使用Luterial的形态特征用于诊断疾病的方法技术

本发明专利技术涉及使用存在于血液中的Luterial的形态特征用于疾病诊断的方法。根据本发明专利技术，Luterial的形态特征如数目、大小或形状，及其根据疾病(特别是癌症)种类和进展的运动(纳米追踪速度)变化可通过观察和测量血液中Luterial的特性有效确定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及使用存在于从患者获得的体液包括血液中的Luterial的形态特征用于疾病诊断的方法。技术背景过去将血液中的微材料如细胞外小泡等(下文统称为EV)识别为不具有特定功能的材料。然而，积累的证据表明EV具有多种生物功能。例如，已报道源自血小板的EV经由蛋白(例如CD154、RANTES、PF-4)在小泡表面的选择性表达刺激特定细胞(Thromb.Haemost.(1999)82:794；J.Biol.Chem.(1999)274:7545)，且已显示来自血小板衍生的EV的生物活性脂质(例如HTET、花生四烯酸)对其靶细胞具有一定作用(J.Biol.Chem.(2001)276:19672；Cardiovasc.Res.(2001)49(5):88)。总之，存在于生物样品中的EV的具体特性(例如大小、表面抗原、来源细胞的确定或有效载荷(payload))可为疾病的诊断、预后或治疗提供信息，且因此已经充分认识到对于鉴定能够应用于检测和治疗疾病的生物指数的需求。同时，癌症是无法治愈的疾病，目前其在大多工业化国家均为死亡的第一原因。癌症治愈率仍很低，且由于癌症的死亡数目持续增加和由此家庭负担和国家医疗费用负担也已显著增加。癌症是其中细胞无限增殖且影响正常细胞功能的疾病。其代表性实例包括肺癌、胃癌(GC)、乳腺癌(BRC)和结直肠癌(CRC)。然而，癌症基本上可在任何组织中生成。过去，基于由癌细胞生长引起的生物组织的外部变化诊断癌症，但最近，已尝试使用存在于生物组织或细胞如血液中的痕量的生物分子、二醇链、DNA等诊断和检测癌症。然而，最常使用的用于诊断癌症的方法是经由通过活检获得的组织样品的使用或影像的使用。其中，生物活检具有在患者中引起剧烈疼痛、需要很高的花费且诊断癌症需要很长时间的缺点。此外，在患者实际上患有癌症的情况中，在活检过程中存在诱导癌症转移的风险，且在组织样品通过活检可能未获得的情况中，不可能在疑似组织样品通过手术操作取出之前诊断疾病。在使用影像的情况中，基于X-射线图像、使用具有附着了靶向疾病的材料的造影剂获得的核磁共振(NMR)图像等诊断癌症。然而，该类诊断的缺点是取决于临床医师或医生阅读影像的熟练度存在错误诊断的可能性，且其精确度显著依赖于获得影像的设备的精确性。此外，即使在最精确设备的情况中，检测具有数mm或更小尺寸的肿瘤很难，使得难于在早期检测肿瘤。此外，在该过程中由于患者或具有风险的人暴露于可能生成基因突变的高能电磁波，可诱导另一疾病。另一缺点是诊断患者的影像数目可容忍由于该暴露风险受到限制。由于用于诊断癌症的活检伴随长时间、花费、不适、疼痛等，对能够显著减少进行不必要活检的患者的数目并在早期精确诊断癌症的方法有很大需求。在这方面，本专利技术的专利技术人发现可通过观察Luterial(其为存在于患者体液的一类纳米颗粒)的形态特征诊断和预测疾病，由此完成本专利技术。公开内容本专利技术的目的是提供一种使用存在于患者体液中的Luterial的形态特征用于诊断疾病的方法。一方面，本专利技术提供为诊断和预后预测疾病提供信息的方法，其经由：通过显微术测量选自如下的至少一种标准：存在于患者体液中的Luterial的数目、大小(直径和面积)、形状、膜(例如筋膜、涂层、薄膜等)形成和纳米追踪速度；并b)将从步骤a)测量或确认的结果与正常人Luterial、正常Luterial或红细胞的那些进行比较。本专利技术还提供为诊断疾病和预测疾病预后提供信息的方法，其经由：a)使用电子显微术鉴定存在于患者体液中的Luterial的形状；b)根据单形状(single shape)、融合形状(fused shape)、多重融合形状(multi-fused shape)和其中膜破裂的融合形状的类别中的形状对Luterial进行分类；和c)基于来自步骤b)的分类确定疾病的阶段。另一方面，本专利技术提供用于诊断疾病和预测疾病预后的方法，其经由：a)通过显微术测量来自如下的至少一种标准：患者的体液中存在的Luterial的数目、大小(直径或面积)、形状、膜(例如筋膜(fascia)、涂层(coat)、薄膜(film)等)形成和纳米追踪(nano-tracking)速度；并b)将从步骤a)测量或确认的结果与正常人的Luterial、正常Luterial或红细胞的那些进行比较。本专利技术还提供用于诊断和预后预测疾病的方法，其经由：a)使用电子显微术鉴定存在于患者体液中的Luterial的形状；b)根据单形状、融合形状、多重融合形状和其中膜破裂的融合形状的类别中的形状对Luterial进行分类；和c)基于来自步骤b)的分类确定疾病的阶段。本专利技术其他特征和实施方案由如下详细说明和所附的权利要求将变得显而易见。附图简述图1示意性地说明Luterial的生命周期。