BRCA1和BRCA2的检测。而在加拿大针对乳腺癌的基因检测已成为常规检测手段，而全部费用由国家支付。因为经过卫生经济学家测算发现，在早期对包括乳腺癌在内的一些癌症性疾病进行有效监测和预防，远比发病后以及病情晚期治疗更能减少卫生财政的支出。然而，在我国BRCA1/2基因突变筛查仍然是盲点。我国目前临床上仍普遍采用体检、钼靶和B超等传统手段来诊断、评价乳腺癌，这些方法存在明显的局限性。首先，多数病人在诊断确立时已经跨越了肿瘤的早期阶段，而对于基因突变的筛查，根据其结果通过遗传咨询可以判断预估患者罹患乳腺癌的危险度，在乳腺癌发生前行预防性的治疗，从而做到“治未病”。其次，乳腺癌病情发生发展复杂多变，现代医学对癌症的诊治必须以每个患者的信息为基础决定治疗方案，从基因组的差异来对每个患者行个体化治疗。安吉丽娜·朱莉和姚贝娜两位明星，由于采取的措施不同，她们的命运各不相同。由此可以看出，开始阶段对乳腺致癌基因BRCA1/2进行的基因检测可以导致完全不同的生存预后。复旦大学附属肿瘤医院的全国多中心研究结果显示，汉族遗传性乳腺癌人群中BRCA1/2突变率为9.5％，这意味着对于中国遗传性乳腺癌患者中，每10个人就至少有1个人携带BRCA1/2基因的突变。为此，2014年NCCN指南提出，发生在45岁以下的乳腺癌患者、60岁以下的三阴性乳腺癌患者，乃至有癌症高危家族史的乳腺癌患者和健康人等，都有进行乳腺癌基因突变筛查的指证。但是，目前国内关于BRCA1/2突变的大规模筛查的方法和评估体系尚未建立，在基因分子检测迅猛发展的今天，亟需建立稳定的检测技术和规范的筛查流程，并客观科学地评估基因的遗传变异的作用,通过个体的遗传易感检测,来评估女性罹患乳腺癌的风险,建立乳腺癌分子预警系统；同时，BRCA1/2突变检测系统还可为PARP抑制剂类抗肿瘤新药在乳腺癌上的应用提供可靠的疗效预测。
技术实现思路
本专利技术第一方面提供一种引物产品，该产品含有SEQ ID NO:1－116所示的引物序列。在一个或多个实施方案中，所述引物分为独立包装的两组，其中，一组引物含SEQ ID NO:1、2、5、6、9、10、13、14、17、18、21、22、25、26、29、30、33、34、37、38、41、42、45、46、49、50、53、54、57、58、61、62、65、66、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、95、96、99、100、103、104、107、108、111、112、115和本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种引物产品，其特征在于，所述产品中的引物包括SEQ ID NO:1－116所示的引物序列。
【技术特征摘要】
1.一种引物产品，其特征在于，所述产品中的引物包括SEQ ID NO:1－116所示的引物序列。2.如权利要求1所述的引物产品，其特征在于，所述引物分为独立包装的两组，每一组的引物扩增区域没有交叉重叠；优选地，一组引物含SEQ ID NO:1、2、5、6、9、10、13、14、17、18、21、22、25、26、29、30、33、34、37、38、41、42、45、46、49、50、53、54、57、58、61、62、65、66、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、95、96、99、100、103、104、107、108、111、112、115和116；另一组引物含SEQ ID NO:3、4、7、8、11、12、15、16、19、20、23、24、27、28、31、32、35、36、39、40、43、44、47、48、51、52、55、56、59、60、63、64、67、68、71、72、75、76、79、80、83、84、87、88、91、92、97、98、101、102、105、106、109、110、113和114。3.一种多核苷酸序列产品，其特征在于，所述多核苷酸序列产品含116种多核苷酸序列，其中，每一种多核苷酸序列含悬挂接头序列和特异性引物序列，每一种多核苷酸序列所含的所述特异性引物序列各自独立选自SEQ ID NO:1－116。4.如权利要求3所述的多核苷酸序列产品，其特征在于，SEQ ID NO:1－116所示的引物中，奇数编号的引物为正向引物，偶数编号的引物为反向引物，其中，在正向引物的5’端连接有SEQ ID NO:117所示的悬挂接头序列，在反向引物的5’端连接有SEQ ID NO:118所示的悬挂接头序列；和/或所述多核苷酸序列产品包括两组多核苷酸序列，每一组的引物扩增区域没有交叉重叠；优选地，一组多核苷酸序列中的特异性引物序列分别是SEQ ID NO:1、2、5、6、9、...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄薇，邵志敏，施锦绣，胡欣，
申请(专利权)人：上海产业技术研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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