α-突触核蛋白抗体及其用途制造技术

本发明专利技术描述了对聚合形式的α-突触核蛋白具有高亲和性且对单体形式的α-突触核蛋白具有低亲和性的抗体。该抗体用于诊断神经退行性疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】a-突触核蛋白抗体及其用途 专利
本专利技术涉及对a-突触核蛋白聚合体（例如淀粉样纤维、初原纤维或低聚物）具 有高结合亲和力且对a-突触核蛋白低聚物具有低结合亲和力的抗体或其片段。本专利技术还 涉及这些抗体及片段在诊断、治疗和预防与a-突触核蛋白相关的神经病理中的用途。 背景 突触核蛋白是小分子蛋白家族，约14kDa，其在神经组织中高水平表达。该家族的 三个成员是a-突触核蛋白、(6-突触核蛋白和y-突触核蛋白。a-突触核蛋白主要在脑组织中表达，并主要位于突触前神经元末梢。人类形式的 a_突触核蛋白的一级结构是由140个氨基酸的多肽构成。人类a-突触核蛋白的野生型 序列可见于图20(SEQIDN0:49)。a-突触核蛋白通常以可溶性单体蛋白存在，但根据其 环境可采用若干不同的折叠构象。单体a-突触核蛋白也可以聚合成低聚物和高分子量不 溶性纤维。 与突触核蛋白异常相关的疾病通常被称为共核蛋白病（synucleinopathy)。共 核蛋白病包括神经退行性疾病、帕金森氏病（PD)、路易氏体失智症（DLB)和多系统萎缩症 (MSA)。在共核蛋白病中，已表明，在和DLB的脑匀浆中可溶性a-突触核蛋白低聚物与 正常脑相比要高。此外，常常表征和DLB晚期的神经病理性病变（路易氏体）已经基本 上被认为是由纤维状a-突触核蛋白沉积物组成。 市售a-突触核蛋白抗体是已知的，并且被广泛地用于表征脑中的病理。然而， 这种抗体是非特异性的，并且既识别a-突触核蛋白的单体形式又识别a-突触核蛋白的 聚合形式，并且无法识别a-突触核蛋白的所有聚合形式。 已知的a-突触核蛋白抗体包括Syn-I(BD生物科学（BDBiosciences))和 mAb211 (圣克鲁斯生物技术有限公司（SantaCruzBiotechnology))，已知它们同样结合 a_突触核蛋白的单体形式和聚合形式。W02011/104696公开了特异性识别初原纤维形式的a-突触核蛋白的抗体。这些 抗体显示与a_突触核蛋白原纤维和单体的低结合亲和力。
技术实现思路
本专利技术涉及对a_突触核蛋白聚合体具有高结合亲和力且对单体形式的a_突触 核蛋白具有低结合亲和力的抗体及其片段。 本专利技术还涉及包含这种抗体或其片段的组合物、使用所述抗体或片段检测a_突 触核蛋白聚合体的存在的方法，以及它们在诊断与a-突触核蛋白相关的疾病中的用途。 在其它实施方案中，本专利技术涉及包含这种抗体或其片段的组合物和使用所述抗体 或片段治疗或预防与a-突触核蛋白的病理相关的疾病的方法。 使用对a_突触核蛋白聚合体有特异性的抗体可帮助揭示新的和其它共核蛋 白病的病理。 通过产生对a_突触核蛋白聚合体有特异性并对a_突触核蛋白单体具有低结合 亲和力的抗体，本专利技术提供了跟踪与a-突触核蛋白相关的神经退行性疾病的进展的新工 具。本专利技术的抗体还提供了可用于治疗与a-突触核蛋白相关的疾病的抗体。【附图说明】 现在将通过举例并参考附图来说明本专利技术，在附图中： 图1示出如实施例1中所描述的用a-突触核蛋白原纤维免疫的宿主（宿主19、 22和23)和用a-突触核蛋白低聚物免疫的宿主（宿主210、211和212)的效价检测结果。 图2示出如实施例2所描述的用于筛选杂交瘤对a-突触核蛋白聚合体（原纤维 (F)、低聚物（0)和单体（M))的特异性的点图（dotplots)结果。 图3示出如实施例4所描述的使用抗体Syn-Fl、Syn-F2、Syn-01、Syn-02、Syn-03 和Syn-04以及对照Syn-I抗体（BD生物科学（BDBiosciences))进行的抑制ELISA的结 果。 