一种猪精液的冷冻和解冻方法技术

本发明专利技术公开了一种猪精液的冷冻和解冻方法，包括猪精液的冷冻方法，猪精液的解冻方法以及猪精液的检测，猪精液的冷冻方法包括以下步骤：采集种公猪精液并对其密度进行测定，稀释。将稀释后的精液静置，之后降温平衡。降温后的精液在14‑15℃的温度下离心处理。依次加入的稀释液I，稀释液II进行分装。分装好的精液开始进行冷冻，液氮冷冻保存。解冻方法如下：迅速取冷冻的猪精液，温度以50℃/min的速率从‑140℃升至‑5℃，再以3℃/min的速率从‑5℃升至5℃解冻。本发明专利技术为普及推广猪冻精在生产上的应用提供了技术。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于猪精液的冷冻保存
，具体地说，涉及一种猪精液的冷冻和解冻方法。
技术介绍
猪的人工授精(artificial insemination，AI)技术，即利用人工方法采取公猪的精液，对其进行品质检查、稀释保存等处理，再用器械将精液输送到发情母猪生殖器官内，使其受孕。人工授精可提高公猪的配种效能，与本交相比，人工授精时一头优秀种公猪每年配种的母猪可提高10～20倍。由于良种公猪利用率的提高，加速了品种改良，可给养猪生产和猪的育种带来巨大的效益；减少公猪的饲养量，节省了饲养管理费用；可克服自然交配的难点，如公、母猪体格相差太大和某些生殖道异常等困难；可扩大优秀公猪在时间和地域上的利用率，为优秀种猪精液的交流提供了方便；此外，人工授精还可以有效防止公、母猪多种疫病接触传染的可能。正是由于人工授精在养猪生产中具有很多优越性，使得这一技术在许多养猪发达国家得到大力推广。然而，国内外在猪的人工授精中所用的精液多为常温(15～20℃)液态保存精液，配种时的精子活力较高(0.6～0.8)、配种母猪的受胎率较高(75％～85％)，但液态精液一是不能长期保存(保存期一般在3～5天)，二是不便于远距离运输，因此，无法充分发挥优秀种公猪尤其是顶级种公猪的种用价值。近年来，猪人工授精的研究重点逐渐转移到冷冻精液上。猪冷冻精液技术是指利用干冰(-79℃)、液氮(-196℃)等作冷却源，将精液特殊处理后冷冻，保存在超低温(-79℃或-196℃)的状态下，达到长期保存的目的，并且解冻后输精达到较高受胎率的技术。中国是世界上第一养猪和猪肉生产大国，近几年来，每年生猪存栏4.5～4.7亿头，其中，能繁母猪存栏0.48～0.51亿头，生猪出栏6.5～7.1亿头，猪肉总产4800～5400万吨，约占世界养猪总产的一半；尤其是近年来，我国的养猪业正在从传统粗放散养方式向规模化集约化饲养方式的转型，长白、大白、杜洛克等快长瘦肉型引进猪种已经成为规模化猪场饲养的主流品种，以常温液态保存精液技术为主导的猪人工授精技术已经被大面积的推广和应用到养猪生产实践中。但在我国的养猪生产中，对于冷冻精液的研究与应用所开展的工作还很欠缺，因此，深入开展此项技术的研究与应用，不仅对于进一步发挥人工授精技术的优势具有重要意义，而且对于开展种猪的遗传改良以及针对一些濒危特有地方猪种资源的保存等方面也具有十分重要的战略意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述技术，提供一种可有效提高猪精液冷冻保存的质量和效果的猪精液的冷冻和解冻方法。为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种猪精液的冷冻和解冻方法，包括猪精液的冷冻方法，猪精液的解冻方法以及猪精液的检测，其特征在于，所述猪精液的冷冻方法包括以下步骤：步骤一：采集优秀的种公猪精液并对其密度进行测定，然后在用稀释剂稀释该精液，稀释精液的温度条件为37.5-40℃，稀释至最终活精子数与公猪精液的比例为0.50-0.51∶1。