一种核桃低聚肽粉及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种核桃低聚肽粉及其制备方法和用途，所述低聚肽粉肽含量在80wt％以上，其中95％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton。所述方法包括使用高效逆流提取法提取核桃蛋白，过滤、酶解，再将蛋白酶解液依次经过微滤膜与超滤膜高效分离纯化，最后浓缩喷雾，得到低聚肽粉。本发明专利技术的方法操作简便，高收率低成本，产品质量稳定，工艺绿色环保，适合大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种高纯度、低分子量的核桃柏抗氧化肽产品，其多肽含量在80wt % 以上，分子量小于1500Dalton在95%以上。本专利技术还涉及到核桃蛋白的制备并催化酶解，生 成低聚抗氧化肽粉的制备方法，该肽粉可用作保健食品或者药品。
技术介绍
核桃(Juglans regia L)又名胡桃，属于四大坚果之一，具有很高的营养药用价 值。在我国古医药书籍中，有明确记载，李时珍《本草纲目》记述"补气养血、润燥化痰、益命 门、利三焦，温肺润肠。治肺润肠。治虚寒喘咳，腰脚重疼，心腹疝痛，血痢肠风，散肿毒，"宋 刘翰《开宝本草》载"胡桃（即核桃)味甘、平、无毒。食之令人肥健，润肌黑发，取瓤烧令黑，未 断烟，和松脂，研傅瘰疬疮"。唐化孟诜《食疗本草》中说，核桃仁能"通经脉、黑须发，常服骨 肉细腻光润"。崔禹锡的《食经》说它"多食利小便，去五痔"。《医林纂要》一书的评价是，可以 "补肾，润命门，固精，润大肠，通热秘，止寒泻虚泻。"等等。 核桃中含有丰富的蛋白质、脂肪等营养成分，含量比较均衡，属于比较理想的高蛋 白、高脂肪的食物，据报道，核桃仁中含有高达52%_70%的油脂，其中大部分为不饱和脂肪 酸，另外还含有约24%的蛋白质， 12 % -16 %的碳水化合物，1.5 % -2 %的纤维素，以及1.7 % -2 %的矿物质。核桃中 富含人体必需的氨基酸，且氨基酸比例比较合理，其中对人体生理作用有着重要功能的谷 氨酸、天冬氨酸、精氨酸含量均较高，其中谷氨酸还是影响人体特别是青少年智力及记忆发 育的重要功能物质。 为了获得比核桃原蛋白在营养、功能性及生物活性上更加优良的低聚肽粉，已尝 试了多种制备方法。专利CN 101228918A将核桃柏粉碎，超声波法提取核桃蛋白，将核桃蛋 白真空干燥后，再使用蛋白酶进行酶解，离心，使用透析袋对上清液进行透析，经浓缩透析 液并真空干燥得到含量在60 %~80 %的肽粉。该方法操作复杂，肽含量较低，肽分子量的分 布也不明确，同时使用超声提取蛋白，透析袋进行精致，无法进行大规模制备。专利CN 102406050A使用碱提酸沉方法提取蛋白质，经冷冻干燥得到核桃蛋白粉，蛋白粉经酶解后， 用300Mpa高压处理lOmin，冷冻干燥得核桃肽粉。此制备方法需超高压设备和冷冻干燥机， 成本高，不适宜大规模生产;该专利技术专利虽然提供了该法制备的核桃肽粉的分子量分布，但 产品中肽含量不明确。专利CN 103103244B使用碱提酸沉的方法提取蛋白质，并用微波结合 超声波处理后，酶解得到多肽粉。该法仍不适用大规模生产，并且没有对酶解产品中肽含量 进行测定。专利CN 104293870A先使用C〇2超临界萃取仪去除油脂后得到的核桃柏，喊提酸 沉后喷雾得到核桃蛋白粉，再将蛋白粉制成悬浊液并煮沸破坏蛋白质的结构，使用碱性蛋 白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶分段四步酶解核桃蛋白液，经5000Dal ton或者 SOOODalton超滤膜精制后使用离子交换树脂脱盐，最后喷雾干燥得到核桃肽粉。此专利涉 及到去除油脂时使用超临界萃取仪，增加成本，不易于大生产;涉及到4种酶分段四步酶解， 步骤繁琐、成本高;涉及到酶解完成后，未经过微滤膜除杂，直接进行超滤膜，造成超滤膜易 阻塞，超滤时间延长，降低多肽收率，同时缩短超滤膜使用寿命;此专利未涉及到多肽产品 中 肽的百分含量和肽的分子量分布。 可见，以上核桃多肽的制备条件苛刻，工艺步骤繁琐，很难实现大规模生产，因此 寻找一套工艺简单、低成本、高含量、较高活性的核桃多肽的制备方法已经成为寻找大规模 生产的研究热点之一。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种高纯度、低分子量的核桃低聚肽粉。 本专利技术的另一目的是提供了一种高纯度、低分子量的核桃低聚肽粉的制备方法。 