RASL12基因作为肺鳞癌转移的诊治靶标制造技术

本发明专利技术公开了RASL12基因及其表达产物可以作为肺鳞癌转移诊治的分子标志物。通过检测受试者肺组织中RASL12基因及其表达产物的含量可以判断受试者是否患有肺鳞癌转移或者诊断受试者是否存在患有肺鳞癌的风险。本发明专利技术通过研究体外培养的肺鳞癌细胞发现RASL12基因表达可以抑制肺鳞癌细胞的粘附、转移和侵袭，上述研究结果表明RASL12基因是治疗肺鳞癌转移的一个潜在的药物靶点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体地涉及RASL12基因在肺鳞癌转移的诊断、治疗中的用途。
技术介绍
肿瘤是目前世界上最主要的死亡原因之一，而90％以上的肿瘤患者死于肿瘤转移。大约有1/3的乳腺癌、结直肠癌、宫颈癌、口咽癌及1/4的食管癌、肺癌、胰腺癌、膀肤癌和胃癌患者手术时已经出现淋巴结转移癌，从而影响患者的治疗和预后。而随着城市空气污染的加重，肺癌己是发达国家和城市的重要致死肿瘤之一。到目前为止，对广泛转移或者转移晚期的癌症患者的治疗仍无明显进展。因而，探讨肿瘤转移相关分子机理，筛选肿瘤转移相关标志物，为选择抑制转移治疗靶点提供可靠的病理依据已成为肿瘤病理研究者面临的巨大挑战。肺癌病理学分型主要包括鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌和大细胞癌四种，而在我国鳞状细胞癌是主要组织学类型。尽管目前对肺鳞癌的发生、发展过程中的遗传学改变己有所揭示，对早期诊断、早期治疗也有了一定的研究，然而从临床资料来看，肿瘤转移仍然是肺鳞状细胞癌的主要死亡原因，因而揭示肺癌转移相关基因，对肺癌转移进行预测及选择合理的治疗方案将有利于改善肺癌患者的预后和提高患者的生存时间。肿瘤的转移是指恶性肿瘤细胞脱离原发灶，通过各种转移方式到达继发组织或器官得以继续增殖生长，形成与原发灶相同性质的继发肿瘤的全过程。肿瘤的侵袭与转移主要包括以下基本病理过程：早期原发灶生长、肿瘤血管形成、肿瘤细胞脱落并侵入基质、肿瘤细胞进入脉管系统、瘤栓形成、继发组织器官定位生长及转移灶继续扩散。另外转移是肿瘤细胞高度克隆选择的过程，在原发肿瘤中有不同异质性的细胞亚群体，这些不同亚群的瘤细胞在肿瘤发展过程中侵袭能力r>
和转移能力并不一致，且并非所有的瘤细胞都有侵袭和转移的能力，其中仅有少数肿瘤细胞具有转移潜能，己有实验证明转移性肿瘤细胞在亲代肿瘤细胞群中早已存在，并且原发肿瘤基因变化决定了其转移的倾向或潜能。肿瘤转移是一个极其复杂的多基因参与、多基因调控的过程，涉及到一系列与肿瘤转移相关的基因结构和功能异常，具体表现在一些癌基因的激活，而一些抑癌基因可能被抑制，或者一些抑癌基因的缺失、失活等等，这些遗传学改变的结果最终导致肿瘤的转移。识别这些基因对揭示肿瘤转移的本质具有重大的意义，而且具有广泛的临床应用价值，攻克人类肿瘤的转移将是肿瘤研究史上一个巨大的里程碑。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于肺鳞癌转移早期诊断的分子标志物。使用基因标志物来诊断肺鳞癌转移具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测RASL12基因表达的产品在制备诊断肺鳞癌转移的工具中的应用。进一步，所述检测RASL12基因表达的产品包括检测RASL12基因mRNA水平的产品、和/或检测RASL12蛋白水平的产品。进一步，所述检测RASL12基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片检测RASL12基因及其表达产物的表达水平以诊断肺鳞癌转移的产品。进一步，所述用RT-PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增RASL12基因的引物；所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增RASL12基因的引物；所述用免疫检测诊断肺鳞癌转移的产品包括：与RASL12蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断肺鳞癌转移的产品包括：与RASL12基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断肺鳞癌转移的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与RASL12蛋白特异性结合的抗体，
基因芯片包括与RASL12基因的核酸序列杂交的探针。所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括的一对特异扩增RASL12基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。所述检测RASL12基因表达的产品可以是检测RASL12基因表达的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。所述诊断肺鳞癌转移的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断肺鳞癌转移的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知RASL12基因的异常与肺鳞癌转移相关也属于RASL12基因的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。本专利技术还提供了一种诊断肺鳞癌转移的工具，所述工具包括检测RASL12基因表达的试剂；所述试剂包括检测RASL12基因mRNA的引物和/或探针、检测RASL12蛋白的抗体。所述工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测RASL12基因转录水平的针对RASL12基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的RASL12蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括RASL12基因在内的多个基因(例如，与肺鳞癌转移相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括RASL12蛋白在内的多个蛋白质(例如与肺鳞癌转移相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与肺鳞癌转移的标志物同时检测，可大大提高肺鳞癌转移诊断的准确率。其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测RASL12基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括RASL12蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测RASL12基因表达水平过程中所需的
试剂。优选地，所述试剂包括针对RASL12基因的引物和/或探针。根据RASL12基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测RASL12基因表达水平的引物和探针。所述试纸包括检测RASL12基因表达的试剂。所述高通量测序平台包括检测RASL12基因表达的试剂。与RASL12基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。进一步，所述RASL12蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述RASL12蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等。只要所述片段能够保留与RASL12蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测RASL12基因表达的产品在制备诊断肺鳞癌转移的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测RASL12基因表达的产品在制备诊断肺鳞癌转移的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交芯片或高通量测序平台检测RASL12基因表达以诊断肺鳞癌转移的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用RT-PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增RASL12基因的引物；所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增RASL12基因的引物；所述用免疫检测诊断肺鳞癌转移的产品包括：与RASL12蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断肺鳞癌转移的产品包括：与RASL12基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断肺鳞癌转移的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与RASL12蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与RASL12基因的核酸序列杂交的探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括的一对特异扩增RASL12基因的引物如SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，边洋，李海岩，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11