抗CD52抗体制造技术

本发明专利技术提供抗人CD52抗体及其抗原结合片段。还提供用于制备所述抗体和片段的分离核酸、重组载体和宿主细胞。所述抗体和片段可用于治疗应用，以治疗例如自身免疫疾病、癌症和移植排斥。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】抗CD52抗体 序列表 本申请包含作为ASCII形式的文本文件以电子方式已经提交的序列表，且其在此 处以其全文通过提述并入。2014年3月11日生成的所述文件名称为001662-0041-W01_ SL. txt且大小为142, 582字节。 专利
本专利技术一般地涉及抗体，且更具体地涉及对于人⑶52具有结合特异性的抗体。 相关申请的交叉引用 本申请要求2013年3月15日提交的美国临时申请61/794, 576的优先权。该临 时申请的公开内容在本文以其全文通过提述并入。 专利技术背景 ⑶52是在多种正常和恶性类淋巴细胞（例如，T细胞和B细胞）上大量发现 的（500, 000分子/细胞）糖基化的、糖基磷脂酰肌醇（GPI)锚定的细胞表面蛋白。参 见，例如，Hale 等，J Biol Regul Homeost Agents 15:386-391(2001) ;Huh 等，Blood 92:Abstract 4199(1998) ;Elsner 等，Blood 88:4684-4693(1996) ;Gilleece 等，Blood 82:807-812(1993) ;Rodig 等，Clin Cancer Res 12:7174-7179(2006) ;Ginaldi 等，Leuk Res 22:185-191 (1998)。CD52在例如单核细胞、巨噬细胞和树突细胞等髓样细胞上以较低 水平表达，其中在成熟自然杀伤（NK)细胞、嗜中性粒细胞和造血干细胞上发现几乎不表达 (同上）。总之，CD52存在于至少95%的所有人外周血淋巴细胞和单核细胞/巨噬细胞中 (Hale G，等，"The CAMPATH-lantigen(CD52)，"Tissue Antigens, 35:178-327(1990)) 〇 ⑶52还由副睾和输精管中的上皮细胞产生，且在通过生殖道期间由精子获得（Hale 等，2001，见上文；Domagala 等，Med Sci Monit 7:325-331 (2001))。CD52 的确切生物 功能仍不清楚，但若干证据暗示其可能涉及T细胞迀移及共刺激（Rowan等，Int Immunol 7:69-77 (1995) ;Masuyama等，J Exp Med 189:979-989 (1999) ;Watanabe 等，Clin Tmmunol 120:247-259(2006))〇 已开发数种抗CD52单克隆抗体。Campath-I(还称为阿仑单抗 (alemtuzumab)、Campath?、MabCampath? )是人源化抗人CD52单克隆抗体，其展现 强效的体外细胞毒性效应（抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC)和补体依赖性细胞毒 性（CDC))。阿仑单抗识别由成熟CD52蛋白羧基端四个氨基酸和带负电荷的GPI锚定部分 构成的表位。其他抗人CD52单克隆抗体也已产生。然而，在保存中和特定pH和温度条件 下，若干这些抗体的结合亲和力降低。因此，对于具有降低的经历该变化的倾向的抗CD52 抗体存在需求。 专利技术概述 本专利技术的特征为经过工程化从而随着时间经过并且在高pH和温度条件下仍保持 结合亲和力的抗人CD52抗体。本文中的"抗体"和"免疫球蛋白"可互换使用。还提供包 含编码抗CD52抗体轻链或重链的序列的分离核酸、重组载体和宿主细胞，和制备抗CD52抗 体的方法。 Ab26是具有SEQ ID NO: 3减去信号序列的重链氨基酸序列和SEQ ID NO: 4减去信 号序列的轻链氨基酸序列的人源化抗人CD52单克隆抗体。Ab26在保存期间CD52的结合亲 和力和效力会随时间降低。我们意外发现在轻链CDRl位置11具有某些单一氨基酸取代的 Ab26变体（例如，单克隆抗体Ab21、Abl6和Ab20)，相比Ab26,其不仅保留或超越Ab26的 人⑶52结合亲和力，还展示显著改善的稳定性。