一种核桃经酶解制备的多肽原料及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，特别涉及一种核桃经酶解制备的多肽原料及其应用。本发明专利技术采用碱溶酸沉技术结合生物酶解技术，高效提取核桃中的蛋白并降解碱溶物中的多糖；采用多酶协同水解，富集多肽原料中对记忆有改善作用的目标氨基酸含量，如丝氨酸，赖氨酸等；本发明专利技术采用两级超滤膜分离核桃蛋白酶解产物，一方面可以高效分离多肽，富集分子量在1000-10000Da之间的多肽，同时也达到了浓缩目标多肽的目的，简化了生产工艺的流程。本发明专利技术工艺操作简单、生产成本低、没有任何污染、蛋白回收率高，所制备的具有改善记忆作用的多肽活性强，可广泛应用于食品领域中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种核桃经酶解制备的多肽原料及其应 用。
技术介绍
引起记忆退化的原因有三种：老化引起的记忆退化，压力等引起的记忆衰退，先天 性或者机械损伤引起的记忆损伤。现如今，社会压力越来越大，人们的记忆衰退日显突出， 使得更多的科研工作者将目光投向对记忆的改善方面。 现阶段研究中多数学者将改善记忆放在中草药中活性物质的提取和研究，该法涉 及工艺复杂和有机试剂的残留，容易引入安全问题。另一个研究热点就是卵磷脂和多不饱 和脂肪酸深海鱼油等等，这些物质原料来源困难，成本昂贵，限制其工业化生产和推广。近 年来，人们对健康食品的需求更加迫切，使得科研工作者将目光投向于具有生理功能的食 源性蛋白肽，如奥地利依比威大药厂以猪脑为原料，结合酸水解和酶水解制备得到85%氨 基酸和15%短肽的混合物一一脑活素，将其用于临床治疗老年痴呆症中，具有明显的治疗 效果。但是脑活素是一种注射药物，价格昂贵且使用不方便，使其不适用于普通人群对记忆 改善的需求。因此，目前亟待解决的是寻求一种，安全，普遍，高效易于制备的改善记忆肽。 生物活性肽是蛋白质中20种天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的线性或环 形肽类的总称，是源于蛋白质的功能性化合物。生命活动中的细胞分化、神经激素递质调 节、免疫调节等都与生物活性肽有一定的相关性。如今，对生物活性肽的研究已经涉及了非 常广泛的方面，例如抗氧化肽，抗菌肽，免疫肽、降血压肽等。目前生物活性肽的制备方法主 要是蛋白质水解法，分为化学水解和生物酶水解，生物酶解法因具有生产条件温和，水解过 程可控，肽得率高以及安全的优势，逐渐取代了传统的化学法，成为制备生物活性肽的常用 方法。 核桃（Juglans regia L)又名胡桃、弟桃，属胡桃科胡桃属植物，是一种营养价值 和经济价值都很高的珍贵果木。作为一种经济树种，核桃在我国的栽培历史悠久，分布比较 广泛，尤其是在云南、四川、新疆等西南和西北地区种植较多。核桃也是一种高能食品，每 100克核桃可提供631kcal能量，其蛋白质和脂类占整个核桃仁重量84%以上，其中脂类占 60%左右。核桃蛋白由四种蛋白质构成，分别为清蛋白，球蛋白，醇溶蛋白和谷蛋白，分别占 核桃蛋白总量的6. 81%，17. 57%，5. 33%和70. 11%。研究表明，植物蛋白不仅资源丰富， 价格低廉，与动物蛋白相比，氨基酸组成更加平衡，必需氨基酸含量较高，且不含胆固醇。在 核桃中含有18种氨基酸，其中有8种必需氨基酸，精氨酸和谷氨酸含量都相当高，是一种 优质的蛋白资源。此外，在所有补脑食品中，核桃自古以来就是"健脑益智"的最佳补品，但 人们一直利用的是核桃油，那核桃蛋白也是否拥有益智的作用？有研究表明核桃蛋白也是 一种制备改善记忆的优质蛋白原料，可以增强大脑活动，增强记忆力，对青少年用脑过度、 中老年记忆衰退的防治具有很好的效果。但由于柏中含有大量的纤维素，且在提取油脂的 过程中，造成一定的蛋白质变性，极大增加了利用核桃蛋白制备改善记忆肽的工艺难度。 因此，以核桃柏为原料，高效提取核桃中的蛋白质，再进行改善记忆肽的提取和制 备，具有较大的经济和社会意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供。本专利技术制得的 具有改善记忆功效的核桃蛋白肽可以用于制备改善记忆保健品及药物。可单独使用或与其 他具有改善记忆作用的中草药复配按照常规制剂工艺制成保健食品。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案： 本专利技术提供了一种多肽，其由如下步骤制备获得： 步骤1 :取核桃与水混合后研磨，经第一酸碱调节剂调整pH值至8. 0~9. 0,搅 拌、离心，过滤收集滤液；取所述滤液与水解酶混合后酶解，经第二酸碱调节剂调整pH值至 4. 0~4. 2,搅拌、离心，过滤收集滤渣，经醇沉、水洗，获得核桃蛋白； 步骤2 :取步骤1制备获得的所述核桃蛋白与水混合，经Alcalase 2. 4L蛋白酶和 复合蛋白酶在50-55 °C的条件下酶解至水解度8-12%，灭酶，离心，过滤收集滤液，获得核 桃蛋白酶解液； 步骤3 :取步骤2制备获得的所述核桃蛋白酶解液过筛，经lOOOODa的超滤膜过 滤后收集透过液；将所述透过液再经l〇〇〇Da的超滤膜过滤，收集截留液，获得分子量在 1000-lOOOODa 的核桃肽。