本发明专利技术公开了基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂盒。本发明专利技术所提供的基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂盒，依赖于病毒性出血性败血症病毒指纹序列，所述病毒性出血性败血症病毒指纹序列为序列表中SEQ ID No.5的第451-467位核苷酸；所述试剂盒包括病毒性出血性败血症病毒指纹序列的测序引物和扩增病毒性出血性败血症病毒指纹序列的引物对；所述测序引物为名称为VHSV-S的序列表中SEQ ID No.8所示的单链DNA；所述扩增病毒性出血性败血症病毒指纹序列的引物对为名称为VHSV-P的由序列表中SEQ ID No.6所示的单链DNA和SEQ ID No.7所示的单链DNA组成的引物对。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
中基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试 剂盒。
技术介绍
鲤春病毒血症（SVC)、病毒性出血性败血症（VHS)、传染性造血器官坏死病（IHN) 是同被列为《中华人民共和国进境动物一、二类传染病、寄生虫病名录》的二类传染病，SVC、 VHS和IHN分别是《中华人民共和国动物防疫法》规定的二类和三类疫病，这三种疫病都是 国际兽疫局0IE名录中的重要疫病。VHS困扰欧洲虹鳟鱼达50多年，被认为是欧洲虹鳟鱼养殖业经济损失的头号杀 手，VHS逐渐在其他品种中也有报道。这3种疫病均是由RNA病毒引起的急性高度传染性疾 病，可侵害多种海水和淡水养殖鱼类，在欧、美、日、韩及部分亚洲国家流行，可通过鱼体及 所产卵、精液、尿、粪便以及污染的饲料、水等传播，对养殖场造成致命打击，危害非常严重。 鲤春病毒血症病毒（SVCV)引起包括鲤鱼在内的很多水生动物的急性高度传染性 疾病；传染性造血器官坏死病毒（IHNV)引起鲑科多种鱼的致死性疾病，通过污染的水、饲 料和粪便等传播，幼鱼和鱼苗死亡率可达100%，成鱼感染可终身带毒并散毒；病毒性出血 性败血症病毒（VHSV)可引起各种年龄的鲑科多种鱼发病，死亡率达80-100%，特别是幼鱼 和鱼苗。 目前传统的病毒分离及血清学诊断方法操作繁琐，无法实现对不同亚型病毒的同 步检测，RT-PCR方法也无法达到对病毒进行快速、准确、高通量检测分型的目的，因而目前 急需一种能够对SVCV、VHSV和IHNV进行高通量快速排查的集成化诊断技术。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何鉴定病毒性出血性败血症病毒。 为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列 的物质在制备基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂或试剂盒中的应用。 本专利技术所提供的检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质在制备基于焦磷 酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂或试剂盒中的应用中，所述病毒性出血性败血 症病毒指纹序列为序列表中SEQIDNo. 5的第451-467位核苷酸。 上述应用中，所述检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质可包括病毒性出 血性败血症病毒指纹序列的测序引物和/或扩增病毒性出血性败血症病毒指纹序列的引 物对。 上述应用中，所述测序引物可为名称为VHSV-S的序列表中SEQIDNo. 8所示的单 链DNA;所述扩增病毒性出血性败血症病毒指纹序列的引物对可为名称为VHSV-P的由序列 表中SEQIDNo. 6所示的单链DNA和SEQIDNo. 7所示的单链DNA组成的引物对。 上述应用中，所述SEQIDNo. 6所示的单链DNA和/或SEQIDNo. 7所示的单链 DNA可用生物素标记。 在本专利技术的一个实施例中，SEQIDNo. 7所示的单链DNA的5'端有生物素标记。 为解决上述技术问题，本专利技术还提供了基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病 毒检测试剂或试剂盒。 本专利技术所提供的基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂或试剂盒， 包括检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质；所述病毒性出血性败血症病毒指纹序 列为序列表中SEQIDNo. 5的第451-467位核苷酸。 上述试剂或试剂盒中，所述检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质可包括 病毒性出血性败血症病毒指纹序列的测序引物和/或扩增病毒性出血性败血症病毒指纹 序列的引物对。 上述试剂或试剂盒中，所述测序引物可为名称为VHSV-S的序列表中SEQIDNo. 