β‑葡聚糖测定方法技术

在一个方面，本公开内容提供了用于就生物标记物分析来自受试者的样品的方法，所述生物标记物指示受试者对β‑葡聚糖的免疫应答。一般地，该方法包括从受试者中获得生物样品，与参考标准相比较就生物标记物抗β‑葡聚糖抗体分析样品，计算样品中关于抗β‑葡聚糖抗体的相对抗体单位（RAU）值，并且如果RAU值大于关于生物标记物抗β‑葡聚糖抗体的预定RAU值，则将受试者鉴定为生物标记物阳性的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与相关申请的交叉参考本申请要求于2013年12月5日提交的美国临时专利申请序列号61/912,275，以及于2014年5月30日提交的美国临时专利申请序列号62/005,335的优先权，所述美国临时专利申请各自通过引用并入本文。概述本公开内容提供了用于就生物标记物分析来自受试者的样品的方法，所述生物标记物指示受试者对β-葡聚糖的免疫应答。在一些实施方案中，该方法一般包括从受试者中获得生物样品，与参考标准品相比较就生物标记物抗β-葡聚糖抗体分析样品，计算样品中的抗β-葡聚糖抗体浓度或关于抗β-葡聚糖抗体的相对抗体单位（RAU）值，并且如果抗β-葡聚糖抗体浓度或RAU值大于预定的抗β-葡聚糖抗体浓度或关于生物标记物抗β-葡聚糖抗体的RAU值，则将受试者鉴定为生物标记物阳性的。在其他实施方案中，该方法一般包括从受试者获得生物样品，与参考标准相比较就生物标记物抗β-葡聚糖抗体分析样品，并且如果样品含有的抗β-葡聚糖抗体的量大于关于生物标记物抗β-葡聚糖抗体的预定截断值（其将生物标记物阳性受试者与生物标记物阴性受试者分开），则将受试者鉴定为生物标记物阳性的。在一些实施方案中，生物标记物抗β-葡聚糖抗体可以是IgG。在这些实施方案的一些中，预定的RAU值可以是200。在一些实施方案中，生物标记物抗β-葡聚糖抗体可以是IgM。在这些实施方案的一些中，预定的RAU值可以是300。在一些实施方案中，该方法可以进一步包括给鉴定为生物标记物阳性的受试者施用包括β-葡聚糖的组合物。在一些实施方案中，该方法可以进一步包括给鉴定为生物标记物阳性的受试者施用包括抗β-葡聚糖IgG2的组合物。在一些实施方案中，β-葡聚糖衍生自酵母，例如β-1,3/1,6葡聚糖。在某些实施方案中，β-葡聚糖可以包括β（1,6）-[聚（1,3）-D-吡喃葡糖基]-聚β（1,3）-D-吡喃葡萄糖。在一些实施方案中，就生物标记物抗β-葡聚糖抗体分析样品可以涉及使用酶联免疫吸附测定（ELISA）。本专利技术的上述概括并不意图描述本专利技术的每个公开的实施方案或每一种实现。下述说明书更具体地示例了说明性实施方案。在整个申请的几个地方，通过实施例列表提供了指导，所述实施例可以以各种组合使用。在每种情况下，所述列表仅充当代表性组，并且不应解释为详尽列表。附图简述图1A. 对参考血清指定160的任意值（即160相对抗体单位[RAU]/mL）。因此，在校准曲线上的最高点1:400稀释度导致400 mRAU/mL的值，并且在校准曲线上的最低点1:51200稀释度导致3.125 mRAU/mL的值。平均RAU/mL = 365。图1B. IgG抗β-葡聚糖抗体浓度工作标准曲线。图1C. IgM抗β-葡聚糖抗体浓度工作标准曲线。图2. 来自具有低水平IgG（RAU <200）和IgM（RAU <100）抗β-葡聚糖抗体的八个健康志愿者的全血掺料有浓度增加的IVIG（0、2.5、5和10 mg/ml）。去除血浆并且对于每个样品确定RAU值。图3. 来自具有低水平IgG（RAU <200）和IgM（RAU <100）抗β-葡聚糖抗体的四个健康志愿者的血液样品掺料有浓度增加的IVIG（0、2.5、5和10 mg/ml）。全血细胞用以10µg/mL的IMPRIME PGG进行处理，并且在37℃下温育30分钟，并且分析嗜中性粒细胞结合。图4. 来自具有低水平IgG（RAU <200）和IgM（RAU <100）抗β-葡聚糖抗体的八个健康志愿者的全血细胞与IMPRIME PGG（10 mg/ml）和IVIG（0、2.5、5和10 mg/ml）一起培养，并且就IMPRIME PGG结合和功能进行评估（30分钟温育用于补体分析；2小时温育用于结合和受体调节分析；过夜培养用于细胞因子分析）。图5. 来自具有低水平IgG（RAU <200）和IgM（RAU <100）抗β-葡聚糖抗体的八个健康志愿者的全血细胞与IMPRIME PGG（10 mg/ml）和IVIG（0、2.5、5和10 mg/ml）一起培养，并且就IMPRIME PGG诱导的SC5b-9释放进行评估。图6. 