【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种分子标记领域，特别是运用DNA模拟酶高效可视化鉴别三叶青真伪的方法。
技术介绍
三叶青学名三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)为葡萄科崖爬藤属多年生草本植物，别名金线吊葫芦、三叶对等，是我国南方少数省份的珍稀中药资源，以块根或全草入药。是抗肿瘤常用药物，其主要活性成份对肝癌、肺癌、血癌等细胞株具有“促凋亡作用”，也可用于治疗小儿高热惊厥、百日咳、疔疮痈疽、淋巴结结核、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎，外用治毒蛇咬伤，扁桃体炎，蜂窝织炎，跌打损伤。由于市场上三叶青的需求量逐渐增大，过度的开采和环境的恶化等原因，其野生资源濒临灭绝，已被列入“浙江省首批种质资源保护名录”。近年来三叶青药材价格飙升，在经济利益的驱使下，药材市场上出现了乌头子根、土圜儿、大青藤等多种伪品，近年来杭州等地先后出现多起患者服用混入乌头子根的含三叶青饮片中药中毒事件。目前传统的中草药材的鉴定方法有成分分析法、外部形态分析法和显微结构分析。但由于植物的根部大多形态相似且加工过后破坏原有的形态和显微结构，造成鉴定...
【技术保护点】
一种运用DNA模拟酶高效可视化鉴别三叶青真伪的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤A、三叶青真伪品DNA的提取：分别采用植物DNA提取CTAB法来提取三叶青真品和三叶青伪品的DNA；步骤B、三叶青真伪品ITS2 DNA序列的获得：通过对提取的三叶青真伪品DNA进行PCR特异性扩增以获得三叶青真伪品的ITS2 DNA序列，其中扩增所用到的引物为已经报道的被子植物的ITS2序列的通用引物，其正向引物为5’—ATGCGATACTTGGTGTGAAT—3’；反向引物为5’—GACGCTTCTCCAGACTACAAT—3’；步骤C、三叶青真伪品差异序列的获得：分别对上述三叶青真伪品I...
【技术特征摘要】
1.一种运用DNA模拟酶高效可视化鉴别三叶青真伪的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤A、三叶青真伪品DNA的提取：分别采用植物DNA提取CTAB法来提取三叶青真品和三叶青伪品的DNA；步骤B、三叶青真伪品ITS2 DNA序列的获得：通过对提取的三叶青真伪品DNA进行PCR特异性扩增以获得三叶青真伪品的ITS2 DNA序列，其中扩增所用到的引物为已经报道的被子植物的ITS2序列的通用引物，其正向引物为5’—ATGCGATACTTGGTGTGAAT—3’；反向引物为5’—GACGCTTCTCCAGACTACAAT—3’；步骤C、三叶青真伪品差异序列的获得：分别对上述三叶青真伪品ITS2 DNA序列进行测序，测序结果用DNAstar软件进行序列比对获得了三叶青真伪品差异序列，其中三叶青真品差异序列为5’—TTTTAACCAACCACGGATGCGATGTTCCAT —3’，三叶青伪品差异序列为5’—ACCCTACGCAACGCTACCGTGAGACATTTG—3’；步骤D、待测物PCR产物的获得：提取三叶青待测物的DNA，然后对该待测物的DNA序列进行PCR特异性扩增以获得待测物PCR产物，其中所用到的上游引物的核苷酸序列为：5’—AAGGGAATCCTTGTAAGTTTCTTTT— 3’，下游引物的核苷酸序列为：5’—AACATCGCATCCGTGGTTGGTTAAA —3’，所述上游引物的核苷酸序列和下游引物的核苷酸序列均是通过三叶青真伪品差异序列而设计的；步骤E、三叶青真伪鉴定：对待测物PCR产物采用链置换循环信号放大技术比色可视化来鉴定三叶青真伪，其具体包括以下步骤：1）、待测物PCR产物与DNA探针杂交：先将DNA探针用HEPES缓冲液配成100μM溶液，其中DNA探针为5’—CCCAACCCGCCCTACCCAACCTCAGCATGGAACA...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭昕，陈宸，杨瑞康，李震，邱彬，
申请(专利权)人：浙江医药高等专科学校，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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