一种降低八棱海棠种子病毒带毒率提高发芽率的方法技术

本发明专利技术属于果树脱毒种苗繁育技术领域，特别涉及一种降低八棱海棠种子病毒带毒率提高发芽率的方法。采用1％高锰酸钾水溶液浸泡八棱海棠种子，进行沙藏、播种、获取无病毒苗木繁育的基砧。包括以下步骤：(1)种子采集；(2)高锰酸钾处理；(3)播种；(4)实生苗优选与病毒抽检。使用本发明专利技术的技术方法，八棱海棠种子出苗率达到47.6％，病毒脱除率达到95％，节省育苗用海棠种子50％，大大节约了生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于果树脱毒种苗繁育
，特别涉及一种降低八棱海棠种子病毒带 毒率提高发芽率的方法。
技术介绍
苹果是我国的主栽果树之一，其栽培面积和总产量均居世界首位，但单产低、品质 差，与其地位极不相符，病毒病的危害是导致该现象的重要原因之一。苹果病毒病不仅严重 影响了果树的生长，降低了果实产量和品质以及果品贮藏性和耐运力，而且影响根系对土 壤营养物质的吸收和利用，对苹果生产危害很大，培育无毒苗木是目前防治苹果病毒病的 唯一有效措施。 砧木是果树生长的基础，对控制树势，增强果树抗逆性及抗病能力，扩大果树的适 生范围具有重要意义。现在我国生产上普遍应用的苹果苗木均以实生苗为基砧，其作为果 树生产的基础，能够直接影响接穗的生长和结果。目前苹果生产中应用较多的苹果砧木有 山定子、西府海棠、湖北海棠、楸子、新疆野苹果等。八棱海棠又名怀来海棠树，属蔷薇科，仁 果亚科，苹果属，属于楸子的一种。八棱海棠砧木具有树体强健，根系发达、须根较多、抗寒、 抗旱、抗涝、抗盐碱、抗病虫、耐瘠薄、适应性广，无论平地、山坡、丘陵、砂荒均能栽植。在我 国山东、河北、河南等地苹果苗木繁育应用非常广泛。 无毒苗木的生产主要通过脱毒的品种和中间砧与实生苗嫁接完成，这种生产方式 的前提是保证实生苗不带病毒。长期以来，人们普遍认为果树砧木实生苗不携带病毒或带 毒率很低，但是，现有的研究结果表明，苹果潜隐性病毒可以通过汁液、工具的交叉以及地 下根系的交接长合进行传播;苹果茎沟病毒可以通过种子传播，染病母株的后代群体平均 带毒率为5.98 %。，苹果锈果类病毒除通过修剪工具进行传播外，也可通过种子传播，其中 种子传毒率为7.7 %。 作为无毒苗木的基砧，应用八棱海棠育苗，需要将种子进行低温层积后播种。现有 的研究表明，八棱海棠种子主要携带苹果茎沟病毒和苹果锈果类病毒2种病毒，苹果茎沟病 毒侵染率为3.3 %，苹果锈果类病毒带毒率为26.7 %，复合侵染率3.3 %，总体带毒率达到 26.7%，由于苗木生产中不可能对每株实生苗进行检测，严重影响了我国无病毒苗木的繁 育。同时，八棱海棠种子出苗率比较低，一般仅10%左右，严重增加了苹果育苗的生产成本。
技术实现思路
为了解决以上现有技术中八棱海棠种子苹果病毒病带毒率高，出苗率低，生产成 本高的问题，本专利技术提供了一种对八棱海棠种子病毒病脱除效果好，植株出苗率高，长势好 的方法。 本专利技术提供，其特征在于： 采用1%高锰酸钾水溶液浸泡八棱海棠种子，进行沙藏、播种、获取无病毒苗木繁育的基砧。 本专利技术包括以下步骤： (1)种子采集:在健康、无病害的树上，采收果实成熟后的八棱海棠种子;将果实环 状切开，取出种子用清水清洗2遍，去除果肉和种子表面的果胶，阴干后，放干燥通风处保 存； (2)高锰酸钾处理:在1月上旬，将种子放入1 %高锰酸钾水溶液浸泡30分钟，用自 来水冲洗2次，晾干后，放置在背阴处沙藏； ( 3 )播种：在3月中下旬，在平均气温5-7°C时开始播种；播种量1 . 5-2 . OKg/ 666.7m2。播种后，待苗长至2-3片真叶时，开始浇水，进行正常田间管理； (4)实生苗优选与病毒抽检:待苗高8-lOcm时，对苗圃中生长势弱、发育不正常、有 明显病害的实生海棠苗及时去除，同时疏除生长过密的苗木，保持通风，株距保持在10-15cm;8月中下旬，对海棠苗木进行随机选取幼叶进行苹果病毒检测;抽检完毕后，所得砧木 即可作为苹果无病毒苗木繁育的基砧。 进一步地，在步骤⑵的沙藏中，种子与沙的比例在1:3-1:5之间。