一种检测或者鉴别羊绒和/或羊毛的方法技术

本发明专利技术属于纤维检测领域，涉及一种鉴别羊绒和/或羊毛的方法，具体地，涉及一种基于质谱技术检测或者鉴别羊绒和/或羊毛的方法。本发明专利技术建立的基于质谱技术检测纤维蛋白质的鉴别羊绒和羊毛的方法特异性好、灵敏度高，能够应用于纺织行业蛋白质纤维的检测。本发明专利技术的方法简单易操作，鉴别时间短，一般在6小时左右，结果准确度高，能达到99.5％的准确度，该方法成本相比DNA法低很多。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于纤维检测领域，涉及一种鉴别羊绒和/或羊毛的方法，具体地，涉及一种基于质谱技术检测或者鉴别羊绒和/或羊毛的方法。
技术介绍
羊绒是珍贵的特种动物纤维，由于受到动物生存环境的特殊要求的影响，使得羊绒成为稀有纤维，其纺织品具有轻薄柔软、保暖性好、舒适贴身、美观高雅等优良性能，比细羊毛的市场价格高出8-10倍。而今用羊毛掺杂假冒羊绒的不法行为日渐盛行，严重损害了消费者的利益，所以运用科学的方法精准地鉴别羊绒和羊毛就显得意义重大。目前，依据纤维表面形态结构的不同进行判别，仍是鉴别动物纤维的主要手段，如光学显微镜法等。这种方法主要依赖检验者的经验，主观性比较强。另外随着羊毛纤维剥鳞、拉伸等先进技术的发展，根据纤维表面结构不同的光学显微镜法存在很大局限性。DNA法亦是目前鉴别羊绒、羊毛纤维的一种可行方法。但羊绒和羊毛都属于蛋白质纤维，基本组成都是角蛋白，毛干中只含有微量线粒体DNA，并且纤维存放时间较长易于使DNA发生降解，毛绒经过加工处理也会使DNA受到很大破坏，这些都是毛绒DNA法鉴别面临的难题。目前，尚需要开发新的高灵敏度和准确度的羊绒和/或羊毛的检测或者鉴别方法，并发现能够用于羊绒和/或羊毛的检测或者鉴别特征标志物。
技术实现思路
本专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种检测或者
鉴别羊绒和/或羊毛的方法。本专利技术人惊奇地发现，本专利技术的方法特异性好、灵敏度高。本专利技术人还发现了用于检测或者鉴别羊绒和/或羊毛的特征峰质荷比以及氨基酸序列。由此提供了下述专利技术：本专利技术的一个方面涉及一种检测或者鉴别羊绒和/或羊毛的方法，包括将样品进行质谱检测的步骤；具体地，为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)操作简单，敏感度高，采用了被称为“软电离”的电离方式，能产生质荷比很大的稳定的分子离子，对分子量达到30万道尔顿的分子能进行准确质谱分析，且误差率可精确到十万分之一，而且该方法需要的的样品量很少，只需1-2pmol，而且非常快速，每一次质谱分析只需要数分钟。MALDI-TOF MS的基本原理是样品先与基质形成共结晶，当接受紫外激光照射时，因样品被包裹在基质中，激光光束的能量优先被基质的发色团吸收，从而保护了样品。接着这些基质迅速蒸发为气相，将样品分子带入气相。这时，受激的基质分子将质子转移给样品分子，使样品离子化，形成带低电荷的碎片离子，然后在电场得以加速，这些形成的碎片离子直接进入飞行时间质量分析仪，测量碎片离子由分析仪的一端飞抵另一端探测器所需要的时间。此飞行时间同碎片离子的值成反比，即值越高，飞行时间越短，最终获得碎片离子的质量/电荷指纹图谱。根据本专利技术任一项所述的方法，其中，扫描范围m/z为1900-2900和/或2350-2750和/或2080-2250；优选地，为1900-2900和/或2350-2750；更优选地，为2350-2750。本专利技术人发现，MALDI-TOF MS鉴别羊绒、羊毛，扫描范围m/z1900-2900、2350-2750、2080-2250，都有特征峰而且可以推测其氨基酸序列，得到特征蛋白质片段，对羊绒、羊毛进行区分。其中扫描范围m/z 2350-2750，特征峰较多，此扫描范围最适合用来鉴别羊绒、羊毛。根据本专利技术任一项所述的方法，其中，检测的特征峰m/z：为选自如下的任意1种、2种、3种或4种：2691.3、2637.3、2466.1和2664.5。对本领域技术人员而言，在已知质荷比的情况下，完全能够推算出氨基酸相应的序列，例如结合常用蛋白质数据库(如NCBI)的检索、酶切位点以及附图1-2所示的肽链指纹谱图。也可委托本领域的技术服务机构。质谱用于鉴别羊绒特征峰位置：m/z：2691.3、2637.3、2466.1，对应的氨基酸序列分别是：YSCQLNQVQSLIVNVESQLAEIR(SEQ ID NO：1)、YSCQLSQVQSLIVSVESQLAEIR(SEQ ID NO：2)、YSSQLAQMQGLIGSGESQLAEIR(SEQ ID NO：3)。