步骤二：将步骤一中稀释后的精液在17.5-19.5℃的室温环境下静置0.5-1h。步骤三：将步骤二中的精液移入14-15℃的温度条件下降温平衡3h。步骤四：取步骤三中的降温后的精液800g在14-15℃的温度下离心处理。步骤五：先加入无甘油的稀释液I，然后使温度缓慢降至5℃平衡2h后，再加入含甘油的稀释液II，然后用细管进行分装。步骤六：取步骤五中分装好的精液开始进行冷冻，精液所处环境初始温度为5℃，之后以3℃/min的速率从5℃降到-5℃，再于-5℃条件下保持1min结晶，然后以50℃/min的速率从-5℃降到-140℃，最后将精液放入广口液氮罐内与液氮面距离5cm处熏蒸后投入液氮保存。进一步的，所述猪精液的解冻方法如下：迅速取出于液氮中保存的冷冻的猪精液，温度以50℃/min的速率从-140℃升至-5℃，再以3℃/min的速率从-5℃升至5℃，解冻即可。进一步的，所述猪精液的检测：取解冻后的猪精液，通过电子生物显微镜和计数板对其精子活力、畸形率、有效精子数进行检测。优选地，所述猪精液冷冻方法步骤一中所述的稀释剂配方为D-葡萄糖37.15g、柠檬酸三钠6.00g、EDTA钠盐1.25g、碳酸氢钠1.25g、氯化钾0.75g、青霉素钠0.60g、硫酸链霉素1.00g或D-葡萄糖60.00g、柠檬酸三钠3.70g、EDTA钠盐3.70g、碳酸氢钠1.20g、硫酸链霉素0.50g、青霉素钠50万单位。优选地，所述猪精液冷冻方法步骤五中的稀释液I和稀释液II的配方为：D-葡萄糖11.5g、柠檬酸三钠11.65g、EDTA钠盐2.35g、磷酸二氢钾1.75g、硫酸链霉素0.5g、聚乙烯醇(PVP.Type11)1.0g、三羧甲基氨基甲醇(Tris)5.5g、柠檬酸4.1g、半盘氨酸0.07g、OEP(氨基-钠十二烷基硫酸酯)0.4g、SDS(十二烷基硫酸钠)0.3g、PGF2a 0.5g、维生素E0.5g、GSH(谷胱甘肽)0.5g、透明质酸0.3g、N-乙酰基-D-氨基葡糖0.5g。经实验数据显示，采用本专利技术所提供的方法冷冻解冻猪精子后，精子在冷冻、解冻后的活力达到0.5以上，畸形等异常精子率不高于19％，发情母猪的配种受胎率达到66％以上，平均每头母猪正常产仔数为9头，达到了生产应用的技术水平。经生产实践显示，该猪精液的冷冻和解冻方法可以使精液得到长期保存，使精液的使用不受时间和地域的限制，不受该公猪死亡、损失、采精间隔或繁殖不育的限制，有效提高了公猪的利用率，充分发挥优良公猪的作用，降低活体保种的成本，防止优良基因的漂变和传染病的发生，利于深入开展猪的联合育种工作，获得更大的遗传进展，在保护地方优良品种与加快品种改良等方面具有重要的研究价值和广泛的应用前景。具体实施方式下面结合具体实施例，对本专利技术做进一步详细的阐述，但本专利技术的实施方法并不局限于实施例所表示的范围，该实施例仅限于说明本专利技术，而并非用于限制本专利技术的范围。一种猪精液的冷冻和解冻方法，包括猪精液的冷冻方法，猪精液的解冻方法以及猪精液的检测，其猪精液的冷冻方法包括以下步骤：步骤一：采集优秀的种公猪精液并对其密度进行测定，然后在用稀释剂稀释该精液，稀释精液的温度条件为37.5-40℃，稀释至最终活精子数与公猪精液的比例为0.50-0.51∶1。步骤二：将步骤一中稀释后的精液在17.5-19.5℃的室温环境下静置0.5-1h。步骤三：将步骤二中的精液移入14-15℃的温度条件下降温平衡3h。