AMPK抑制剂Compound C在制备激活坐骨神经髓鞘形成制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种AMPK抑制剂Compound C在制备激活坐骨神经髓鞘形成制剂中的应用。本发明专利技术AMPK抑制剂Compound C可有效促进外周神经髓鞘的形成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种AMPK抑制剂Compound C在制备激活坐骨神经髓鞘形成制剂中的应用。
技术介绍
AMPK(Adenosine Monophosphate-activated Protein Kinase)是细胞能量的关键传感器。该蛋白质激酶能够通过感受细胞能量状态来维持真核细胞的ATP生成和消耗的平衡，即能量稳态，它的激活有助于纠正代谢紊乱，使细胞代谢趋向生理平衡，由此成为治疗代谢紊乱和癌症的可能靶点。很多研究表明，AMPK的激活可刺激机体产生ATP，为生理活动提供能量；同时，AMPK的激活可强烈抑制蛋白及脂肪的合成，以减少ATP的消耗。髓鞘包裹在神经细胞轴突外面的一层膜，由雪旺细胞或少突胶质细胞组成，其生理作用表现为绝缘作用，防止神经电冲动从神经元轴突传递至另一神经元轴突。地震，车祸，事故等各种自然灾害或意外都有可能造成外周神经损伤，因此，在我们的日常生活中，外周神经损伤是一种常见病症。神经损伤后髓鞘的形成是神经功能得以恢复的重要保证。大量研究表明，髓鞘的主要组分为脂类及蛋白分子。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可促进外周神经髓鞘形成的AMPK 抑制剂Compound C在制备激活坐骨神经髓鞘形成制剂中的应用。本专利技术的技术解决方案是：一种AMPK抑制剂Compound C在制备激活坐骨神经髓鞘形成制剂中的应用。本专利技术AMPK抑制剂Compound C可有效促进外周神经髓鞘的形成。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。图1是羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)基因表达分析示意图。其中上方的线为实验组大鼠数据；下方的线为对照组大鼠数据。***p<0.001，Student's t test分析。图2是固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)基因表达分析示意图。其中上方的线为实验组大鼠数据；下方的线为对照组大鼠数据。***p<0.001，Student's t test分析。图3是大鼠出生后7天(P7)坐骨神经组织是p-ACC、ACC、SERBP2及HMGCR蛋白表达分析示意图。图4是对图3中的蛋白表达定量分析结果示意图。Vehicle：对照组，ComC：实验组。**p<0.01，Student's t test分析。图5是大鼠坐骨神经组织胆固醇含量测定示意图。Vehicle：对照组，ComC：实验组。*p<0.05，Student's t test分析。图6是大鼠坐骨神经组织蛋白表达分析示意图。图7是大鼠坐骨神经组织蛋白表达(图6)定量分析。*p<0.05， **p<0.01,***p<0.001,Student's t test分析。图8是大鼠坐骨神经电镜照片示意图。Vehicle：对照组，ComC：实验组。图9是大鼠坐骨髓鞘厚度分析示意图。Vehicle：对照组，ComC：实验组。*p<0.05,Student's t test分析。具体实施方式一种AMPK抑制剂Compound C在制备激活坐骨神经髓鞘形成制剂中的应用。一、实验步骤 1、动物处理 实验材料为刚出生的SD大鼠，向每只大鼠皮下注射Compound C(6-[4-[2-(4-Morpholinyl)ethoxy]phenyl]-3-phenyl-pyrazolo[1,5-a]pyrimidine)，以下简称为ComC，剂量为50mg/kg体重/天，溶剂为二甲基亚砜(DMSO)。对照大鼠注射等剂量的DMSO。在处理后的不同天数收集大鼠坐骨神经组织用于后续分析。每组实验动物6只，实验重复三次。2、坐骨神经组织胆固醇含量的测定胆固醇含量的测定利用Sigma-Aldrich的试剂盒(MAK043)进行。取10mg坐骨神经组织置于200μl匀浆液(氯仿：异丙醇：IGEPAL CA-630＝7：11：0.1)中，用组织匀浆进行匀浆，将所得匀浆液进行离心(13000rpm,10分钟)，去除不溶物质。上清有机相转移到一个 新的小管，50℃下干燥去除氯仿，并用真空干燥器将去除剩余溶剂。用胆固醇测定液(试剂盒所附)溶解干燥所得的脂类，进一步测定参照试剂盒操作步骤进行。3、坐骨神经RNA提取及基因表达检测使用Trizol试剂(Invitrogen公司产品)提取坐骨神经组织的RNA，再经cDNA合成试剂盒(Bio-Rad公司产品)转录成cDNA。用SYBR Green Supermix(Bio-Rad公司产品)来做基因表达分析，仪器为iQ5Multicolor Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad公司产品)。结果2-ΔCt方法计算mRNA水平。以18S持家基因来校准mRNA的水平。所使用的引物序列如下：18S rRNA正向引物:5’-AGT CCC TGC CCT TTG TAC ACA-3’；18S rRNA负向引物:5’-CGT TCC GAG GGC CTC ACT-3’；Hmgcr正向引物:5'-AGC TTG CCC GAA TTG TAT GTG-3'；Hmgcr负向引物:5；-TCT GTT GTG AAC CAT GTG ACT TC-3'.Srebp2正向引物:5'-GCA GCA ACG GGA CCA TTC T-3'；Srebp2负向引物:5'-CCC CAT GAC TAA GTC CTT CAA CT-3'. 4、坐骨神经蛋白提取及检测动物组织样品裂解液配方：25mM Tris-HCl，pH 7.4；100mM NaF；50mM Na4P2O7；10mM Na3VO4；10mM EGTA；10mM EDTA；1％NP-40；10μg/ml Leupeptin；10μg/ml Aprotinin；2mM PMSF；20nM Okadaic acid。用台式匀浆器(Polytron,PT2100)匀浆，样品于4℃旋转裂解1小时后离心(13000rpm，4℃)20min，离心后小心去除上层脂质，其余上清转至另一离心管并再次离心。这一过程重复 2次以彻底去除蛋白样品中的脂质。样品蛋白含量用蛋白测定试剂盒测定，根据所得结果将所有样品的蛋白浓度调至相同水平，加入上样缓冲液，混匀后于100℃煮5min，冷却至室温用于Western blot分析。将上述步骤所得的样品用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，并将胶上蛋白转至PVDF膜。转膜结束后的PVDF膜用含5％牛血清白蛋白的TBST(Tris-buffered saline solution/Tween)缓冲液室温封闭1小时。封闭后的PVDF与一抗共孵过夜(4℃)。与一抗作用结束后，用TBST洗PVDF膜三次，再与二抗室温作用1小时。二抗作用结束后用TBST洗三次。最后PVDF膜用化学发光反应体系(chemiluminescence assay system，Roche)反应，并曝光至X胶片(Kodak)。各蛋白表达水平定量用软件Quantity-One(Bio-Rad)分析。所有抗体均购自于Cell Signaling Technology公司。5、坐骨神经电镜观察各组随机抽取3只动物取坐骨神经作为电镜标本。动物在深度麻醉下，经心脏依次灌注0.85％氯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种AMPK抑制剂Compound C在制备激活坐骨神经髓鞘形成制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种AMPK抑制剂Compound ...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙诚，刘晓宇，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32