本专利技术的另一目的是提供了本专利技术核桃低聚肽粉用于制备治疗或预防自由基过 多引起的症状的药物、食品或保健品的应用。 本专利技术的另一目的是提供了含有本专利技术核桃低聚肽粉的药物和食品组合物。 本专利技术的目的是通过下述技术方案实现的： 一种核桃低聚肽粉，采用GB/T 22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量 在80wt%以上，其中95%以上核桃肽的分子量小于1500Dalton，其分子量分布如下： 数均分子量范围：170~3000 重均分子量范围：180~4000 所述核桃低聚肽粉是通过下述方法制备得到的： (1)核桃柏的预处理:将核桃去壳、冷榨脱油，得到脱脂核桃柏。 (2)逆流提取法提取蛋白质：将一定量脱脂后的核桃柏（记录为A)，与水按重量比 为1:5~1:15混合，调节pH至9~11于室温提取1~2h;提取完成后，过滤，滤渣进行二次提 取，滤液倒入等量的核桃柏(记录为B)，调节pH至9~11于室温提取1~2h;B完成第一次提取 后，滤液待用，滤渣继续进行第二次提取;A完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入等量的核 桃柏(记录为C)，调节pH至9~11于室温提取1~2h;B完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入C 完成第一次提取的滤渣中提取1~2h，而C第一次提取的滤液待用；样品C完成第二次提取 后，滤渣弃去，滤液待用；最后合并以上待用滤液，调节pH为3~5，静置0.5~2h，弃去上清 液，最后往沉淀物中加入体积比为1:10~1:20的水，搅拌均匀。 (3)蛋白酶解:将上述核桃蛋白液加热至40~55°C，将pH值调节至中性，加入核桃 柏重量的0.5~2%中性蛋白酶(酶活力为30万u/g)或者加入0.5~2%复合酶（中性蛋白酶 与木瓜蛋白酶的质量比为1:1，木瓜蛋白酶的活力为50万u/g)，搅拌酶解3~6h后，煮沸灭活 30min，离心，上清液即为蛋白酶解液。 (4)分离纯化:将蛋白酶解液使用孔径为0.1~0.5μπι的微滤膜进行过滤，透过液再 经2000~20000Dalton超滤膜处理后，截留液在50~80°C下浓缩至固含为3~5wt%时，进行 喷雾干燥，进口温度为140~160°C，出口温度为55~65°C，得到高纯度、低分子量的淡黄色 核桃肽粉，产率可达20~30wt %。 (5)肽含量与分子量分布测定:采用GB/T 22492-2008附录A与附录B的检测方法， 测得肽含量在80wt%以上，其中95%以上的核桃肽的分子量小于1500Dalton。 -种组合物，其含有本专利技术所述的核桃低聚肽粉和，药物或食品上可接受的助剂。 根据现有技术，本专利技术可将所述的组合物制备成任意所述剂型，如，素片、薄膜包 衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、口服溶液或口服混悬液。 本专利技术所述的核桃低聚肽粉可用于制备治疗或预防自由基过多引起的症状的药 物、食品或保健品。 与现有技术相比，本专利技术具有如下优点： (1)本专利技术将核桃冷榨脱脂制备核桃柏，专利技术人做了相关实验，与热榨方法相比， 冷榨后蛋白质提取率高出5wt%左右，同时含量高出20wt%左右。 (2)本专利技术使用高效逆流法提取核桃蛋白，相比普通的碱提酸沉法，蛋白质的提取 率提高了 10%以上，同时减少了用水量，节约生产成本。 (3)本专利技术仅使用蛋白复溶液进行酶解，没有将蛋白进行干燥，这样不仅减少了蛋 白质干燥时的损失，也简化了制备工艺。 (4)本专利技术使用中性蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核桃低聚肽粉，其特征在于：采用GB/T 22492‑2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量在80wt％以上，其中95％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton，其分子量分布如下：

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王昭日，刘明川，杨胜杰，洪达，杨进平，凌赟，黄佳慧，
申请(专利权)人：杏辉天力杭州药业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33