鉴别羊毛特征峰位置及其氨基酸序列：m/z：2664.5，氨基酸序列：YSCQLSQVQSLIVNVESQLAEIR(SEQ ID NO：4)。如果检测到上述特征峰m/z 2691.3、2637.3和2466.1中的任意1个、2个或3个，则证明样品中存在羊绒。反之，如果这3个特征峰均未检测到，则说明样品中不存在羊绒。如果检测到特征峰m/z：2664.5，则证明样品中存在羊毛。反之，如果未检测到该特征峰，则说明样品中不存在羊毛。如果检测到上述特征峰m/z 2691.3、2637.3和2466.1中的任意1个、2个或3个，同时还检测到特征峰m/z：2664.5，说明样品中既存在羊绒，也存在羊毛。根据本专利技术任一项所述的方法，其中，在质谱检测之前，还包括对羊绒和/或羊毛样品进行处理，得到粗角蛋白样品的步骤。根据本专利技术任一项所述的方法，其中，所述处理包括清洗、去羊毛脂和蛋白质提取的步骤。所述清洗(洗毛)为用阴离子洗涤剂(十二烷基苯磺酸钠)加助剂(碳酸钠)洗毛，并烘干。洗涤剂：5-10g/L，优选6g/L。助剂：3-7g/L，
优选4g/L。35摄氏度将洗涤剂加入水中，混合均匀后升温至60摄氏度，加入羊毛，搅拌并保持温度为60摄氏度，10分钟后加入助剂，继续搅拌10分钟，自然冷却至室温，大量三重蒸馏水洗涤即可。所述去羊毛脂可以通过超声波清洗机进行。在本专利技术的一个实施方案中，使用超声波清洗机，仅以清水清洗，功率400W，频率25kHz，时间2min/次，T＝50摄氏度，涮洗5次，能较好脱去羊毛脂。所述蛋白质提取包括加入蛋白质溶胀剂、二硫键还原剂和巯基保护剂的步骤。具体地，所述蛋白质溶胀剂为尿素；所述二硫键还原剂选自β-巯基乙醇，β-巯基乙酸和二硫苏糖醇；所述巯基保护剂选自十二烷基硫酸钠、碘乙酰胺和鼠李糖醇。在本专利技术的一个实施方案中，浴比1∶(15-25)，5-8mol/L尿素、0.1-0.3mol/L的碳酸氢铵、0.5-1.5mol/L的二硫苏糖醇溶液，35-40℃，处理20-40min；再冷却至室温，再加入碘乙酰胺0.5-1.5mol/L，20-40min。在本专利技术的一个实施方案中，浴比1∶20，7mol/L尿素、0.2mol/L的碳酸氢铵、1mol/L的二硫苏糖醇(DTT)溶液，37℃，处理30min；再冷却至室温，再加入碘乙酰胺1mol/L，30min。根据本专利技术任一项所述的方法，其还包括对得到的粗角蛋白样品进行酶处理的步骤；具体地，用胰蛋白酶处理。在本专利技术的一个实施方案中，胰蛋白酶2.5mg/ml，37℃，过夜。优选地，还包括对酶处理产物进行透析和浓缩的步骤；具体地，所述透析通过使用分子量为25000-65000的透析袋进行。用还原剂将角蛋白分子中的二硫键还原成巯基，得到可溶蛋白。还原剂一般为β-巯基乙醇，β-巯基乙酸和二硫苏糖醇(DTT)等。还原得到的物质溶解性不大，需加入蛋白质溶胀剂如尿素，它可拆开分子间氢键，减小分子间作用力，提高溶解度；同时还原得到的巯基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测或者鉴别羊绒和/或羊毛的方法，包括将样品进行质谱检测的步骤；具体地，为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测。

【技术特征摘要】
1.一种检测或者鉴别羊绒和/或羊毛的方法，包括将样品进行质谱检测的步骤；具体地，为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测。2.根据权利要求1所述的方法，其中，扫描范围m/z为1900-2900和/或2350-2750和/或2080-2250；优选地，为1900-2900和/或2350-2750；更优选地，为2350-2750。3.根据权利要求1所述的方法，其中，检测的特征峰m/z：为选自如下的任意1种、2种、3种或4种：2691.3、2637.3、2466.1和2664.5。4.根据权利要求1所述的方法，其中，在质谱检测之前，还包括对羊绒和/或羊毛样品进行处理，得到粗角蛋白样品的步骤。5.根据权利要求5所述的方法，其中，所述处理包括清洗、去羊毛脂和蛋白质提取的步骤；具体地，所述蛋白质提取包括加入蛋白质溶胀剂、二硫键还原剂和巯基保护剂的步骤。6.根据权利要求5所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚，
申请(专利权)人：龚，
类型：发明
国别省市：北京;11