一种紫丁香蘑菌株及其液体菌种与制备方法技术

本发明专利技术公开了一种紫丁香蘑菌株及其液体菌种与制备方法，所述的紫丁香蘑菌株为紫丁香蘑M-012#菌株，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2015年8月21日，保藏编号：CGMCC No.11206；所述的紫丁香蘑M-012#的液体菌种是以所述紫丁香蘑菌株M-012#经斜面培养、种子培养、发酵后制成的液体菌种。所述的紫丁香蘑M-012#的液体菌种的制备方法包括斜面培养、种子培养、发酵步骤。本发明专利技术的有益效果是：一是菌丝体生物量高，可达28g/Kg，而固体菌包菌丝体生物量大约在6-13g/Kg；二是菌丝生长速度快，在直径10cm的平板上菌丝只要7d就可以长满平板；三是培养污染率低，≤2%。同时采用液体发酵法时间短，大约72~96h，而普通的固体包培养需要15d以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，具体设及一种紫下香磨菌株及其液体菌种与制备方 法。
技术介绍
紫下香磨η化/a度ull.)Cooke]是一种香味浓郁，色泽艳丽，营养丰富 的食用菌，在发过被公认为上等食物。不仅如此，紫下香磨在抗癌试验中还表现出对小白鼠 肿瘤的抑制高达90%，对艾氏癌的抑制率更是高达100%。但是目前市场上的菌种都是出于 垄断地位的法国的紫下香磨的菌种，而我国自己的紫下香磨菌种还是稀缺的，运主要是由 于我们的菌种性状不稳定，菌种的独特性导致培养方法与法国菌种培养方法不尽相同，因 此我们迫切需要研究出我国自己的菌株，打破法国在紫下香磨菌种的垄断地位，并研究出 相应的培养方法，进行配套的生产栽培技术，有效的提高我们的紫下香磨的产量等。 在紫下香磨的优良菌种的获得是关键技术环节。目前国内大多采用固体制种技 术，而很少使用液体发酵。对于固体制种技术而言，液体发酵技术具有具有菌丝生长良好、 菌球均匀、性状稳定，较少污染、培养基利用充分的优点。本专利采用液体发酵技术制作品 质优良、性状稳定的液体菌种，对后期人工栽培和医学研究提供保障。
技术实现思路
本专利技术第一目的在于提供一种紫下香磨菌株，第二目的在于提供一种紫下香磨 M-012#的液体菌种，第Ξ目的在于提供所述紫下香磨M-012 #的液体菌种的制备方法。 本专利技术第一目的是运样实现的，所述的紫下香磨菌株为紫下香磨M-012#菌株，保 藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)，保藏日：2015年8月21 日，保藏编号：CGMCCNo. 11206 ;所述紫下香磨M-012#菌株属于真菌界，担子菌口，伞菌纲， 伞菌目，口磨科，香磨属。 紫下香磨M-012#菌株的获得与鉴定 1、将采集的紫下香磨子实体内壁组织块接种到试管琼脂培养基斜面上，于18~24°C下 培养5~lOd，对分离培养的试管每天观察记录，及时剔除已污染的试管，挑选出无污染、长势 良好且菌核生成能力强的菌株，获得紫下香磨分离试管种，所述的试管琼脂培养基的配方： 马铃馨16g，葡萄糖1.6g，KH2PO40.〇3g，琼脂1.6g，Μ拆〇40. 02g，蒸馈水100ml，抑7. 0 ;培 养溫度20~28 °C。 2、将紫下香磨分离试管种菌丝体接种到平板培养皿上进行菌种纯化，培养条件为 18~24°C下避光，所述的琼脂培养基的配方：马铃馨16g，葡萄糖1.6g，KH2PO40.〇3g，琼脂 1.6g，M拆〇40.02g，蒸馈水100ml，抑7. 0;培养溫度20~28°C;2d后取尖端菌丝块接种在培 养基斜面上，所述的培养基配方：马铃馨16g，葡萄糖1.6g，KH2PO40.〇3g，琼脂1.6g，Μ拆〇4 0.02g，蒸馈水100ml，抑7. 0;于18~24°C下培养5~7d，获得紫下香磨纯化试管种。 3、采用供试子实体与对应菌丝分离物，分别按CTAB方法提取紫下香磨总DNA，进 行PCR扩增及ITS序列测定，将所测得试验样品的ITS序列提交NCBI数据库进行BLAST序 列比对分析，与NCBI中的紫下香磨（Z.Λ化劫序列Identities= 606/606(100%)，Gaps= 0/606 (0%)，分析确定分离得到的纯培养物为本专利技术所述的紫下香磨（Z.nw/a)菌丝体。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：一是菌丝体生物量高，可达28g/Kg，而固 体菌包菌丝体生物量大约在6~13g/Kg ;二是菌丝生长速度快，在直径10cm的平板上菌丝 只要7d就可W长满平板；Ξ是培养污染率低，《2%。同时采用液体发酵法时间短，大约 72~9化，而普通的固体包培养需要15dW上。 