过滤载体及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种用于筛选具有目标长度的寡聚核苷酸的过滤载体，其中所述过滤载体从5’至3’方向上包括启动子、报告基因和位于启动子与报告基因之间的至少一个酶切位点，其中所述具有目标长度的寡聚核苷酸在插入所述酶切位点之后不会导致针对所述报告基因的移码突变。本发明专利技术还提供所述过滤载体的构建方法及其在提高噬菌体或细菌基因文库的构建过程中所用的化学合成寡聚核苷酸的正确率中的应用。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术涉及基因工程领域，具体地涉及一种用于化学合成的寡聚核苷酸质量检测及正确率提高的过滤载体。更具体地，本专利技术公开了一种用于筛选具有目标长度的寡聚核苷酸的过滤载体。本专利技术还提供所述过滤载体的构建方法及其在提高噬菌体或细菌基因文库的构建过程中所用的化学合成寡聚核苷酸的正确率中的应用。

技术介绍

通过化学方法合成的寡聚核苷酸在生命科学的应用非常广泛，比如基因的人工合成,基因测序以及通过PCR方法的基因扩增等等。目前寡聚核苷酸的化学合成主要通过亚磷酰胺法(Phosphoramiditechemistry),每个合成周期包含4个化学反应：去封闭、连接、加保护基团和氧化(Kosurietal(2014)NatureMethods11:499-507)。尽管每个化学反应的效率都已经优化,达到98％以上，但每步化学反应都不可能是100％准确的,所以通过化学方法合成的寡聚核苷酸都包含有不同程度的错误序列,而且错误的比例随着寡聚核苷酸长度的增长而显著增加(Baueretal(1989)NucleicAcidsRes.17:812Wosnicketal(198本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于筛选具有目标长度的寡聚核苷酸的过滤载体，其中所述过滤载体从5’至3’方向上包括启动子、报告基因和位于启动子与报告基因之间的至少一个酶切位点，其中所述具有目标长度的寡聚核苷酸在插入所述酶切位点之后不会导致针对所述报告基因的移码突变。

【技术特征摘要】
1.一种用于筛选具有目标长度的寡聚核苷酸的过滤载体，其中所述过
滤载体从5’至3’方向上包括启动子、报告基因和位于启动子与报告基因之
间的至少一个酶切位点，其中所述具有目标长度的寡聚核苷酸在插入所述
酶切位点之后不会导致针对所述报告基因的移码突变。
2.根据权利要求1所述的过滤载体，其中所述过滤载体在所述启动子
和所述酶切位点之间还包括信号肽编码基因，优选所述信号肽为所述报告
基因编码的报告蛋白的信号肽，还优选在信号肽编码基因和所述报告基因
之间包括连接肽编码序列，优选所述连接肽在插入所述寡聚核苷酸的酶切
位点之前，更优选在所述启动子与报告基因之间具有至少两个酶切位点，
在这至少两个酶切位点之间包含终止密码子，最优选所述信号肽编码基因
和所述报告基因处于所述启动子的控制之下并且两者的相对位置符合两
者的阅读框。
3.根据权利要求1或2所述的过滤载体，其中所述过滤载体还任选地
包括选择基因，优选所述选择基因和所述报告基因彼此不同并且独立地选
自抗生素抗性基因、荧光素酶基因、β半乳糖苷酶基因、碱性磷酸酶基因、
氨基酸合成基因和它们的组合，更优选选自抗生素抗性基因，最优选所述
报告基因是β内酰胺酶(TEM-1)或其成熟肽基因，所述选择基因是氯霉素
乙酰基转移酶(CAT)基因。
4.根据权利要求3所述的过滤载体，其中所述过滤载体是质粒载体，
优选所述β内酰胺酶的成熟肽的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示，所述氯
霉素乙酰基转移酶(CAT)的氨基酸序列如SEQIDNo:2所示，所述信号
肽的氨基酸序列如SEQIDNo:3所示，所述连接肽的编码序列如SEQID
No:4所示，更优选在所述启动子与报告基因之间具有插入所述寡聚核苷
酸的酶切位点PvuII位点和SpeI位点，在PvuII位点和SpeI位点之间包括
终止密码子taa、tag和tga中的一个或多个，还更优选PvuII位点和SpeI
位点之间的序列如SEQIDNo:5所示。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的过滤载体，其中所述过滤载体是
pFV02，其核苷酸序列如SEQIDNo:...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜方勇，罗培志，
申请(专利权)人：天演药业苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32