脑胶质瘤靶向量子点及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属纳米生物材料领域，涉及脑胶质瘤靶向量子点及其制备方法和在肿瘤检测中的应用，本发明专利技术采用CdTe/CdS近红外量子点为显像材料，与脑胶质瘤瘤靶向化合物B09结合，制成能够特异性结合癌细胞并荧光成像的荧光探针。本发明专利技术利用量子点在生物体内具有良好的生物相容性，能够随循环系统运行，制得靶向量子点对癌细胞进行荧光成像，并将进一步检测在动物模型的肿瘤转移部位与肿瘤细胞结合，激发后发射荧光，使肿瘤细胞显像，从而达到肿瘤检测的目的。本发明专利技术的靶向量子点基于其生物体毒性较小，具有潜在的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于纳米生物材料领域，涉及脑胶质瘤靶向量子点及其制备方法和在肿瘤检测中的应用，尤其涉及一种脑胶质瘤荧光探针及其制备方法和在脑胶质瘤细胞荧光成像中的应用。
技术介绍
恶性脑胶质瘤已经成为影响人类健康的脑部重大疾病之一，据统计报道，其具有很高的死亡率，成人恶性脑胶质瘤的5年生存率低于5％，但目前尚无有效治愈的办法。对于恶性脑胶质瘤，传统的治疗方法为手术切除肿瘤后再采用抗肿瘤药物进行化疗。然而，手术切除风险很大，且临床实践脑胶质瘤手术中的清扫均是“盲目”进行的，并不能根据病人的个体化差异，明确地对转移肿瘤细胞进行清除。因而肿瘤细胞的追踪显像成为了手术的关键。鉴于上述临床实践中存在的问题，对探索一种能够在人体内追踪标记脑胶质瘤细胞的标记探针提出了迫切的需求。现有技术对癌细胞的显像研究中使用较多的显像材料有传统的有机染料和放射性同位素等，但是传统的生物活体染料(如2％专利蓝染料、1％异硫蓝染料等)或放射性同位素(如99m锝标记的锡胶体或硫胶体等)在活体肿瘤显像应用中都存在着很大的缺陷，如在标记活体淋巴结时颜色很难辨别、一旦染料外渗则很难看清染色的淋巴结、有较高的假阴性率等；而放射性同位素因其存在穿透效应(shine-through effect)，可导致发光淋巴结与同位素注射处组织互相混淆，且同位素对医生和病人均存在放射性损害。纳米晶体荧光标记材料量子点又称半导体量子点或半导体纳米微晶体，其具有独特的光学特性。斯托克位移(Stoke′s shift)为激发波长和发射波长峰值的差值，斯托克位移较大可以避免发射谱与激发谱的重叠，从而提高在免疫荧光检测的灵敏度。有机荧光染料斯托克位移较小，检测时发射光易与激发光光谱范围发生重叠，导致检测假阳性率增高，而近红外量子点光谱范围窄(约为有机染料光谱1/3)，增加了其斯托克位移(约为200-300nm)，提高了在应用过程中的灵敏度。有机染料发射光谱通常位于450-550nm之间，在此范围内，生物医学标本如胶 原蛋白、卟啉、黄素等通常有很强的自发荧光背景，所以标记荧光通常被强的组织自发荧光所淹没，在生物荧光成像的应用中有很多限制。有研究开始关注近红外量子点在动物体内的分布，将单纯的量子点注射后观察其动物体内循环系统中的移行和各器官中的分布，但迄今尚未见涉及脑胶质瘤领域有关近红外量子点修饰后其对肿瘤细胞的追踪和显像的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种脑胶质瘤靶向量子点及其制备方法，具体涉及一种能够靶向脑胶质瘤细胞发生的靶向量子点及其制备方法。尤其涉及一种脑胶质瘤免疫荧光探针及其制备方法。本专利技术的进一步目的是提供所述的脑胶质瘤靶向量子点在肿瘤检测中的应用，尤其是用于脑胶质瘤动物模型中肿瘤细胞的显像。本专利技术提供了能够与脑胶质瘤细胞发生结合并对其进行荧光成像的靶向量子点，对脑胶质瘤细胞在体外成像的能力进行了描述，结果显示其对脑胶质瘤细胞免疫荧光显像的效果良好，具有在脑胶质瘤动物模型中进行脑胶质瘤细胞显像的前景。更具体的，本专利技术采用CdTe/CdS近红外量子点为显像材料，与脑胶质瘤靶向化合物B09结合，制成能够特异性结合脑胶质瘤细胞并荧光成像的荧光探针。本专利技术中的脑胶质瘤靶向量子点可与脑胶质瘤细胞发生结合，通过量子点的激发荧光达到脑胶质瘤细胞免疫荧光成像的目的。更具体的，本专利技术提供了一种脑胶质瘤免疫荧光探针，其通过下述方法和步骤制备。1)制备近红外CdTe/CdS量子点称取Cd2Ac2·2H2O(1.999g，0.0075mol)于20mL的样品瓶中，加入15mL超纯水使其溶解。得到浓度为0.0005mol/mL Cd溶液。