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述核桃可以为可以为核桃植物果实或核桃植 物果实获得的核桃柏。 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的制备方法步骤1中水解酶包括a-淀粉 酶和/或纤维素酶。 在本专利技术的一些具体实施方案中，以步骤1制备获得的所述核桃蛋白的质量为 计算基准，Alcalase 2. 4L蛋白酶的加入量为2000-3000U/g蛋白，复合蛋白酶的加入量为 1200-2500U/g 蛋白。 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的制备方法步骤1中所述a-淀粉酶的添 加量为核桃蛋白质量的1 %~2% (w/w)，所述纤维素酶的添加量为核桃质量的0. 5%~ 1.0% (w/w) 〇 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的制备方法步骤1中所述酶解的条件为在 50-55°C 下搅拌 120-180min。 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的制备方法步骤1中所述醇沉采用的醇为 体积浓度为45-60 %的乙醇水溶液。 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的制备方法步骤1中加入第一酸碱调节剂 之后所述搅拌、离心具体为在40-5CTC下搅拌60_90min，然后在3500r/min下离心10min。 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的制备方法步骤1中加入第而酸碱调节剂 之后所述搅拌、离心具体为搅拌30_60min，然后在3500r/min下离心10min。 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的制备方法步骤1中所述第一酸碱调节剂 为NaOH溶液，所述第二酸碱调节剂为HC1溶液。 优选的，第一酸碱调节剂为lmol/L的NaOH溶液。 优选的，第二酸碱调节剂为lmol/L的HC1溶液。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤2中所述灭酶具体为在100°C加热15min灭 酶。 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的制备方法步骤1中水的加入量为核桃质 量的10~15倍；步骤2中水的加入量为核桃蛋白质量的7~10倍；步骤3所述收集截留 液后还包括真空浓缩至固形物30-40 %、喷雾干燥的步骤。 本专利技术还提供了所述多肽在制备预防和/或治疗记忆退化的药物、食品和/或保 健品中的应用。 在本专利技术的一些具体实施方案中，多肽的应用中所述药物、食品和/或保健品的 剂型为口服液、胶囊剂、片剂、粉剂或颗粒剂。 本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果： (1)本专利技术采用碱溶酸沉技术结合生物酶解技术，降解碱溶物中的多糖，一方面释 放多糖结合的蛋白质，另一方面降低体系中的黏度，提高酸沉蛋白的提取率；利用乙醇溶液 清洗酸沉蛋白，可达到除油脱色的效果，且可对蛋白质进行适度变性，有利于后期酶解的进 行。 (2)本专利技术采用多酶协同水解，富集对记忆有改善作用的丝氨酸，赖氨酸等氨基 酸，提高成品多肽原料中的目标氨基酸含量，加之核桃蛋白中谷氨酸含量较高，可起到稳定 大脑内谷氨酸含量的作用。 (3)本专利技术采用两级超滤膜分离核桃蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核桃经酶解制备的多肽，其特征在于，其由如下步骤制备获得：步骤1：取核桃与水混合后研磨，经第一酸碱调节剂调整pH值至8.0～9.0，搅拌、离心，过滤收集滤液；取所述滤液与水解酶混合后酶解，经第二酸碱调节剂调整pH值至4.0～4.2，搅拌、离心，过滤收集滤渣，经醇沉、水洗，获得核桃蛋白；步骤2：取步骤1制备获得的所述核桃蛋白与水混合，经Alcalase 2.4L蛋白酶和复合蛋白酶在50～55℃的条件下酶解至水解度8～12％，灭酶，离心，过滤收集滤液，获得核桃蛋白酶解液；步骤3：取步骤2制备获得的所述核桃蛋白酶解液过筛，经10000Da的超滤膜过滤后收集透过液；将所述透过液再经1000Da的超滤膜过滤，收集截留液，获得分子量在1000‑10000Da的核桃肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵宏伟，郭晓蕾，马忠华，苏国万，赵谋明，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44