图2A是源自末期非小细胞肺癌患者血液的Luterial的照片，使用共聚焦激光扫描显微镜拍摄，图2B是源自末期非小细胞肺癌患者血液的Luterial的用罗丹明123荧光染色后获得的共聚焦激光扫描显微镜照片，且图2C是源自末期非小细胞肺癌患者血液的Luterial的照片，使用电子显微镜拍摄。图3展示源自血液的Luterial的照片，使用电子显微镜拍摄并通过直径排列(从100至1000nm或更多)。图4A是正常人血液中的Luterial的照片(步骤1)，使用暗视野显微镜拍摄；图4B是正常人血液的Luterial的照片(步骤2)，使用暗视野显微镜拍摄；图4C是正常人血液的Luterial的照片(步骤3)，使用暗视野显微镜拍摄；图4D是具有染色体甲基化异常的患者血液的Luterial的照片(步骤4)，使用暗视野显微镜拍摄；图4E是具有基因突变的患者血液的Luterial的照片(步骤5)，使用暗视野显微镜拍摄；图4F是具有基因突变的患者血液的Luterial的照片(步骤6)，使用暗视野显微镜拍摄；图4G是具有肿瘤相关基因突变的患者血液的Luterial的照片(步骤7)，使用暗视野显微镜拍摄；图4H是具有肿瘤相关基因复合突变的患者血液的Luterial的照片(步骤8)，使用暗视野显微镜拍摄；且图4I是源自末期癌症患者血液的Luterial的照片(步骤9)，使用暗视野显微镜拍摄。图5是团状Luterial的照片，使用暗视野显微镜拍摄。图6是棒状Luterial的照片，使用暗视野显微镜拍摄。图7A-7E是源自肺癌患者的Luterial的照片，使用暗视野显微镜拍摄(图7A:早期；图7B-7E:2或3期)。图8A-8E是源自乳腺癌患者的Luterial的照片，使用暗视野显微镜拍摄(图8A/8B：早期；图8C/8D：中期；图8E：淋巴、腹膜和心包转移)。图9A-9D是源自胰腺癌患者的Luterial的照片，使用暗视野显微镜拍摄(图9A:早期；图9B-9D:中期).图10是源自具有骨/肺转移的胆总管癌患者的Luterial的照片，使用共聚焦激光扫描显微镜拍摄。图11是源自胸膜间皮瘤患者的Luterial的照片，使用暗视野显微镜拍摄。图12是源自状腺癌患者(中期)的Luterial的照片，使用暗视野显微镜拍摄。图13A和13B是源自卵巢癌患者的Luterial的照片，使用暗视野显微镜拍摄(图13A/13本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种为疾病的诊断和预后提供信息的方法，其包括：a)通过显微术测量来自如下的至少一个标准：患者体液中存在的Luterial的数目、大小(直径或面积)、形状、涂层(例如筋膜、涂层、薄膜等)形成和纳米追踪速度；并b)将从步骤a)测量或确认的结果与正常人的Luterial、正常Luterial或红细胞的那些进行比较。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.07.12 KR 10-2013-00820601.一种为疾病的诊断和预后提供信息的方法，其包括：a)通过显微术测量来自如下的至少一个标准：患者体液中存在的Luterial的数目、大小(直径或面积)、形状、涂层(例如筋膜、涂层、薄膜等)形成和纳米追踪速度；并b)将从步骤a)测量或确认的结果与正常人的Luterial、正常Luterial或红细胞的那些进行比较。2.根据权利要求1的方法，其中所述体液是血液。3.根据权利要求1的方法，其中所述步骤a)为来自使用一种或多种选自下组的荧光染料对Luterial阳性染色的测量或确认：罗丹明123(Rhodamine123)、Mitotracker(线粒体荧光探针)，吖啶橙(Acridine Orange)、DAPI和詹纳斯绿B(Janus Green B)。4.根据权利要求1的方法，其中所述Luterial通过过程获得，所述过程包括：从血液分离血清；从分离的血清分离不穿过具有100nm-2mm直径范围的多种孔径的过滤器的沉淀；和洗涤分离的沉淀。5.根据权利要求1-4任一项的方法，其中所述步骤b)包括如果Luterial的观察到的长直径为红细胞的8-30倍大；或Luterial观察到的面积为红细胞的8-30倍大，则确定患者疑似患有癌症。6.根据权利要求1-4任一项的方法，其中所述步骤b)包括如果Luterial的观察到的数目少于正常人中Luterial数目的20％，且如果Luterial的观察到的长直径为20μm或更长，则确定患者疑似患有癌症。7.根据权利要求1-4任一项的方法，其中所述步骤b)包括如果外涂层形成于所述Luterial周围，则确定患者疑似患有癌症。8.根据权利要求1的方法，其中所述Luterial的形状选自下组：正常状、其中所述Luterial具有在其外部形成的鞭毛样结构的鞭毛状、团装、棒状和复合形状。9.根据权利要求8的方法，其中所述正常状Luterial具有1:1～3:1的长直径和短直径间比例，所述团状Luterial具有3:1～5:1的长直径和短直径间比例，所述棒状Luterial具有5:1～12:1的长直径和短直径间比例，所述复合形状的Luterial具有棒状、团状的融合形式，或棒状和团状的组合。10.根据权利要求8或9的方法，其中所述步骤b)包括(...

【专利技术属性】
技术研发人员：权宁娥，崔元哲，崔硕训，崔彰训，权圣弼，全晛廷，
申请(专利权)人：权宁娥，崔元哲，崔硕训，崔彰训，
类型：发明
国别省市：韩国;KR