本发明专利技术涉及植物花粉贮藏及离体培养活力检测领域，具体而言，涉及一种软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，包括：采集软枣猕猴桃大蕾期花苞并取出花药；将所述花药干燥并过筛以收集花粉；将收集到的花粉密封并于-85～-75℃低温贮藏；将低温贮藏的花粉取出，置于室温下复温；将复温好的花粉均匀播撒于固体培养基上培养，随后在显微镜下镜检并统计花粉萌发率。该贮藏方法花粉经长时间保持后活力依旧保存良好，该花粉离体培养检测方法可用于软枣猕猴桃花粉活力检测，简单、迅速、精确。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物花粉贮藏及离体培养活力检测领域，具体而言，涉及。
技术介绍
软率称猴桃(Actinidiaarguta(Sieb.&Zucc)Planch.ex Miq.)，又名软率子、称猴梨、藤瓜、藤梨，属于猕猴桃科，猕猴桃属大型落叶藤本植物。其果实较小，表面光滑，整果可食，是猕猴桃属中最耐寒的种之一。软枣猕猴桃享有“水果之王”的美誉，以其优良的品质、风味、丰富的营养成分、较高的医疗保健功效及良好的加工适性等特点，备受消费者青睐。软枣猕猴桃是世界很多地区尤其是寒冷地区极具发展前景的小浆果树种。常规杂交育种是作物育种的重要途径之一，而花粉活力生活力决定了杂交的有效性。在自然状态下，软枣猕猴桃的生活力最多维持2周，如果杂交亲本之间花期不育或远距离杂交，育种工作者就需要采用一定的方法进行花粉贮藏，并保持花粉活力。因此研究软枣猕猴桃花粉贮藏条件及花粉活力检测方法对育种工作具有重要的应用价值。软枣猕猴桃为雌雄异株植物，栽培生产中需同时配置雌株和雄株。但由于一些种植者对软枣猕猴桃特性缺乏了解，栽培过程中没有配置授粉植株，开花期授粉不良，降低了果实的产量及品质，严重者可导致绝产。因此研究软枣猕猴桃花粉的贮藏方法，可结合人工授粉方式，在不配置雄株的情况下仍能获得高品质的果实，同时由于减少了雄株的占地面积，可显著提高土地利用率，提高单位面积产量。目前关于猕猴桃花粉贮藏方法有低温贮藏的报道，但研究最低温度仅限在_20°C条件，贮藏I年后花粉活力下降明显，而关于软枣猕猴桃花粉贮藏方法鲜有报道。此外，目前测定花粉活力的方法主要有离体培养法、田间授粉法和染色法等3种。田间授粉法费事费力，染色法误差较大。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，所述方法贮藏温度较传统方法更低，且花粉活力保持时间长，可解决贮藏I年后花粉活力下降明显的问题，适应软枣猕猴桃的花粉离体培养活力检测方法可解决现有方法费时费力，误差较大，操作复杂，不够精确的问题。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案:—种软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，包括以下步骤:1)、采集软枣猕猴桃大蕾期花苞并取出花药；2 )、将所述花药干燥并过筛以收集花粉；3)、将收集到的花粉密封并于-85?_75°C低温贮藏；4)、将低温贮藏的花粉取出，置于室温下复温后，将花粉均匀播撒于固体培养基上培养，随后在显微镜下镜检并统计花粉萌发率。本专利技术提供的软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，贮藏温度较传统方法更低，且花粉活力保持时间长，花粉活力保持的时间更久；后续的检测方法操作便捷，省时省力，且计数精确，易于操作。具体的，花粉密封可置于密封的玻璃瓶或离心管中。优选的，如上所述的软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，在步骤I)中，所述采集软枣猕猴桃大蕾期花苞在晴天进行，且采集时间为早晨9:00?10:30。晴天收集到的花粉不易受潮，且萌发率最高。选择在早晨9:00?10:30期间进行采集大蕾期花苞，可避免花苞开放使花粉被污染。优选的，如上所述的软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，在步骤2)中，将所述花药干燥的具体操作为:将所述花药置于硫酸纸袋中，再将硫酸纸袋置于盛有变色硅胶的干燥器中，使花药含水量达到4.5?6 %。目前关于猕猴桃花粉干燥贮藏的方法中，有研究认为将自然晾干的花粉置于青霉素小瓶中贮藏在_15°C效果最好，但软枣猕猴桃花粉在贮藏I年后，花粉活力明显降低，降为贮藏前的15%，效果仍不是很理想。本专利技术利用变色硅胶对花粉进行干燥后密封贮藏，干燥效果更为彻底，放入-85?-75°C进行贮藏，花粉活力保存良好，仅比贮藏前降低1.91%。进一步优选的，在所述干燥器中干燥的温度为20?25°C，干燥时间为20?28小时。