图4示出如实施例5⑷所描述的抗体Syn-Fl、Syn-F2、Syn-01、Syn-02、Syn-03 和Syn-04以及Syn-I与由不同蛋白形成的淀粉样纤维的交叉反应性的结果。图 5 示出如实施例 5(B)所描述的抗体Syn-Fl、Syn-F2、Syn-01、Syn-02、Syn-03 和Syn-04以及Syn-I与由0 -突触核蛋白和y-突触核蛋白形成的淀粉样纤维的交叉反 应性。 图 6 示出如实施例 5 (C)所描述的抗体Syn-Fl、Syn-F2、Syn-01、Syn-02、Syn-03 和Syn-04以及Syn-I与由a-突触核蛋白肽NAC(61-98)、NAC(61-75)和截断型a-突触 核蛋白（1-122)形成的淀粉样纤维的交叉反应性。 图7示出如实施例6所描述的使用Biacore的对于单克隆抗体（mAb)Syn-Fl、 Syn-F2、Syn-Ol、Syn-02、Syn-03 和Syn-04 以及mAb211 (圣克鲁斯生物技术有限公司（Santa CruzBiotechnology))的传感图结果。 图8示出如实施例7所描述的用于表位确定而通过斑点杂交进行的对于mAb Syn-Fl、Syn-F2、Syn-01、Syn-02、Syn-03 和Syn-04,以及Syn-I抗体（对照）的肽扫描结 果。 图9示出如实施例7所描述的通过ELISA进行的肽扫描的结果。用本专利技术的单克 隆抗体A)Syn-Fl、B)Syn-F2、C)Syn-01、D)Syn-02、E)Syn-03 和F)Syn-04,或者用对照抗体 G)Syn211、H)N-19、I)FL-140、J)Syn-l、K)3B6 和L)5C2 探测板。图10示出如实施例7所描述的对放置在肽扫描ELISA的板上的X射线胶片的绘 图。对照抗体119、？1-140、502、3711-1、3711-211、386的绘图示于图10仏）中。本专利技术的 抗体Syn-Fl、Syn-F2、Syn-01、Syn-02、Syn-03 和Syn-04 示于图 10(B)中。 图11示出如实施例8所描述的用于检测a-突触核蛋白聚合体的夹心ELISA的 结果。抗体Syn-Fl、Syn_F2、Syn-01、Syn-02、Syn-03 和Syn-04,以及Syn-I抗体被用作捕 获抗体，FL-140被用作检测抗体。 图12示出如实施例9所描述的用于检测磷酸化Serl29-a-突触核蛋白聚合 体的夹心ELISA的结果。抗体Syn-02和Syn-F2,以及Syn-I被用作捕获抗体，并且兔抗 P-S129-a-突触核蛋白被用作检测抗体。图13示出如实施例10所描述的来自未患帕金森氏病的受试者的对照病例的组织 的免疫组织化学分析。 图14示出如实施例10所描述的来自帕金森氏病病例的组织的免疫组织化学分 析。 图15示出如实施例10所描述的来自多系统萎缩病例的组织的免疫组织化学分 析。 图16示出如实施例11所描述的来自帕金森载体ro患者（A)、渐进性DLB患者（B) 和典型患者的组织样品中Syn-02染色的结果。 图17示出如实施例12所描述的来自海马CA2区（A)和内嗅皮层神经突⑶的脑 切片的处理的用Syn-F2抗体染色的结果。切片进行以下处理：1)未处理，2)在柠檬酸盐缓 冲液中在120°C下高压灭菌10分钟，3)甲酸15分钟，或4)20yg/ml蛋白酶K处理。具有 Syn-I抗体的对照5)在已用甲酸处理15分钟的组织样品上进行。 图18示出如实施例14所描述的通过BiFC荧光分析显本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体或其片段，所述抗体或其片段对α‑突触核蛋白聚合体具有高结合亲和力且对突触核蛋白单体具有低结合亲和力。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：O·埃尔阿格纳夫，
申请(专利权)人：阿联酋大学，
类型：发明
国别省市：阿联酋;AE