所述变体抗体如Ab21、Abl6和Ab20相比 Ab26已展示体外及体内可比较或改善的生物学效力。这些变体可用于治疗及诊断应用。 在一些实施方案中，本专利技术的抗人⑶52抗体或抗原结合片段包含重链可变区和 轻链可变区，其中所述重链可变区包含：SEQIDN0:7的重链⑶R1、SEQIDN0 :8的重链 CDR2;和SEQ ID N0:9的重链CDR3,且其中所述轻链可变区包含：SEQ ID N0:86的轻链 CDR1;SEQ ID N0:34的轻链CDR2;和SEQ ID N0:35的轻链CDR3。在进一步的实施方案中， SEQ ID N0:86 的残基 11 可为 1(、1?、〇、!1、3、￥、4、03、？、1、1^、]\^、1'或￥。在一个实施方案 中，SEQ ID N0:86的残基11是K。在另一实施方案中，SEQ ID N0:86的残基11是R。在另 一实施方案中，SEQ ID NO:86的残基11是Q。 在一些实施方案中，抗⑶52抗体或片段的重链可变区包含SEQ ID N0:59。在另外 的实施方案中，抗CD52抗体或片段的轻链可变区包含选自SEQ ID N0:68、69、70、71、72、73、 74、75、76、77、78、79、80、81、82和83的序列。举例来说，本专利技术抗体或片段的重链和轻链分 别可包含：a) SEQ ID NO: 59 和 68 ;b) SEQ ID NO: 59 和 69 ;c) SEQ ID NO: 59 和 70 ;d) SEQ ID NO:59 和 71 ;e)SEQ ID NO:59 和 72 ;f)SEQ ID NO:59 和 73 ;g)SEQ ID NO:59 和 74 ;h)SEQ ID NO:59 和 75 ;i)SEQ ID NO:59 和 76 ;j)SEQ ID NO:59 和 77 ;k)SEQ ID NO:59 和 78 ;1) SEQ ID NO: 59 和 79 ;m) SEQ ID NO: 59 和 80 ;n) SEQ ID NO: 59 和 81 ;〇) SEQ ID NO: 59 和 82; 或 p)SEQ ID NO:59 和 83。 在一些实施方案中，抗体或片段包含无信号序列的SEQ ID NO:3重链氨基酸序列。 在另外的实施方案中，抗体或片段包含选自SEQ ID N0:43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、 53、54、55、56、57和58的轻链氨基酸序列。举例来说，抗体或片段可包含（a)无信号序列 的SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:49的轻链氨基酸序列；(b)无信号序列的 SEQ ID N0:3的重链氨基酸序列和SEQ ID N0:53的轻链氨基酸序列；或（c)无信号序列的 SEQ ID N0:3的重链氨基酸序列和SEQ ID N0:54的轻链氨基酸序列。 在一些实施方案中，本专利技术抗体为免疫球蛋白G(IgG)。在另外的实施方案中，抗体 包含人Fc区（例如，人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4Fc区）。本专利技术还涵盖本专利技术任何抗体的 抗原结合片段，其中所述片段选自scFv片段、Fv片段、Fab片段、F (ab'）2片段、微型抗体、 双抗体（diabo本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗人CD52的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：(a)SEQ ID NO:7的重链CDR1；(b)SEQ ID NO:8的重链CDR2；和(c)SEQ ID NO:9的重链CDR3；其中所述轻链可变区包含：(a)SEQ ID NO:86的重链CDR1；(b)SEQ ID NO:34的重链CDR2；和(c)SEQ ID NO:35的重链CDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·邱，R·R·魏，C·Q·潘，R·森达克，
申请(专利权)人：建新公司，
类型：发明
国别省市：美国;US