来自具有低水平IgG（RAU <200）和IgM（RAU <100）抗β-葡聚糖抗体的八个健康志愿者的全血细胞与IMPRIME PGG（10 mg/ml）和IVIG（0、2.5、5和10 mg/ml）一起温育，并且就IMPRIME PGG诱导的嗜中性粒细胞上的CD62L脱落（流式细胞术）和IL-8生产（ELISA）进行评估。图7. 关于结合和功能所需的RAU根据个体而改变。因此，生物标记物截断的目的是鉴定RAU水平，所述RAU水平排除将不响应IMPRIME PGG的个体，并且富集具有更高的响应概率的生物标记物阳性受试者。结合和功能数据指示大多数活性在> IVIG-5组（RAU 233-610）中发生，并且因此关于IgG截断的进一步分析应集中于高于200的RAU范围。图8. 通过IgG RAU水平标绘的IMPRIME PGG的健康志愿者嗜中性粒细胞结合。图9. 通过IgG RAU水平标绘的IMPRIME PGG的健康志愿者嗜中性粒细胞结合。带圆圈的受试者是具有低IgG RAU的高嗜中性粒细胞结合者，但具有高IgM RAU，因此，可以从IgG RAU分析中去除。图10. 通过IgG RAU水平标绘的IMPRIME PGG的健康志愿者嗜中性粒细胞结合。在235的IgG RAU截断将其RAU足以促进结合（生物标记物阳性）的志愿者相对于其RAU不足以促进结合（生物标记物阴性）的志愿者分离。图11. 通过IgG RAU水平标绘的IMPRIME PGG的健康志愿者嗜中性粒细胞结合。带圆圈的个体是IgG生物标记物阴性但高IgM RAU的。图12. 通过IgG RAU水平标绘的IMPRIME PGG的健康志愿者嗜中性粒细胞结合。绿色圆圈中的非蓝色志愿者基于高IgG RAU已经是生物标记物阳性的，并且因此，可以从IgM RAU分析中去除。图13. 通过IgG RAU水平标绘的IMPRIME PGG的健康志愿者嗜中性粒细胞结合。在330的IgM RAU截断将其RAU足以促进结合（生物标记物阳性）的志愿者相对于其RAU不足以促进结合（生物标记物阴性）的志愿者分离。图14. 来自健康供体的全血中的抗β-葡聚糖抗体水平和C4a生产的关联。用来自各个健康供体的IMPRIME PGG（10 μg/ml）刺激30分钟的WB培养物中的C4a量在Y轴中作为超过柠檬酸盐对照的倍数变化而呈现。在X轴呈现了关于每个组的平均倍数变化+ SEM。具有IgG RAU >235的8/10个体（80%）和具有IgG RAU <235的0/7个体证实对于IMPRIME PGG >1.5倍的C4a生产，支持高RAU和更大的补体活化之间的显著关联（**p=0.0069）。图15. 来自健康供体的全血中的抗β-葡聚糖抗体水平和C5a生产的关联。用来自各个健康供体的IMPRIME PGG（10 μg/ml）刺激30分钟的WB培养物中的C5a量在Y轴中作为超过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种方法，其包括：从受试者中获得生物样品；与参考标准相比较就生物标记物抗β‑葡聚糖抗体分析所述样品；计算所述样品中关于抗β‑葡聚糖抗体的相对抗体单位（RAU）值；和如果所述RAU值大于关于所述生物标记物抗β‑葡聚糖抗体的预定RAU值，则将所述受试者鉴定为生物标记物阳性的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.05 US 61/912,275;2014.05.30 US 62/005,3351.一种方法，其包括：从受试者中获得生物样品；与参考标准相比较就生物标记物抗β-葡聚糖抗体分析所述样品；计算所述样品中关于抗β-葡聚糖抗体的相对抗体单位（RAU）值；和如果所述RAU值大于关于所述生物标记物抗β-葡聚糖抗体的预定RAU值，则将所述受试者鉴定为生物标记物阳性的。2.一种方法，其包括：从受试者中获得生物样品；与参考标准相比较就生物标记物抗β-葡聚糖抗体分析所述样品；和如果所述样品含有的抗β-葡聚糖抗体的量大于关于生物标记物抗β-葡聚糖抗体的预定截断值（其将生物标记物阳性受试者与生物标记物阴性受试者分开），则将所述受试者鉴定为生物标记物阳性的。3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述生物标记物抗β-葡聚糖抗体包含IgG。4.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：N波斯，MA安东尼萨米，KB戈登，R沃尔什，ME丹尼尔森，P梅莫尼斯，
申请(专利权)人：生物治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US