血栓靶向释放RGDV的抗栓剂聚天冬酰-RGDV的合成和应用制造技术

本发明专利技术涉及血栓靶向的聚天冬酰-RGDV，涉及它的制备方法，涉及它的纳米结构，涉及它在大鼠血栓模型上的靶向抗血栓作用。因而本发明专利技术阐明了聚天冬酰-RGDV作为靶向抗血栓剂的临床应用前景。本发明专利技术属于生物医药领域。

【技术实现步骤摘要】
血栓靶向释放RGDV的抗栓剂聚天冬酰-RGDV的合成和应用
本专利技术涉及血栓靶向的聚天冬酰-RGDV，涉及它的制备方法，涉及它的纳米结构，涉及它在大鼠血栓模型上的靶向抗血栓作用。因而本专利技术阐明了聚天冬酰-RGDV作为靶向抗血栓剂的临床应用前景。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
血小板血栓是血栓形成的起始阶段，可以分为血小板粘附、活化和聚集三个过程。在血小板血栓形成过程中，血小板膜上GPIIb/IIIa活化，构象发生改变，然后在Ca2+的参与下，与纤维蛋白原或vWF上的RGD四肽序列特异性结合将血小板和红血球偶联起来，形成血栓。在血小板聚集过程中，纤维蛋白原或vWF上的RGDV与活化的血小板表面受体GPIIb/IIIa结合起至关重要的作用。外源性RGDV与被GPIIb/IIIa识别并竞争性抑制纤维蛋白原或vWF与血小板结合，抑制血小板聚集。血栓形成部位富集了活化的血小板，这些血小板是血栓形成的重要构件。如果能把RGDV定向释放到血栓形成部位，就可以使这些活化的血小板不能参与血栓形成，从而有效地抑制血栓形成。可是，这个目标在本专利技术申请之前没有达到。根据这些认识，专利技术人提出了本专利技术。本专利技术的突出创造性在于用聚天冬酰-RGDV将RGDV输送到血栓形成部位，然后在血栓中有效地释放RGDV，发挥靶向抗血栓作用。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是采用常规的液相合成，逐步接肽制备HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl。本专利技术的第二个内容是采用标准方法，制备平均分子量为20964，链长为173个天冬氨酸残基的聚天冬氨酸。本专利技术的第三个内容是采用EDC法将HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl偶联到聚天冬氨酸的羧基上然后脱去RGDV的侧链和羧端保护基，制备聚天冬酰-RGDV。本专利技术的第四个内容是测定聚天冬酰-RGDV的抗血小板聚集活性。本专利技术的第五个内容是测定聚天冬酰-RGDV的抗血栓活性。本专利技术的第六个内容是测定聚天冬酰-RGDV对GPIIb/IIIa的影响。本专利技术的第七个内容是测定聚天冬酰-RGDV在血栓中释放RGDV。本专利技术中所出现的缩略语的说明：RGDVArg-Gly-Asp-ValPD聚天冬氨酸聚天冬酰-RGDV聚天冬酰-Arg-Gly-Asp-ValTHF四氢呋喃DCC二环己基酰亚胺DCU二环己基脲OBzl苄氧基Boc叔丁氧羰基Tos对甲苯磺酸基OMe甲氧基HOBtN-羟基苯并三唑NMMN-甲基吗啉EDC1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺PAF血小板活性因子ADP腺苷二磷酸AA花生四烯酸TE凝血酶附图说明图1.聚天冬酰-RGDV的合成路线.i)85％H3PO4，180℃，减压；ii)NaOH，H2O，0℃；iii)EDC/HOBt；iv)DCC，HoBt，0℃；v)NaOH(2N)，H2O，0℃；vi)氯化氢的乙酸乙酯溶液(4N)；vii)CF3CO2H，CF3SO3H。图2.聚天冬酰-RGDV治疗的大鼠血液提取物的FT-MS谱。图3.聚天冬酰-RGDV治疗的大鼠血栓提取物的FT-MS谱。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例1制备HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl1)制备Boc-Arg(Tos)-Gly-OBzl将4.986g(11.64mmol)Boc-Arg(Tos)，1.310g(9.7mmol)HOBt溶于30mL无水THF，往得到的溶液中加2.398g(11.64mmol)DCC的无水THF溶液，冰浴搅拌20min，得到反应液I。将3.273g(9.7mmol)Tos·Gly-OBzl与30mL无水THF的溶液用NMM调pH9，得到反应液II。将反应液II加到反应液I中，室温反应12小时。TLC(丙酮∶石油醚＝2∶1)显示反应完成。