【技术实现步骤摘要】
一种基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法
本专利技术涉及生物
,特别是涉及一种基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法。
技术介绍
百合是百合科百合属的多年生草本球根植物,原产于中国,主要分布在亚洲东部、欧洲、北美洲等北半球温带地区,全球已发现有至少120个品种,其中55种产于中国。近年更有不少经过人工杂交而产生的新品种,如亚洲百合、香水百合、火百合等。鳞茎含丰富淀粉,可食,亦作药用。百合鲜食干用均可。百合是中国传统出口特产。百合从古至今都是受人们喜爱的世界名花,百合花姿雅致,叶片青翠娟秀,茎干亭亭玉立,是名贵的切花新秀,在中国百合具有百年好合美好家庭、伟大的爱之含意,有深深祝福的意义。百合现有的繁殖方法在生产上主要有鳞片繁殖、籽球繁殖和珠芽繁殖3种,具有繁殖效率慢,成球率较低或小鳞茎生根数量较少,繁殖系数低,且易受自然条件限制的缺点,随着生物技术的发展,组织培养技术在一定程度上提高了繁殖效率,但仍具有操作复杂、成本投入大、污染率等缺点。不能满足遗传转化过程中的大批量需求。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种转化周期短、污染率低、成本低、操作简便的基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法。一种基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法,包括如下步骤:(A)在第一液体培养基中进行农杆菌培养;(B)进行菌液的离心,收集菌体,采用第二液体培养基重新悬浮菌体;(C)取洗净的百合鳞片浸没于重悬后的菌体中,取出百合鳞片,将其基部浸入所述第二液体培养基中,进行黑暗培养,即共培养;(D)取出共培养后的百合鳞片,置于喷雾式植物反应器中,进行百合鳞 ...
【技术保护点】
一种基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法,其特征在于:包括如下步骤:(A)在第一液体培养基中进行农杆菌培养;(B)进行菌液的离心,收集菌体,采用第二液体培养基重新悬浮菌体;(C)取洗净的百合鳞片浸没于重悬后的菌体中,取出百合鳞片,将其基部浸入所述第二液体培养基中,进行黑暗培养,即共培养;(D)取出共培养后的百合鳞片,置于喷雾式植物反应器中,进行百合鳞茎芽诱导,采用喷淋溶液对百合鳞茎进行喷淋处理,获得诱导的小鳞茎;(E)将诱导的小鳞茎进行移栽,进行转基因植株的筛选。
【技术特征摘要】
1.一种基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法,其特征在于:包括如下步骤:(A)在第一液体培养基中进行农杆菌培养;(B)进行菌液的离心,收集菌体,采用第二液体培养基重新悬浮菌体;(C)取洗净的百合鳞片浸没于重悬后的菌体中,取出百合鳞片,将其基部浸入所述第二液体培养基中,进行黑暗培养,即共培养;(D)取出共培养后的百合鳞片,置于喷雾式植物反应器中,进行百合鳞茎芽诱导,采用喷淋溶液对百合鳞茎进行喷淋处理,获得诱导的小鳞茎;所述喷雾式植物反应器包括第一雾培箱(1)、第二雾培箱(2)、水箱(3)、回收水箱(4)和控制系统:所述第一雾培箱(1)包括长方形的第一底板(101)和顶部水平支架(102),所述顶部水平支架(102)的左端通过两个第一侧支架分别与所述第一底板(101)的左侧两端相连,所述顶部水平支架(102)的右端通过两个第一侧支架分别与所述第一底板(101)的右侧两端相连;所述第一雾培箱(1)的内部包括第一培养架(103);所述第一底板(101)为倾斜设置,与水平面的夹角为10~15°,在所述第一底板(101)的较低一侧设置有第一集水槽(104);在所述第一培养架(103)的上部水平设置有第一导水管(105),在所述第一导水管(105)的上部从左至右依次等距设置有6个第一雾化喷头(106),在所述第一导水管(105)的下部从左至右依次等距设置有7个第二雾化喷头(107),所述第一雾化喷头(106)和所述第二雾化喷头(107)均与所述第一导水管(105)相连通;所述第二雾培箱(2)包括均为长方形的第二底板(201)和顶板(202),所述顶板(202)的长与所述第二底板(201)的长一致,宽小于所述第二底板(201)的宽,所述顶板(202)的4个端点分别通过第二侧支架与所述第二底板(201)的4个端点相连,所述第二雾培箱(2)的内部包括第二培养架(203);所述第二底板(201)为倾斜设置,与水平面的夹角为10~15°,在所述第二底板(201)的较低一侧设置有第二集水槽(204);在所述顶板(202)下部前后水平设置有第二导水管(205)和第三导水管(206);所述第一培养架(103)和所述第二培养架(203)均由上下平行设置的多个置物网(5)构成,多个所述置物网(5)之间为可拆卸地连接,在每个所述置物网(5)上间隔设置有多个置物海绵(6);在所述第二培养架中(203),在最顶端的所述置物网(5)的下部前后水平设置有第四导水管(207)和第五导水管(208),在所述第二导水管(205)、所述第三导水管(206)、所述第四导水管(207)、所述第五导水管(208)上从左至右依次等距设置有7个第三雾化喷头(209);所述水箱(3)通过第一管路(7)与所述第一导水管(105)相连,通过第二管路(8)分别与所述第二导水管(205)、所述第三导水管(206)、所述第四导水管(207)和所述第五导水管(208)相连;所述回收水箱(4)的入口通过第三管路(9)与所述第一集水槽(104)的底部相连,通过第四管路(10)与所述第二集水槽(204)的底部相连,所述回收水箱(4)的出口通过第五管路(11)与所述水箱(3)相连;控制系统,在所述第一管路(7)、所述第二管路(8)、所述第三管路(9)、所述第四管路(10)、所述第五管路(11)上均设置有阀门,在所述回收水箱(4)的入口处、出口处以及所述水箱(3)的出口处均设置有水泵和驱动装置,所述控制系统与所述驱动装置相连;(E)将诱导的小鳞茎进行移栽,进行转基因植株的筛选。2.根据权利要求1所述的基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转...
【专利技术属性】
技术研发人员:张秀海,杜运鹏,陈绪清,王璐,邢礼军,张倩,毕彧,
申请(专利权)人:北京农业生物技术研究中心,
类型:发明
国别省市:北京;11
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