IFT52基因在骨质疏松症诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了IFT52基因可以作为骨质疏松症早期诊断的分子标志物。本发明专利技术首先利用高通量测序检测小样本研究对象差异基因的表达情况，然后使用QPCR在大样本中进行差异表达基因的验证。本发明专利技术的研究成果表明可以通过检测血液中IFT52基因表达情况来判断受试者是否患有骨质疏松症，该检测方法可用于骨质疏松症的早期诊断，具有及时性、准确性的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子诊断领域，涉及一种用于骨质疏松症诊断的分子标志物，具体涉 及血液中的分子标志物-IFT52基因在制备诊断骨质疏松症的产品中的应用。
技术介绍
骨质疏松症（osteoporosis，0P)是多种原因引起的一组骨病，骨组织有正常的钙 化，钙盐与基质呈正常比例，以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病变。在多数骨 质疏松中，骨组织的减少主要由于骨质吸收增多所致。以骨骼疼痛、易于骨折为特征。 世界卫生组织已将骨质疏松列为仅次于心血管疾病的第二大危害人类健康的疾 病。据中国健康促进基金会最新发布的《2013中国骨质疏松骨折防治蓝皮书》显示，骨质 疏松骨折是一种脆性骨折，即在受到轻微创伤或日常活动中遭受低能量外伤即可发生的骨 折。骨质疏松骨折的常见部位是脊椎、髋骨和前臂远端。我国50岁以上人群约6944万人 患有骨质疏松症，约2. 1亿人骨量偏低。北京等地区流行病学调查显示，50岁以上女性脊椎 骨折的患病率为15%，相当于每7个50岁以上的女性中就有一个发生过脊椎骨折。 骨质疏松症的检测包括实验室检查指标的检测和辅助检测。 实验室检查指标： 骨质疏松症患者部分血清学生化指标可以反应骨转换（包括骨形成和骨吸收） 状态，在骨的高转换状态（例如I型骨质疏松症）下，这些指标可以升高，也可用于监测 治疗的早期反应。但其在骨质疏松症中的临床意义仍有待于进一步研究。这些生化测量 指标包括：骨特异的碱性磷酸酶（Bone-specificalkalinephosphatase，反应骨形成）、 抗酒石酸酸性磷酸酶（tartratedresistantacidphosphatse，反应骨吸收）、骨f丐素 (Osteocalcin，反应骨形成）、1 型原胶原肽（TypeIprocollagenpeptidase，反应骨形 成）、尿吡啶啉（Urinarypyridinoline)和脱氧吡啶啉（Urinarydeoxypyridinoline，反 应骨吸收）、I型胶原的N-C-末端交联肽（cross-linkedN-andC-telopeptideoftype Icollagen，反应骨吸收）。正如前面所提到的，使用生化指标检测骨质疏松症的精确度不 够。 辅助检查：包括骨影像学检查和骨密度检测。辅助检查的对象一般都是骨质疏松 症的晚期患者，不能用于早期骨质疏松症患者的筛查。 基于现有技术中检测骨质疏松症的手段的局限性，寻找一种有效的能够在早期即 可诊断骨质疏松症发生的方法是亟待解决的问题。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于骨质疏松症 (Osterarthritis，0A)早期诊断的分子标志物。相比传统的骨质疏松症的诊断方法，使用 基因标志物来诊断骨质疏松症的具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就 能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。 为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： 本专利技术提供了检测IFT52基因表达的产品在制备诊断骨质疏松症的工具中的应 用。 进一步，上面所提到的检测IFT52基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量 PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测IFT52基因表达以诊断骨质疏松症 的产品。 进一步，所述用RT-PCR诊断骨质疏松症的产品至少包括一对特异扩增IFT52基因 的引物；所述用实时定量PCR诊断骨质疏松症的产品至少包括一对特异扩增IFT52基因的 引物；所述用免疫检测诊断骨质疏松症的产品包括：与IFT52蛋白特异性结合的抗体；所述 用原位杂交诊断骨质疏松症的产品包括：与IFT52基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯 片诊断骨质疏松症的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与IFT52蛋白特 异性结合的抗体，基因芯片包括与IFT52基因的核酸序列杂交的探针。 在本专利技术的具体实施方案中，所述用实时定量PCR诊断骨质疏松症的产品至少包 括一对特异扩增IFT52基因的引物的序列如SEQIDN0. 3和SEQIDN0. 4所示。 优选地，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。其中，高通量 测序平台是一种特殊的诊断工具，检测IFT52基因表达的产品可以应用于该平台实现对 IFT52基因的表达情况的检测。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建 将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基 因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知IFT52基因的异常与骨质疏松症相关也 属于IFT52基因的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。 本专利技术还提供了一种诊断骨质疏松症的工具，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试 纸、或高通量测序平台。 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定 在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测IFT52基因转录水平的针对 IFT52基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的IFT52 蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括IFT52基因在内的多个基因（例如，与骨 质疏松症相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括IFT52蛋白在内 的多个蛋白质（例如与骨质疏松症相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与骨质疏 松症的标志物同时检测，可大大提高骨质疏松症诊断的准确率。 其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试 剂盒包括用于检测IFT52基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括IFT52蛋白 的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯 片方法检测IFT52基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对IFT52基 因的引物和/或探针。根据IFT52基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测IFT52 基因表达水平的引物和探针。 与IFT52基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其 它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结 合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述 探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针 长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最 长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探 针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。 所述高通量测序平台包括检测IFT52基因表达水平的试剂。 所述试纸包括试纸载体和固定在试纸载体上的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够检测 IFT52基因的转录水平。 进一步，所述IFT52蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述IFT52 蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰（例如，，嵌合抗体、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与IFT52蛋白的结合能力即可。用于蛋白质 水平的抗体的制备时本领域技本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测IFT52基因表达的产品在制备诊断骨质疏松症的工具中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖枫，杨承刚，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11