使用蛋白质溶液治疗胶原蛋白缺损的方法技术

在缺损位置刺激胶原蛋白产生，包括刺激软骨产生，的方法。方法包括将来自IL-1ra、sTNF-R1、sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1和sIL-1RII的至少两种蛋白质施用到缺损位置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】
技术介绍
本技术设及在哺乳动物对象中的胶原蛋白缺损位置刺激软骨细胞的方法。特别 地，方法包括使用含细胞因子的溶液，包括源自血液和其它组织的运种溶液。 软骨细胞是产生和维持组成软骨的软骨基质的细胞。胶原蛋白是动物中最丰富的 蛋白质，存在于各种组织，包括皮肤、结缔组织、软骨、骨、血管和椎间盘。有各种各样的胶原 蛋白相关疾病，由包含胶原蛋白的组织的疾病W及创伤造成。疾病可W由影响软骨细胞产 生胶原蛋白的遗传缺陷或营养缺陷造成。一些胶原蛋白疾病与自身免疫疾病相关，如类风 湿性关节炎、狼疮和系统性硬化，所述自身免疫疾病在胶原蛋白产生后将其破坏。运类疾病 可能是使人虚弱的且疼痛的。 软骨由胶原蛋白纤维组成。因此，胶原蛋白疾病可W影响关节和其他组织结构中 的软骨的组成和功能。软骨缺损可W呈现为软骨表面的桐或撕裂，且可W由磨损、创伤或疾 病造成。由于软骨自我修复能力低，即使是小的软骨缺损，如果不治疗的话，能妨碍人或其 他哺乳动物无痛移动的能力，并且能导致关节表面退化。传统的软骨缺损治疗包括用关节 镜手术修整软骨表面的缺损，或用缝合修复缺损。较新地，软骨缺损的治疗包括收货软骨细 胞，然后对其进行培养，并移植回到软骨缺损W重生软骨。 然而，很多运样的治疗可能存在副作用，并且可能有受限制的长期利用，因为潜在 的病症变得严重。因此需要开发治疗软骨缺损和其它胶原蛋白缺损的新疗法，特别是改进 功效和降低副作用的疗法。
技术实现思路
阳〇化]本技术提供用于刺激胶原蛋白产生，包括刺激软骨细胞产生的方法和治疗性组合 物。方法包括在哺乳动物对象中的胶原蛋白缺损位置刺激软骨细胞产生，包括将血液来源 的组合物施用到所述位置，所述组合物包含选自比-Ira、STNF-Rl、sTNF-RII、IGF-I、EGF、 HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-e I和sIklRII的至少两种蛋白质，其中各蛋白质在所 述组合物中的浓度大于所述蛋白质在正常血液中的浓度。例如，组合物可W包含： (a)至少约 10, OOOpg/ml 的 ILl-ra ; (b)至少约 1，200pg/ml 的 sTNF-RI ;和 (C)蛋白质，选自 sTNF-RII、IGF-I、EGF、服F、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-0 1、 S比-IRII及其混合物，其中所述蛋白质的浓度高于正常血液中所述蛋白质的基线浓度。 在一些实施方式中，所述组合物进一步包含选自sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、 PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-e 1、S比-IRII及其混合物的蛋白质，其中所述蛋白质在所述 组合物中的浓度大于所述蛋白质在正常血液中的浓度。所述组合物可W包含细胞因子生成 细胞、血小板和其组合。 本技术还提供制备用于在哺乳动物对象中刺激软骨细胞产物的组合物的方法，包 括： (a)从所述对象获得细胞因子细胞悬液； (b)分级分离所述液体W产生包含白介素-I受体括抗剂的自体的蛋白质溶液； (C)将所述自体的蛋白质溶液施用到所述对象中的胶原蛋白缺损的位置。 所述细胞因子细胞悬液可W包括全血、骨髓抽吸物、脂肪组织、尿液、其部分和其 混合物。例如，分级分离可W包括将血液置于容器，可操作W将所述血液分离为两或多个部 分的分离器；W及离屯、所述分离器W产生富血小板血浆部分。所述富血小板血浆可W与固 相提取材料如聚丙締酷胺珠接触，W形成所述自体的蛋白质溶液。【附图说明】 图1的框图描述生成细胞因子组合物的方法； 图2是分级分离装置的图； 图3A和3B显示在离屯、之前（图3A)和之后（图3B)激活样品产生抗炎性细胞因 子的装置； 图4是产生血凝块的装置的图； 图5是能产生细胞因子组合物的单一装置的图； 对应的参考数字指示附图数个视图中的对应部分。