一种双酶检测γ–氨基丁酸含量的方法技术

本发明专利技术提供了一种双酶检测γ–氨基丁酸含量的方法。该方法包括以下步骤：在液氮中研磨待测样，加入醇；真空干燥，加入卤化镧，混匀离心后，收集上清液；再向上清液加入碱液，混匀离心后，得到γ–氨基丁酸提取液；再向所得提取液中加入NADP+、Tris缓冲液、γ–氨基丁酸转氨酶‑琥珀酸半醛脱氢酶双酶液，得到混合液；使用紫外可见分光光度计，测定上述混合液在340nm波长处的初始值；然后向混合液中加入α‑酮戊二酸进行反应，测定反应液在340nm波长处的最终值，绘制标准曲线，求得一次回归曲线；根据初始值、最终值和一次回归曲线，计算γ–氨基丁酸的含量。本发明专利技术可有效降低干扰，简单快速准确地检测植物和动物材料中γ–氨基丁酸的含量。

【技术实现步骤摘要】
201610221748

【技术保护点】
一种双酶检测γ–氨基丁酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在液氮下研磨待测样，加入醇，以钝化所述待测样中谷氨酸脱羧酶的活性；(2)进行真空干燥后，加入卤化镧，混匀，以沉淀水溶性酚类色素，离心，收集上清液；(3)向步骤(2)得到的上清液中加入碱，混匀，离心，收集γ–氨基丁酸提取液；(4)向步骤(3)所得提取液中加入NADP+、Tris缓冲液和γ–氨基丁酸转氨酶‑琥珀酸半醛脱氢酶双酶液，得到混合液；(5)使用紫外可见分光光度计测定步骤(4)得到的混合液在340nm波长处的初始值；(6)向步骤(4)得到的混合液加入α‑酮戊二酸进行反应，测定反应液在所述340nm波长处的最终值；(7)绘制标准曲线，求得一次回归曲线，根据所述初始值、最终值和一次回归曲线，计算γ–氨基丁酸的含量。

【技术特征摘要】
1.一种双酶检测γ–氨基丁酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在液氮下研磨待测样，加入醇，以钝化所述待测样中谷氨酸脱羧酶的活性；(2)进行真空干燥后，加入卤化镧，混匀，以沉淀水溶性酚类色素，离心，收集上清液；(3)向步骤(2)得到的上清液中加入碱，混匀，离心，收集γ–氨基丁酸提取液；(4)向步骤(3)所得提取液中加入NADP+、Tris缓冲液和γ–氨基丁酸转氨酶-琥珀酸半醛脱氢酶双酶液，得到混合液；(5)使用紫外可见分光光度计测定步骤(4)得到的混合液在340nm波长处的初始值；(6)向步骤(4)得到的混合液加入α-酮戊二酸进行反应，测定反应液在所述340nm波长处的最终值；(7)绘制标准曲线，求得一次回归曲线，根据所述初始值、最终值和一次回归曲线，计算γ–氨基丁酸的含量。2.根据权利要求1所述的双酶检测γ–氨基丁酸含量的方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述待测样为植物组织或动物组织。3.根据权利要求1所述的双酶检测γ–氨基丁酸含量的方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述醇为甲醇、乙醇、正丙醇和正丁醇中的一种或几种；待测样与醇的质量比为1:4.0～1:8.0。4.根据权利要求1所述的双酶检测γ–氨基丁酸含量的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏国兴，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32