一种Wnt信号通路中β-catenin基因突变检测试剂及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于肽核酸探针的Wnt信号通路中β‑catenin基因突变检测的试剂、PCR检测方法及应用，属于基础生物研究及生物检测技术领域。检测试剂包括引物、肽核酸荧光探针及野生型互补的肽核酸序列，正向引物如序列表中SEQ ID NO.1、NO.3；反向引物如序列表中SEQ ID NO.2、NO.4；肽核酸荧光探针如序列表中SEQ ID NO.5、NO.6；野生型互补肽核酸序列如序列表中SEQ ID NO.7、NO.8。本发明专利技术从转录水平能快速发现Wnt信号通路中β‑catenin基因突变情况，具有特异性强、灵敏度高等显著优点，为抗癌药物筛选，新靶向药物探讨、基础科学研究提供工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学及临床分子诊断
，特别是涉及一种基于肽核酸(PNA)探针的Wnt信号通路中β-catenin基因突变检测试剂、PCR检测方法及应用。
技术介绍
Wnt信号通路广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物中，是一类在物种进化过程中高度保守的信号通路。Wnt信号在动物胚胎的早期发育、器官形成、组织再生和其它生理过程中，具有至关重要的作用。如果这条信号通路中的关键蛋白发生突变或者异常表达，导致信号异常活化，就可能诱导癌症的发生。Wnt信号通路包括经典的Wnt信号通路与非经典的Wnt信号通路，在经典通路即Wnt-β-catenin信号通路中，Wnt因子通过激活细胞膜上的Frizzle/LRP5/6协同受体后抑制细胞内游离β-catenin蛋白的磷酸化和降解，细胞质中的β-catenin蛋白水平升高后将发生β-catenin蛋白的核移位，导致细胞核中β-catenin蛋白升高，胞核中β-catenin蛋白能够联合Pygo2、Bcl-9以及FoxM1蛋白共同与TCF/LEF-1转录因子家族形成复合体并激活Wnt信号通路下游靶基因的转录激活。目前越来越多的研究已经发现，在很多肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于Wnt信号通路中核心的信号分子β‑catenin基因突变检测的试剂，其特征在于，包括用于阻断野生型β‑catenin基因扩增的野生型PNA序列、用于特异性扩增R225C、V600G突变型β‑catenin基因序列的一组引物对及突变型PNA荧光探针：所述检测β‑catenin基因R225C突变正向引物如序列表中SEQ ID NO.1；所述检测β‑catenin基因R225C突变反向引物如序列表中SEQ ID NO.2；所述检测β‑catenin基因V600G突变正向引物如序列表中SEQ ID NO.3；所述检测β‑catenin基因V600G突变反向引物如序列表中SEQ ID NO.4；...

【技术特征摘要】
1.一种用于Wnt信号通路中核心的信号分子β-catenin基因突变检测的试剂，其特征在于，包括用于阻断野生型β-catenin基因扩增的野生型PNA序列、用于特异性扩增R225C、V600G突变型β-catenin基因序列的一组引物对及突变型PNA荧光探针：所述检测β-catenin基因R225C突变正向引物如序列表中SEQ ID NO.1；所述检测β-catenin基因R225C突变反向引物如序列表中SEQ ID NO.2；所述检测β-catenin基因V600G突变正向引物如序列表中SEQ ID NO.3；所述检测β-catenin基因V600G突变反向引物如序列表中SEQ ID NO.4；所述检测β-catenin基因R225C突变型PNA荧光探针如序列表中SEQ ID NO.5；所述检测β-catenin基因V600G突变型PNA荧光探针如序列表中SEQ ID NO.6；所述特异性结合包含β-catenin基因225密码子野生型PNA序列如序列表中SEQ ID NO.7；所述特异性结合包含β-catenin基因600密码子野生型PNA序列如序列表中SEQ ID NO.8；修饰所述5'端的所述荧光报告基团为：FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5，修饰所述3'端的淬灭基团为：TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL。2.根据权利要求1所述的用于Wnt信号通路中核心的信号分子β-catenin基因突变检测的试剂，其特征在于，所述的检测试剂还包括PCR反应液、225密码子和600密码子突变型参考品、225密码子和600密码子野生型参考品；其中PCR反应液包括：DEPC水、具有5'→3'外切活性的DNA聚合酶、dNTPs、10×PCR缓冲液、RN...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐景峰，周策凡，陈兴珍，张毅，秦文英，
申请(专利权)人：湖北工业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42