进一步地，播种前，用筛子将沙筛出，打畦，畦宽1.6-1.7m，每畦4行点播，播3-4粒 种，距尚10_12〇11，播种深度3.〇-4.0cm〇 进一步地，在步骤（3)中，播种后，选取铺地膜或扣拱棚保温保湿，选温和天气去 膜。 进一步地，在步骤(3)中，田间管理的过程中可喷布36%甲基硫菌灵悬浮剂500倍 液。 进一步地，苹果病毒为 ASGV、ACLSV、ASPV、ASSVd。 进一步地，苹果病毒检测采用RT-PCR技术，以cDNA为模板，在Taq酶的催化下，使用 正反引物进行双链DNA的扩增。 本专利技术的有益效果： 使用本专利技术的技术方法，八棱海棠种子出苗率达到47.6%，病毒脱除率达到95%， 节省育苗用海棠种子50%，大大节约了生产成本。【附图说明】图1是本专利技术提供的方法流程图。【具体实施方式】为了更好的理解本专利技术，下面结合附图与具体实施例来进一步说明。本专利技术以八 棱海棠实生种子为试验材料，采用0.1%KMn04处理种子后沙藏，提高了出苗率，降低了实生 种子播种量一半以上，降低了实生砧木苹果病毒病带毒率。该方法是选择健康的母本树采 集果实，取种；1月上旬，用〇 . 1 %的KMn〇4浸种30分钟后，用清水冲洗2遍，晾干后与3-5倍体 积的沙拌匀，于室外背阴处放置。3月下旬点播，距离10-12cm，播种深度3.0-4.0cm，播种量 1.5-2. OKg/666.7m2。待苗高8-10cm时，对苗圃中实生苗选优，及时去除生长势弱、发育不正 常、有明显病害的实生海棠苗，疏除生长过密的苗木，保持通风，株距保持在l〇-15cm左右。8 月中下旬，随机采集实生苗幼叶进行病毒抽检。 实施例1:本实施例降低八棱海棠种子病毒带毒率提高发芽率的方法，含有以下4个步骤： (1)种子采集:对八棱海棠种子的采摘需确保果树的健康、无病害，待果实充分成 熟后采收。采收后，将果实已环状方式切开，将种子剔出，在剔出种子的过程中确保不要伤 及种皮。将取出的种子用清水清洗2遍，搓去果肉和种子表面的果胶，阴干后，放干燥通风处 保存。 (2)高锰酸钾处理:在1月上旬，配制1 %高锰酸钾水溶液，将种子放入1 %高锰酸钾 水溶液浸泡30分钟后，取出种子，用自来水冲洗2次，晾干。将晾干后的种子进行拌沙，采用 种子:沙=1:3-1:5的配比进行拌制：，并放置在背阴处沙藏。 (3)播种：3月中下旬，待平均气温达到5_7°C时开始播种。播种前，用筛子将沙筛 出，打畦，畦宽1.6-1.7m，浇底水，待水渗下后，每畦4行点播，播3-4粒种，距离10-12cm，播种 深度3.0-4.0cm，后用耙子耙平整。播种量1.5-2. OKg/666.7m2。播种后，注意保温保湿。待苗 长至2-3片真叶出现时，开始浇水，进行正常田间管理。播种后铺地膜或扣拱棚保温保湿，选 温和天气去膜，注意去除杂草，注意防治立枯病，在田间管理中可喷布36%甲基硫菌灵悬浮 剂500倍液。 (4)实生苗优选与病毒抽检:待苗高至8-10cm时，对苗圃中生长势弱、发育不正常、 有明显病害的实生海棠苗及时去除，同时疏除生长过密的苗木，保持通风，一般株距在10-15cm左右。8月中下旬，对海棠苗木进行随机选取100株采集幼叶进行4种苹果病毒检测。抽 检完毕后，所得砧木即可作为苹果无病毒苗木繁育的基砧。 采用E A S Y s p i η植物R N A快速提取试剂盒的液氮研磨法提取嫩叶的R N A ;采用 Thermo反转录试剂盒进行RNA反转录。 病毒检测所用引物见表1，均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。 表1当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降低八棱海棠种子病毒带毒率提高发芽率的方法，其特征在于：采用1％高锰酸钾水溶液浸泡八棱海棠种子，进行沙藏、播种、获取无病毒苗木繁育的基砧。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姜中武，赵玲玲，宋来庆，郭承华，郭善利，孙承锋，
申请(专利权)人：烟台大学，
类型：发明
国别省市：山东;37