8 所示的单链DNA;所述扩增病毒性出血性败血症病毒指纹序列的引物对可为名称为VHSV-P 的由序列表中SEQIDNo. 6所示的单链DNA和SEQIDNo. 7所示的单链DNA组成的引物对。 上述试剂或试剂盒中，所述SEQIDNo. 6所示的单链DNA或SEQIDNo. 7所示的 单链DNA可用生物素标记。 在本专利技术的一个实施例中，SEQIDNo. 7所示的单链DNA的5'端有生物素标记。 为解决上述技术问题，本专利技术还提供了基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病 毒检测试剂或试剂盒的制备方法。 本专利技术所提供的基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂或试剂盒 的制备方法中，所述基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂或试剂盒为上文 所述基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂或试剂盒；所述基于焦磷酸测序 的病毒性出血性败血症病毒检测试剂或试剂盒的制备方法，包括将所述测序引物和/或所 述扩增病毒性出血性败血症病毒指纹序列的引物对的两条单链DNA独立包装的步骤。 为解决上述技术问题，本专利技术还提供了检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的 物质。 本专利技术所提供的检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质，为上述应用中或 上述试剂或试剂盒中所述检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质。 上述检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质，可包括下述P1和/或P2 : P1、所述病毒性出血性败血症病毒指纹序列的测序引物；P2、所述扩增病毒性出血性败血症病毒指纹序列的引物对。 上述检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质中，所述测序引物可为名称为 VHSV-S的序列表中SEQIDNo. 8所示的单链DNA;所述扩增病毒性出血性败血症病毒指纹 序列的引物对可为名称为VHSV-P的由序列表中SEQIDNo. 6所示的单链DNA和SEQID No. 7所示的单链DNA组成的引物对。 为解决上述技术问题，本专利技术还提供了病毒性出血性败血症病毒的检测方法1。 本专利技术所提供的病毒性出血性败血症病毒的检测方法1，包括下述H1)和H2)的步 骤： H1)以待测生物样品的核酸（RNA或DNA)为模板，选用58°C的退火温度，用所述 VHSV-P进行PCR扩增得到PCR产物； H2)检测步骤HI)得到的PCR产物的大小，如果所述PCR产物中含有205bp的DNA 片段，所述待测样品含有病毒性出血性败血症病毒或候选含有病毒性出血性败血症病毒； 如果所述PCR产物中不含205bp的DNA片段，所述待测样品不含病毒性出血性败血症病毒 或候选不含病毒性出血性败血症病毒。 为解决上述技术问题，本专利技术还提供了病毒性出血性败血症病毒的检测方法2。 本专利技术所提供的病毒性出血性败血症病毒的检测方法2,包括下述H3)和H4)的步 骤：H3)以待测生物样品的核酸（RNA或DNA)为模板，选用58°C的退火温度，用所述 VHSV-P进行PCR扩增得到PCR产物；H4)检测步骤H3)得到的PCR产物，如果所述PCR产物中含有所述病毒性出血性败 血症病毒指纹序列，所述待测样品含有病毒性出血性败血症病毒或候选含有病毒性出血性 败血症病毒；如果所述PCR产物中不含所述病毒性出血性败血症病毒指纹序列，所述待测 样品不含病毒性出血性败血症病毒或候选不含病毒性出血性败血症病毒。 上述病毒性出血性败血症病毒的检测方法2中，所述检测步骤H3)得到的PCR产 物为以所述VHSV-S为测序引物进行焦磷酸测序。 上文中，所述检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质可只由所述VHSV-S 和所述VHSV-P组成，也可只由所述VHSV-P组成，也可只由所述VHSV-S组成。 上文中本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测病毒性出血性败血症病毒指纹序列的物质在制备基于焦磷酸测序的病毒性出血性败血症病毒检测试剂或试剂盒中的应用；所述病毒性出血性败血症病毒指纹序列为序列表中SEQ ID No.5的第451‑467位核苷酸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：岳志芹，尹伟力，孙明君，梁君妮，任彤，张利峰，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：山东;37
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