优选的，如上所述的软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，在步骤2)中，所述过筛具体为过60?80目筛。优选的，如上所述的软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，在步骤4)中，所述复温时间为5?I Om i η。优选的，如上所述的软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，将软枣猕猴桃花粉播撒于固体培养基时，播撒密度为:在10 X 10倍显微镜下镜检时，每个视野下花粉粒数为50?100粒。应注意花粉播撒均匀，尽量少重叠。具体操作时，可用接种环轻沾一下花粉将花粉吸附在接种环上，再轻轻拍打接种环让花粉均匀散落于固体培养基上。优选的，如上所述的软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，在步骤4)中，所述固体培养基主要由以下原料组份组成:硼酸250?350mg/L、蔗糖45?55g/L、琼脂9.5?10.58/1;所用溶剂为水。进一步优选的，所述固体培养基主要由以下原料组份组成:硼酸290?310mg/L、蔗糖48?52g/L、琼脂9.8?10.28/1;所用溶剂为水。硼酸与蔗糖在一定浓度范围内能促进花粉萌发。花粉离体萌发需要碳源。蔗糖对花粉萌发和花粉管生长具有重要的作用，是花粉萌发及花粉管壁合成的主要营养物质来源。硼酸可以促进花粉对蔗糖的吸收和代谢，与蔗糖结合能极大地提高花粉的萌发率，增加氧气的含量和吸收，参与果胶物质的合成，利于花粉管的建造、萌发。但针对不同物种的花粉，硼酸与蔗糖并不同，且二者之间的比例需要控制得当。优选的，如上所述的软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，所述培养的条件为:19 ?21Γ 暗培养5.5 ?6.5h。温度也是影响花粉萌发的重要条件。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为:I)、本专利技术利用变色硅胶对花粉进行干燥后密封贮藏，干燥效果更为彻底，放入-85?_75°C进行贮藏，花粉活力保存良好，仅比贮藏前降低1.91%。2)、本专利技术提供的软枣猕猴桃花粉离体培养活力检测方法，操作便捷，省时省力，且计数精确，易于操作。【附图说明】为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为不同贮藏温度下贮藏360天后花粉萌发率；图2为不同蔗糖浓度对花粉萌发率的影响；图3为不同硼酸浓度对花粉萌发率的影响；图4为不同培养温度对花粉萌发率的影响。【具体实施方式】下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1—种软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法:S11、采集软枣猕猴桃大蕾期花苞并取出花药；SI 2、将所述花药干燥并过筛以收集花粉；S13、将收集到的花粉密封并于-85?_75°C低温贮藏；S14、将低温贮藏的花粉取出，置于室温下复温后，将花粉均匀播撒于固体培养基上培养，随后在显微镜下镜检并统计花粉萌发率。 实施例2:S21、于晴天早晨9:00采集软枣猕猴桃大蕾期即将开放的花朵，用镊子扒出花药；S22、将所述花药置于硫酸纸袋中，再将硫酸纸袋置于盛有变色硅胶的干燥器中，在所述干燥器中干燥的温度为20?25°C，干燥时间为20小时，使花药含水量达到6% ;S23、过60目筛以收集花粉；S24、将收集到的花粉放入密封的玻璃本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种软枣猕猴桃花粉贮藏及离体培养活力检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)、采集软枣猕猴桃大蕾期花苞并取出花药；2)、将所述花药干燥并过筛以收集花粉；3)、将收集到的花粉密封并于‑85～‑75℃低温贮藏；4)、将低温贮藏的花粉取出，置于室温下复温后，将花粉均匀播撒于固体培养基上培养，随后在显微镜下镜检并统计花粉萌发率。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：秦红艳，艾军，许培磊，刘迎雪，王振兴，杨义明，范书田，赵滢，王春伟，李晓艳，张宝香，王广富，
申请(专利权)人：中国农业科学院特产研究所，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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