步骤四：取步骤三中的降温后的精液800g在14-15℃的温度下离心处理。步骤五：先加入稀释液I，然后使温度缓慢降至5℃平衡2h后，再加入含甘油的稀释液II，然后用细管进行分装。步骤六：取步骤五中分装好的精液开始进行冷冻，精液所处环境初始温度为5℃，之后以3℃/min的速率从5℃降到-5℃，再于-5℃条件下保持1min结晶，然后以50℃/min的速率从-5℃降到-140℃，最后将精液放入广口液氮罐内与液氮面距离5cm处熏蒸后投入液氮保存。猪精液的解冻方法如下：迅速取出于液氮中保存的冷冻的猪精液，温度以50℃/min的速率从-140℃升至-5℃，再以3℃/min的速率从-5℃升至5℃，解冻即可。猪精液的检测：取解冻后的猪精液，通本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪精液的冷冻和解冻方法，包括猪精液的冷冻方法，猪精液的解冻方法以及猪精液的检测，其特征在于，所述猪精液的冷冻方法包括以下步骤：步骤一：采集优秀的种公猪精液并对其密度进行测定，然后在用稀释剂稀释该精液，稀释精液的温度条件为37.5‑40℃，稀释至最终活精子数与公猪精液的比例为0.50‑0.51∶1。步骤二：将步骤一中稀释后的精液在17.5‑19.5℃的室温环境下静置0.5‑1h。步骤三：将步骤二中的精液移入14‑15℃的温度条件下降温平衡3h。步骤四：取步骤三中的降温后的精液800g在14‑15℃的温度下离心处理。步骤五：先加入无甘油的稀释液I，然后使温度缓慢降至5℃平衡2h后，再加入含甘油的稀释液II，然后用细管进行分装。步骤六：取步骤五中分装好的精液开始进行冷冻，精液所处环境初始温度为5℃，之后以3℃/min的速率从5℃降到‑5℃，再于‑5℃条件下保持1min结晶，然后以50℃/min的速率从‑5℃降到‑140℃，最后将精液放入广口液氮罐内与液氮面距离5cm处熏蒸后投入液氮保存。

【技术特征摘要】
1.一种猪精液的冷冻和解冻方法，包括猪精液的冷冻方法，猪精液的解冻方法以及猪精液的检测，其特征在于，所述猪精液的冷冻方法包括以下步骤：步骤一：采集优秀的种公猪精液并对其密度进行测定，然后在用稀释剂稀释该精液，稀释精液的温度条件为37.5-40℃，稀释至最终活精子数与公猪精液的比例为0.50-0.51∶1。步骤二：将步骤一中稀释后的精液在17.5-19.5℃的室温环境下静置0.5-1h。步骤三：将步骤二中的精液移入14-15℃的温度条件下降温平衡3h。步骤四：取步骤三中的降温后的精液800g在14-15℃的温度下离心处理。步骤五：先加入无甘油的稀释液I，然后使温度缓慢降至5℃平衡2h后，再加入含甘油的稀释液II，然后用细管进行分装。步骤六：取步骤五中分装好的精液开始进行冷冻，精液所处环境初始温度为5℃，之后以3℃/min的速率从5℃降到-5℃，再于-5℃条件下保持1min结晶，然后以50℃/min的速率从-5℃降到-140℃，最后将精液放入广口液氮罐内与液氮面距离5cm处熏蒸后投入液氮保存。2.根据权利要求1所述的一种猪精液的冷冻和解冻方法，其特征在于，所述猪精液的解冻方法如下：迅速取出于液氮中保存的冷冻的猪精液，温度以50℃/min的速率从-140℃升至-5℃，再以3℃/min的速率从-5℃升至5℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴衍岭，陈宪彬，刘晶，乔富兴，彭兴泉，袁震，侯磊，
申请(专利权)人：山东鑫基牧业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37