过滤除去DCU沉淀，滤液减压浓缩，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，过滤除去DCU沉淀。滤液分别用饱和NaHCO3(50mL×1)，5％NaHCO3(50mL×2)，饱和NaCl(50mL×3)，5％KHSO4(50mL×3)，饱和NaCl(50mL×3)，5％NaHCO3(50mL×3)，饱和NaCl(50mL×3)洗，加无水NaSO4干燥。滤出干燥后的乙酸乙酯溶液，减压浓缩得到的5.339g淡黄色固体粗品用硅胶柱纯化(丙酮∶石油醚＝1∶4)，得到4.93g(88％)纯品，为无色固体。2)制备Boc-Arg(Tos)-Gly在冰浴下将5.291g(9.19mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-OBzl溶于20mL甲醇，往得到的溶液中加14mLNaOH水溶液(2N)，搅拌1小时，TLC(丙酮∶石油醚＝1∶1)显示反应完成。反应液用饱和KHSO4调pH7，减压浓缩。残留液先用NaOH水溶液(2N)调pH9，再用乙醚萃取。水层用饱和KHSO4调pH2，用50mL乙酸乙酯萃取3次，合并的乙酸乙酯萃取液加无水NaSO4干燥。滤出干燥后的乙酸乙酯溶液，减压浓缩得到3.782g(84％)Boc-Arg(Tos)-Gly，为无色固体。ESI-MS(m/e)：377[M+H]+。3)制备Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl按照制备Boc-Arg(Tos)-Gly-OBzl的方法，从2.716g(8.4mmol)Boc-Asp(OBzl)和2.657g(7mmol)Tos·Val-OBzl，得到2.8225g(79％)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl，为无色固体。4)制备HCl·Asp(OBzl)-Val-OBzl在冰浴下将7.8345g(15.2mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl溶于6mL乙酸乙酯中，往得到的溶液中加入20mL氯化氢的乙酸乙酯溶液，搅拌4小时，TLC(丙酮∶石油醚＝1∶5)显示反应完成，减压抽去乙酸乙酯。残留物加20mL无水乙醚溶解，溶液减压浓缩。该操作反复5次，以除去产品中的氯化氢。残留物最后加5mL无水乙醚研磨，得到0.864g(90％)产品，为无色粉末，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/e)：413[M+H]+。5)制备Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl按照制备Boc-Arg(Tos)-Gly-OBzl的方法，从4005mg(8.247mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly和3.106g(6.873mmol)HCl·Asp(OBzl)-Val-OBzl得到5.9g(97％)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl。ESI-MS(m/e)：880[M+H]+.1HNMR(500MHz，CDCl3)d/ppm＝7.72(s，3H)，7.49(s，2H)，7.29(d，10H)，7.24(s，2H)，6.44(m，2H)，5.64(m，1H)，5.07(m，4H)，4.86(s，1H)，4.37(d，J＝5.5Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.97(d，J＝15Hz，1H)，3.82(s，1H)，3.17(s，1H)，2.本文档来自技高网...

【技术保护点】
血栓靶向释放RGDV的抗血栓剂聚天冬氨酰‑RGDV。

【技术特征摘要】
1.具有以下结构的聚天冬氨酰-RGDV。2.制备权利要求1所述聚天冬氨酰-RGDV的方法，该方法包括下面四个步骤：(1)采用液相合成方法逐步接肽,合成HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;(2)制备具有以下结构的聚天冬氨酸;(3)把HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl连接到上面步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵明，彭师奇，王玉记，吴建辉，陈双玲，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京;11