称取KTeO3(0.078g，0.0003mol)于20mL的样品瓶中，加入15mL超纯水使其溶解。得到浓度为0.00002mol/mL Te溶液。将三口烧瓶置于多功能搅拌器上。移取1mL Cd2+溶液加入两口烧瓶中，再加入98mL超纯水，搅拌至均匀。依次加入74μl MPA、0.01g二水合柠檬酸钠 搅拌至溶解，溶液呈乳白色。用1M氧氧化钠溶液调节pH值，溶液由浑浊变澄清，使其pH值为11.2左右。最后依次加入亚碲酸钾溶液1mL、硼氧化钠0.1g，搅拌均匀。加上冷凝管，加热冷凝回流，分别在15min、30min、1h、1.5h、2h、3h、6h、9h、12h取样。2)制备脑胶质瘤肿瘤细胞靶向量子点在CdTe/CdS量子点水溶液中加入EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)、NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)的水溶液，室温反应，使用前制备20mM EDCI，50mM NHS的PBS溶液。每毫升量子点溶液，加入50μl的EDCI/NHS原液，控制pH为7.4。在室温下搅拌混合30min。每毫升活化量子点加入5μl的0.05mol/L的B09-甲醇溶液。室温下混合反应12h。最后用pH＝7.4的PBS溶液透析除去多余的反应物。这样就得到了经过药物修饰的量子点(QD-B09)。本专利技术进行了量子点和靶向量子点的电镜下成像及光谱分析，光动力散射分析将制得的量子点和靶向量子点去离子水稀释后滴于铜网支持的碳膜上，待溶剂挥发后，电镜调至工作电压200kV工作模式stem mode进行观察，获得量子点和靶向量子点的电镜下图像。量子点和靶向量子点的稀释产物用荧光光谱仪在激发波长370nm的激发光下，以1nm为最小间隔记录400-900nm的发射光光强度制作光谱曲线。荧光寿命测定：移取CdTe/CdS量子点溶液于1cm的石英比色池中同荧光测量步骤。荧光寿命软件参数：激发波长372nm，入射与出射狭缝均为5nm，通道1024个，峰值3000。紫外-可见光分光光度计分析：移取CdTe/CdS量子点溶液于1mm的石英比色池中，紫外可见分光光度计的参数选择：读数间隔1nm，狭缝宽度1nm，扫描范围400-900nm，扫描速度中速。动态光散射法(DLS)分析：测定是采用的Malvern ZetasizerNano ZS仪进行的，仪器波长设定为633nm，入射光与散射光夹角为90°。测定前，将纳米材料用蒸馏水溶解，超声10min促其分散，所有溶剂应用0.2μm膜过滤，或过滤几次。以上检查方法结果均在说明书附图中，其中图1是B09修饰的CdTe/CdS量 子点TEM图，图2是化合物修饰前后的CdTe/CdS量子点图，图3是偶联前后化合物的量子点荧光寿命。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脑胶质瘤细胞荧光探针，其特征在于，由CdTe/CdS近红外量子点为显像材料，与脑胶质瘤靶向化合物B09接合，制成免疫荧光探针。

【技术特征摘要】
1.一种脑胶质瘤细胞荧光探针，其特征在于，由CdTe/CdS近红外量子点为显像材料，与脑胶质瘤靶向化合物B09接合，制成免疫荧光探针。2.按权利要求1所述的脑胶质瘤细胞荧光探针，其特征在于，所述的脑胶质瘤细胞B09与CdTe/CdS近红外量子点按一定比例接合。3.按权利要求1所述的脑胶质瘤细胞荧光探针制备方法，其特征是，通过下述方法和步骤：1)制备近红外CdTe/CdS量子点称取Cd2Ac2·2H2O(1.999g，0.0075mol)于20mL的样品瓶中，加入15mL超纯水使其溶解。得到浓度为0.0005mol/mL Cd溶液。称取KTe03(0.078g，0.0003mol)于20mL的样品瓶中，加入15mL超纯水使其溶解。得到浓度为0.00002mol/mL Te溶液。将三口烧瓶置于多功能搅拌器上。移取1ml Cd2+溶液加入两口烧瓶中，再加入98mL超纯水，搅拌至均匀。依次加入74μl MPA、0.01g二水合柠檬酸钠搅拌至溶解，溶液呈乳白色。用1M氧氧化钠溶液调节pH值，溶液由浑浊变澄清...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾慧慧，张蕴瀚，
申请(专利权)人：凯熙医药天津有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12