本专利技术利用云南原产地紫下香磨子实体筛选出优良菌株，为紫下香磨人工栽培提 供优良菌种。 本专利技术所提供的紫下香磨M-012#菌株保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中屯、；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年08月21日； 保藏登记入册的编号CGMCCNO. 11206。 本专利技术第二目的是运样实现的，是W所述紫下香磨菌株M-012#经斜面培养、种子 培养、发酵后制成的液体菌种。 本专利技术的第Ξ目的是运样实现的，包括斜面培养、种子培养、发酵步骤，具体包 括： A、 斜面培养：将紫下香磨菌株M-012#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，在溫度 为18~24°C下培养5~7山得试管菌种； B、 种子培养：将试管菌种接种到液体培养基中，在溫度为20~26°C下摇床培养5~lid， 得液体发酵种子； C、 发酵：将液体发酵种子按发酵培养基质量分数5~9%的量接种入发酵罐，在罐压 0. 03~0. 05MPa，溫度21~23°C，pH值7. 0~8. 0,揽拌速度130~150r/min，通气量70~90〇/〇下 培养80~90h，得到紫下香磨M-012#的液体菌种。 本专利技术解决的技术问题是：一是从紫下香磨（Z.nw/a)发生地一一云南省昆明市 双龙乡野鸭湖野生附近生长的该菌的子实体进行组织分离培养得到，具有明显的地域性特 征；二是克服现有技术菌丝生长不均匀、污染率高、培养基利用不充分等不足。其目的是提 供一种具有产量高、菌丝生长快速、抗污染的新的优良紫下香磨菌株及其培养方法。 本专利技术的有益效果是：一是菌丝体生物量高，可达28g/Kg，而固体菌包菌丝体生 物量大约在6-13g/Kg ;二是菌丝生长速度快，在直径10cm的平板上菌丝只要7d就可W长 满平板；Ξ是培养污染率低，《2%。同时采用液体发酵法时间短，大约72~9化，而普通的固 体包培养需要15dW上。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，但不W任何方式对本专利技术加W限制， 基于本专利技术教导所作的任何变换或改进，均落入本专利技术的保护范围。 本专利技术所述的紫下香磨菌株为紫下香磨M-012#菌株，保藏单位：中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)，保藏日：2015年8月21日，保藏编号：CGMCC No. 11206;所述紫下香磨M-012#菌株属于真菌界，担子菌口，伞菌纲，伞菌目，口磨科，香磨 属。 本专利技术所述的紫下香磨M-012#的液体菌种，是W所述紫下香磨菌株M-012#经斜面 培养、种子培养、发酵后制成的液体菌种。 本专利技术所述的紫下香磨M-012#的液体菌种的制备方法，包括斜面培养、种子培养、 发酵步骤，具体包括： A、 斜面培养：将紫下香磨菌株M-012#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，在溫度 为18~24°C下培养5~7山得试管菌种； B、 种子培养：将试管菌种接种到液体培养基中，在溫度为20~26°C下摇床培养5~lid， 得液体发酵种子； C、 发酵：将液体发酵种子按发酵培养基质量分数5~9%的量接种入发酵罐，在罐压 0. 03~0. 05MPa，溫度21~23°C，pH值7. 0~8. 0,揽拌速度130~150r/min，通气量70~90〇/〇下 培养80~90h，得到紫下香磨M-012#的液体菌种。 A步骤中所述的试管琼脂培养基为改良PDA培养基，其成分为：马铃馨15~17g，葡 萄糖1. 5~1. 7邑，皿2口〇4 0. 02~0. 04g，琼脂1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种紫丁香蘑菌株，其特征在于所述的紫丁香蘑菌株为紫丁香蘑M‑012#菌株，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2015年8月21日，保藏编号：CGMCC No.11206；所述紫丁香蘑M‑012#菌株属于真菌界、担子菌门、伞菌纲、伞菌目、口蘑科、香蘑属。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：桂明英，郭相，桑兰，马明，冯云利，汤昕明，
申请(专利权)人：中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53