应指出，本文所列图意在举例 说明本技术材料、组合物、装置和方法的一般特征，W用于描述某些实施方式的目的。运些 图不一定精确反映任意给定实施方式的特征，且不必定用于完整定义或限制本技术范围内 的特定实施方式。[OOW 专利技术详述 下列技术描述仅示例一种或多种专利技术的组合物性质、制造和应用，且不意在限制 本申请或所述其他申请中要求权利的任何特定专利技术的范围、实施和应用，所述其他申请可 能提交要求对本申请的优先权，或其中公开的专利。在本详细描述的结尾处提供关于术语 和短语的非限制性讨论，用于协助理解本技术。 本技术设及使用包含细胞因子，例如，白介素-1受体括抗剂（ILl-ra)和肿瘤坏死 因子a，的组合物通过如刺激软骨细胞产生而刺激胶原蛋白产生的方法。在各种实施方式 中，在人或其它哺乳动物对象中的刺激胶原蛋白缺损的方法包括： (a)从一个或多个哺乳动物对象获得细胞因子细胞悬液；化）分级分离细胞因子细胞悬液W生成含一种或多种蛋白质如白介素-1受体括 抗剂的蛋白质溶液；和 (C)将所述自体的蛋白质溶液施用到所述对象中胶原蛋白缺损的位置。 蛋白质组合物 本技术提供在人或其它哺乳动物对象中刺激软骨细胞产生的方法，所述方法使用 包含溶解、悬浮或另外携带从而W生理学可接受介质形式递送给哺乳动物对象的蛋白质的 组合物（本文称为"蛋白质溶液"）。在各种实施方式中，所述组合物包含产自正常哺乳动 物对象全血的蛋白质（如细胞因子）。所述组合物还包含活细胞，包括血小板、细胞因子生 成细胞和其组合。 在各种实施方式中，所述蛋白质溶液包含至少2种选自W下的蛋白质：比-Ira(白 介素-1受体括抗剂）、sTNF-RI、sTNF-RII (可溶性肿瘤坏死因子受体2)、IGF-I (膜岛素样 生长因子1)、EGF (表皮生长因子）、HGF (肝细胞生长因子）、PDGF-AB (来源于血小板的生长 因子AB)、PDGF-BB (来源于血小板的生长因子BB)、VEGF (血管内皮生长因子）、TGF-e I (转 化生长因子0 I)、SlL-IRII(可溶性白介素受体II)，其中所述组合物中各蛋白质的浓度 大于正常血液中所述蛋白质的浓度。尽管所述组合物中每一种蛋白质浓度可大于正常血液 中其各自浓度，但不必定2种W上蛋白质的浓度大于正常血液中其各自浓度。 在各种实施方式中，蛋白质溶液包括下列组分。 表1.蛋白质溶液示例性蛋白质组分 蛋白质浓度能用实施例4所示方法测量。 优选地，所述组合还包含活的细胞因子生成细胞、裂解的细胞因子生成细胞或两 者。在优选组合物中，所述蛋白质溶液包含单核细胞、粒细胞和血小板。在各种实施方式中， 蛋白质溶液包含下列组分。 表2.蛋白质溶液示例性细胞组分 应理解该浓度为种特异性。此外，应理解浓度可随着个体对象而变化。因此，在包 括从含细胞因子生成细胞的血液或其它组织生成蛋白质溶液的方法中，所述蛋白质溶液的 蛋白质和细胞浓度可与上述不同；上述值是浓度均值，如对象群体中所见。 在各种实施方式中，所述蛋白质溶液中一种或多种蛋白质或其它组分的浓度大于 正常血液中该组分的浓度。（具有所述更高组分浓度的组合物被称为"富含"运些组分。） 如本文所示，"正常"血液或其它组织中的组分浓度是获得组织的哺乳动物对象一般群体中 所见浓度，例如正常全血中。在抗炎性细胞因子组合物获自特定对象组织的方法中，蛋白质 或本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于在哺乳动物对象中的胶原蛋白缺损位置刺激软骨细胞产生的方法，包括将包含选自IL‑1ra、sTNF‑R1、sTNF‑RII、IGF‑I、EGF、HGF、PDGF‑AB、PDGF‑BB、VEGF、TGF‑β1和sIL‑1RII的至少两种蛋白质的组合物施用到所述位置，其中各蛋白质在所述组合物中的浓度大于所述蛋白质在正常血液中的浓度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·毛图什卡，K·欧肖内西，J·E·伍德尔马伊，
申请(专利权)人：拜欧米特生物制剂有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US